單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,.,*,器材準(zhǔn)備,1,.,器材準(zhǔn)備1.,自然界中的微生物,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的微生物大約13萬5千種，被認為非常危險的有600種，在人間傳染的病原微生物380種。這些微生物存在于地球的各個角落，從寒冷的極地到炎熱的赤道，從4.2千米地層深處到85千米高空（芽孢）,均有它們的蹤跡。,空氣、水、土壤、人體的體表以及與外界相通的腔道，均有不同種類和數(shù)量的微生物存在。,存在于人體消化道的,細菌,超過800種，數(shù)量可達100萬億（10,14,），菌體重量11.5公斤。,2,.,自然界中的微生物已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的微生物大約13萬5千種，被認為非常,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗綜合性實驗三,(P,38,),空氣與人體體表細菌學(xué)檢查,空氣的細菌學(xué)檢查P,38,手指皮膚的細菌學(xué)檢查P,41,3,.,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗綜合性實驗三(P38)空氣與人體體表細菌,空氣的細菌學(xué)檢查P,38,空氣是人類賴以生存的環(huán)境之一，也是重要的疾病傳播媒介?？諝庵械牟≡饕獊碜圆∪说呐判刮锖头置谖铩＿@些污物，因風(fēng)吹，以及人類日常活動，以氣溶膠的形式懸浮于空中，使空氣受到污染。,環(huán)境：不利于微生物生長。,種類：主要是病毒、真菌和細菌。在醫(yī)院，公共場所致病菌的數(shù)量比較多。,作用：可迅速全球傳播。,危害：引起培養(yǎng)基、生物制品的污染，病原菌引起呼吸道傳染病。,4,.,空氣的細菌學(xué)檢查P38 空氣是人類賴以生,實驗方法：自然沉降法是根據(jù)空氣中細菌氣溶膠粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培養(yǎng)基表面；培養(yǎng)以后，計數(shù)菌落形成單位（colony forming unit，CFU），了解空氣的污染情況。,實驗步驟：每組1塊平板，選擇采樣地點（實驗室、宿舍、衛(wèi)生間、飯?zhí)没蛉芜x地點），將平板蓋打開，蓋朝下放置在平板旁，平板暴露于空氣中15分鐘，然后蓋上蓋子，作標(biāo)記。37溫箱培養(yǎng)24小時，觀察結(jié)果。,CFU/m,3,50000N,AT86N(直徑7cm平板）。,N：平板上的菌落數(shù)。A：平板面積(平方厘米)。,T：采樣時間(分鐘)。,5,.,實驗方法：自然沉降法是根據(jù)空氣中細菌氣溶膠粒子，在地心引力的,空氣的細菌學(xué)檢查,組號,地點,時間(min),菌落形成單位(CFU),1,衛(wèi)生間,15,2,食堂,15,3,門診大廳,15,4,呼吸科病房,15,5,呼吸科ICU,15,6,外科病房,15,7,外科ICU,15,8,外科治療室,15,9,嬰兒室,15,10,實驗室,15,6,.,空氣的細菌學(xué)檢查組號地點時間(min)菌落形成單位(CFU),手指皮膚的細菌學(xué)檢查P,41,在日常生活中，手的接觸范圍廣，使用頻率高，受到污染的機會也最多。一只外觀比較“干凈”的手，可攜帶10萬個細菌、200多種病毒。因此，經(jīng)手傳播的疾病很多，范圍很廣，包括腸道傳染病、部分呼吸道傳染病、皮膚傳染病，以及一切可經(jīng)手間接傳播的疾病。,常住菌：,存在于皮膚表面、毛囊和皮脂腺。種類和數(shù)量比較恒定。附著在皮膚上比較牢固，用一般洗手方法，常不易去除。,暫住菌：,存在于皮膚表面經(jīng)常暴露的部位。暫住菌是外來的非正常菌群，種類和數(shù)量不定。引起人類致病的通常是暫住菌。,7,.,手指皮膚的細菌學(xué)檢查P41 在日常生活中，,醫(yī)務(wù)人員，經(jīng)常要與病人接觸，不管是直接接觸，還是間接接觸，都有傳播病菌的可能。雖然病菌的直接來源是患者,但是造成病菌擴散的主要途徑則是氣溶膠和醫(yī)務(wù)人員的手。因此，經(jīng)常洗手和消毒是控制醫(yī)院內(nèi)交叉感染的主要方法。,實際上，預(yù)防感染措施中，最簡單又十分有效的方法就是洗手。據(jù)測定，只用自來水洗手可使,暫住菌,總數(shù)減少40%，用肥皂洗手可減少80%以上。,洗手？,8,.,醫(yī)務(wù)人員，經(jīng)常要與病人接觸，不管是直接接觸，還是間接接觸，都,常規(guī)的洗手方法,（甲和丙操作）,將手充分浸濕，涂抹肥皂或洗滌液。,反復(fù)搓揉雙手，搓揉時間不應(yīng)少于 30秒。,用流水沖洗干凈，整個洗手過程不少于1分鐘。,能有效地去除大多數(shù)手上的暫住菌。,9,.,常規(guī)的洗手方法（甲和丙操作）將手充分浸濕，涂抹肥皂或洗滌液。,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗室,標(biāo)準(zhǔn)洗手方法,（乙和丁操作）,用流動的水沖洗，將手充分浸濕，涂抹肥皂、洗滌液。,分別搓擦1015次。,保持雙手低于肘部，,流水沖洗一分鐘以上。,1.掌心對掌心搓擦 2.手指交錯掌心對手背搓擦 3.手指交錯掌心對掌心搓擦,4.兩手互握互搓指背 5.拇指在掌中轉(zhuǎn)動搓擦 6.指尖在掌心中搓擦,10,.,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗室標(biāo)準(zhǔn)洗手方法（乙和丁操作）用流動的水沖洗，,1.掌心對掌心搓擦 2.手指交錯掌心對手背搓擦 3.手指交錯掌心對掌心搓擦,4.兩手互握互搓指背 5.拇指在掌中轉(zhuǎn)動搓擦 6.指尖在掌心中搓擦,11,.,1.掌心對掌心搓擦 2.手指交錯,醫(yī)務(wù)人員洗手指征,接觸傳染病患者之后。,接觸攜帶多耐藥性細菌的病人之后。,接觸病人的血液、體液、分泌物和排泄物之后。,接觸高危病室兩個病人之間、新生兒室兩個新生兒之間。,接觸舊錢幣之后。,上廁所,前,后。,進行微生物操作或作血、尿等生化、免疫測定之后。,在施行各種手術(shù)前后。,診斷、治療、護理特別易感染的病人之前。,進食之前。,12,.,醫(yī)務(wù)人員洗手指征接觸傳染病患者之后。12.,1,3,2,4,1,3,2,4,手指皮膚的細菌學(xué)檢查,第1格為洗手前，,第2格為洗手后，,第3格為消毒后，,第4格空白對照。,2人1塊平板,上:甲、丙常規(guī)洗手,下:乙、丁標(biāo)準(zhǔn)洗手,甲（丙）,乙（丁）,丙,丁,13,.,1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮膚的細菌學(xué)檢查第,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗綜合性實驗一,(P,2,),膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測（二）,臨床標(biāo)本的檢查程序,細菌的分離與培養(yǎng)P,7,目的要求：掌握分離、純化微生物的基本操作技術(shù)。,14,.,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗綜合性實驗一(P2)膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌,常見病原性球菌的檢查程序P47：,直接涂片、革蘭染色、鏡檢,膿汁、痰、咽部分泌物 觀察菌落性狀、溶血性、色素,血瓊脂平板培養(yǎng) 涂片染色鏡檢,挑取可疑菌落 生化反應(yīng),純培養(yǎng) 動物實驗,藥敏實驗,血液、穿刺液 肉湯增菌培養(yǎng) 培養(yǎng)液涂片染色境檢,常見腸道致病菌的檢查程序P48：,糞便 SS瓊脂、伊紅美藍平板培養(yǎng) 挑取可疑菌落,血清學(xué)鑒定,血、骨髓 增菌培養(yǎng) 雙糖鐵培養(yǎng)基 染色鏡檢,生化反應(yīng),15,.,常見病原性球菌的檢查程序P47：15.,平板劃線分離法：,借助于劃線，將混雜的,多種,細菌，在固體培養(yǎng)基表面分散成,單個,細菌，并固定在某一點上。培養(yǎng)以后細菌各自分裂繁殖，形成肉眼可見的細菌集團。,在固體培養(yǎng)基表面或基內(nèi)，由單個細菌在局部位置不斷增值的稠密群體稱為,單菌落,。,在固體培養(yǎng)基表面，由多個菌落融合在一起形成的細菌堆積物,稱為,菌苔,。,16,.,平板劃線分離法：16.,平板分區(qū)劃線分離法步驟（5區(qū)）,接種環(huán)燒灼滅菌，以免污染標(biāo)本。,取標(biāo)本在平板表面上方密集涂布510mm,2,。,燒掉接種環(huán)上多余的標(biāo)本（火焰背面烤干燒灼）。,晃動平板，當(dāng)看到平板表面象鏡面有反光的時候，保持這個角度，劃線時就能看清劃線痕跡，以便控制劃線。,接種環(huán)與平板呈3040度角，通過密集涂布部分13次，使接種環(huán)重新沾上少量標(biāo)本(細菌)，然后在平板表面，以曲線的形式，作大幅度來回連續(xù)劃線，邊劃邊退，線段要劃得長而密集，每區(qū)劃線不少于30條。,轉(zhuǎn)動平板，接種環(huán)通過第一區(qū)1次，同樣的方法劃第二區(qū)。如此依次劃完3,5區(qū)。,接種環(huán)燒灼滅菌,（火焰背面烤干燒灼）,，以免污染環(huán)境。,將平板倒置（蓋在下，底朝上），37,培養(yǎng)1824h,。,要充分利用平板面積，5區(qū)間隔盡量小，不能劃破瓊脂。,17,.,平板分區(qū)劃線分離法步驟（5區(qū)）17.,510mm,2,30條線,平板劃線不少于150條線,18,.,510mm2 30條線平板劃線不少于150條線18.,平板劃線分離法P,8,甲膿汁標(biāo)本普通平板（黃色）,乙膿汁標(biāo)本普通平板,丙糞便標(biāo)本伊紅美藍（紫色）,丁糞便標(biāo)本伊紅美藍,19,.,平板劃線分離法P819.,實驗分組,倆倆相對,4人為,一組,組號編在電源插座上。,每組按從前到后,從左到右的順序，分別編號為甲、乙、丙、丁。,甲 乙,4,丙 丁,甲 乙,3,丙 丁,甲 乙,2,丙 丁,甲 乙,1,丙 丁,甲 乙,5,丙 丁,甲 乙,8,丙 丁,甲 乙,7,丙 丁,甲 乙,6,丙 丁,甲 乙,10,丙 丁,甲 乙,9,丙 丁,講,臺,20,.,實驗分組倆倆相對4人為一組,組號編在電源插座上。甲,接種環(huán)燒灼滅菌,使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒紅即可。,使用后，先在火焰,背面將,把環(huán)上標(biāo)本烤干，再燒灼滅菌，以免標(biāo)本汽化，爆烈四濺，污染環(huán)境。,金屬桿快速通過火焰2,3次，殺滅表面微生物,21,.,接種環(huán)燒灼滅菌使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒,接種環(huán)直徑3mm,環(huán)面,垂直,離開液面：快速3ul,慢速1ul。,環(huán)面,水平,離開液面：快速6ul,慢速2ul。,22,.,接種環(huán)直徑3mm環(huán)面垂直離開液面：快速3ul,慢速1ul。環(huán),23,.,23.,24,.,24.,接種環(huán)與平板接觸點和劃線方法？,25,.,接種環(huán)與平板接觸點和劃線方法？25.,26,.,26.,510mm,2,30條線,平板劃線不少于150條線,27,.,510mm2 30條線平板劃線不少于150條線27.,37培養(yǎng)24小時,28,.,37培養(yǎng)24小時 28.,37培養(yǎng)24小時,29,.,37培養(yǎng)24小時 29.,37培養(yǎng)24小時,30,.,37培養(yǎng)24小時 30.,37培養(yǎng)24小時,31,.,37培養(yǎng)24小時 31.,安全警告,接種環(huán)接種平板一次，可產(chǎn)生幾十個微生物氣溶膠顆粒。,氣溶膠粒徑100um沉降很快，50um在0.4s內(nèi)擴散開，5um通過呼吸道直接到達肺泡。,Pike博士對實驗室感染統(tǒng)計分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴散引起的。,實驗時應(yīng)坐著，,在酒精燈半徑20厘米范圍內(nèi)操作，,保持安靜、有序，盡量少說話、少走動，,以免感染病原菌,。,32,.,安全警告接種環(huán)接種平板一次，可產(chǎn)生幾十個微生物氣溶膠顆粒。3,思考題,為何取鏈球菌作為空氣的衛(wèi)生指標(biāo)之一?,為什么金黃色葡萄球菌是醫(yī)院內(nèi)感染常見的重要病原菌?,為什么接種環(huán)使用前后必須燒灼滅菌？忽略了有什么危害?,做細菌培養(yǎng)時，平板為什么要倒置?,培養(yǎng)細菌的常用方法有哪些?,從臨床標(biāo)本中分離病原菌，應(yīng)注意哪些事項?,33,.,思考題為何取鏈球菌作為空氣的衛(wèi)生指標(biāo)之一?33.,實驗內(nèi)容,空氣的細菌學(xué)檢查P,38,普通平板(1組1塊）,手指皮膚的細菌學(xué)檢查P,41,普通平板(2人1塊 劃分8格）,平板劃線分離法P,8,甲，乙膿汁標(biāo)本普通平板(黃色，1人1塊）,丙，丁糞便標(biāo)本伊紅美藍(紫色，1人1塊）,34,.,實驗內(nèi)容空氣的細菌學(xué)檢查P3834.,常用器材擺放順序：電源插座試管架酒精燈污物盤。,試管架上器材：按接種針、接種環(huán)、油性筆和打火機的順序，分別放置在試管架中間兩行，靠近電源插座一側(cè)。,器材使用以后，必須放回原處，依次擺整齊。,35,.,常用器材擺放順序：電源插座試管架酒精燈污物盤。35.,酒精棉球,碘酒棉球,鑷子,電爐、石棉網(wǎng),手套,微生物學(xué)公共器材柜-2,（東側(cè)邊臺中段）,36,.,酒精棉球碘酒棉球鑷子電爐、石棉網(wǎng)手套微生物學(xué)公共器材柜-23,實驗室器材 整齊有序,37,.,實驗室器材 整齊有序37.,