疫源地消毒效果的微生物學(xué)評價疫源地消毒效果的微生物學(xué)評價4.7.1 目的 用微生物學(xué)指標(biāo)評價各種消毒措施對疫源地中被污染對象的消毒效果，以作為是否達(dá)到消毒合格的依據(jù)。4.7.2 器材(1)磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03 mol/L，pH 7.2)(2)采樣液（在 PBS 中加入相應(yīng)中和劑）(3)中和劑（經(jīng)鑒定試驗合格者）(4)采樣棉拭(5)普通營養(yǎng)肉湯與瓊脂，以及其他培養(yǎng)基(6)試管與吸管(7)水采樣瓶（250ml500ml）(8)水樣抽濾設(shè)備(9)酒精燈、記號筆和記錄表(10)接種環(huán)與鑷子(11)采樣規(guī)格板（中央空格為 5.0cm 5.0cm）4.7.3 評價標(biāo)準(zhǔn)符合以下全部要求者，可判為消毒處理合格：(1)消毒后消毒對象中不得檢出相應(yīng)的致病菌。(2)消毒對象中自然菌的殺滅率應(yīng) 90%。(3)有關(guān)指標(biāo)菌殘留菌量，不得超過國家有關(guān)規(guī)定。4.7.4 檢測方法4.7.4.1 物體表面的檢測方法4.7.4.1.1 檢測重點對象：以病人經(jīng)常接觸的物品作為檢測重點。例如，食（飲）具、門把手、床頭柜、便器等。4.7.4.1.2 消毒前采樣：將無菌棉拭在含 10ml PBS 試管中浸濕，并于管壁上擠壓至不出水后，對無菌規(guī)格板框定的被檢物體表面涂抹采樣(采樣面積為 5cm 5cm)，橫豎往返各 8 次，使棉拭四周都接觸到物體表面。以無菌操作方式將棉拭采樣端剪入原 PBS 試管內(nèi)，充分振打，進(jìn)行活菌培養(yǎng)計數(shù)。對不適宜用規(guī)格板采樣的物體表面（例如門把手，熱水瓶把等）可按實際面積采樣。4.7.4.1.3 消毒后采樣：消毒至設(shè)定的時間后，在消毒前采樣點附近的類似部位進(jìn)行棉拭涂抹采樣。除用采樣液代替 PBS 外，其余步驟和方法與消毒前采樣相同。4.7.4.1.4 將消毒前、后樣本 4h 內(nèi)送實驗室進(jìn)行活菌培養(yǎng)計數(shù)以及相應(yīng)致病菌與相關(guān)指標(biāo)菌的分離與鑒定?；罹囵B(yǎng)計數(shù)檢測要求與程序參見本規(guī)范 2 實驗技術(shù)規(guī)范。菌數(shù)計算公式為：物體表面菌數(shù)(cfu/cm2)=kN/SV 式中：k：稀釋量；N：平板上菌落數(shù)(cfu)；S：采樣面積(cm2)；V：接種量(ml)。4.7.4.1.5 相應(yīng)致病菌與相關(guān)指標(biāo)菌的采樣、分離與鑒定，參見有關(guān)傳染病診斷、消毒等方面的國家標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，由具備檢驗?zāi)芰Φ膶I(yè)實驗室進(jìn)行。4.7.4.2 排泄物、嘔吐物的檢測方法4.7.4.2.1 消毒前采樣：取 1 ml（或 1g）污染物放入含 9 ml PBS 的試管。振蕩混勻，取 0.5 ml 放入另一含 4.5ml PBS 的試管內(nèi)。在管壁上做好標(biāo)記。4.7.4.2.2 消毒后采樣：消毒達(dá)設(shè)定的作用時間時，進(jìn)行消毒后采樣。采樣步驟和方法除用采樣液代替 PBS 外，其余均與消毒前相同。4.7.4.2.3 將消毒前、后的樣品 4h 內(nèi)在送實驗室進(jìn)行活菌培養(yǎng)計數(shù)以及相應(yīng)致病菌與相關(guān)指標(biāo)菌的分離與鑒定?；罹囵B(yǎng)計數(shù)檢測方法參見本規(guī)范的實驗技術(shù)規(guī)范。菌數(shù)計算公式為：排泄物嘔吐物含菌量(cfu/g 或 cfu/ml)=kN/WV式中：k：稀釋量；N：平板上菌落數(shù)(cfu)；W：試驗樣本重量或體積(g 或 ml)；V：接種量(ml)。4.7.4.2.4 相應(yīng)致病菌與相關(guān)指標(biāo)菌的分離與鑒定，參見有關(guān)傳染病診斷、消毒等方面的國家標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，由具備檢驗?zāi)芰Φ膶I(yè)實驗室進(jìn)行。4.7.4.3 空氣的檢測方法4.7.4.3.1 消毒前采樣：將擬消毒房間的門窗關(guān)好，在無人的條件下經(jīng) 10 min 后，在室內(nèi)的四角和中央相當(dāng)于桌面高度處各放置一個無菌普通營養(yǎng)瓊脂平板。打開平皿蓋，暴露 5min10 min 后蓋好平皿蓋。對各平皿應(yīng)做好標(biāo)記。4.7.4.3.2 消毒后采樣：空氣消毒達(dá)到規(guī)定的時間后，在消毒前采樣的相同位置上，另放一組普通營養(yǎng)瓊脂平板。放置方法和暴露時間與消毒前采樣相同。同時取 2 個未經(jīng)采樣的普通營養(yǎng)瓊脂平板作為陰性對照。4.7.4.3.3 將消毒前、后的樣本和陰性對照樣本，盡快送實驗室，于37培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48 h。計數(shù)菌落。并按下式計算空氣中的菌數(shù)：式中：A：平板面積(cm2)；T：平板暴露的時間(min)；N：平均菌落數(shù)；cfu：菌落形成單位4.7.4.3.4 對各種致病菌與相關(guān)指標(biāo)菌的采樣、分離與鑒定，參見有關(guān)傳染病診斷、消毒等方面的國家標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，由具備檢驗?zāi)芰Φ膶I(yè)實驗室進(jìn)行。4.7.4.4 水的檢測方法4.7.4.4.1 消毒前采樣：取擬消毒水源水樣于 2 個無菌采樣瓶中，每瓶 100ml。4.7.4.4.2 消毒后采樣：消毒至規(guī)定作用時間后，分別將消毒后水樣采入 2 個裝有與消毒劑相應(yīng)中和劑的無菌采樣瓶中，每瓶 100ml。混勻，作用 10min。4.7.4.4.3 將消毒前、后的水樣 4h 內(nèi)送實驗室進(jìn)行檢測。將水樣注入濾器中，加蓋，在負(fù)壓為 0.05 Mpa 的條件下抽濾。濾完后，再抽氣 5s，關(guān)閉濾器閥門，取下濾器。用無菌鑷子夾取濾膜邊緣，移放在品紅亞硫酸鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上。濾膜的細(xì)菌截留面朝上，濾膜與培養(yǎng)基完全緊貼。將平皿倒置，放于 37恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 22h24h，觀察結(jié)果。計數(shù)濾膜上生長的帶有金屬光澤的黑紫色大腸桿菌菌落。4.7.4.4.4 評價：飲用水以消毒后水樣中大腸菌群下降至 0/100 ml 為消毒合格。污水消毒后，大腸菌群 500 個/L，連續(xù) 3 次采樣未檢相應(yīng)致病菌為消毒合格。水中含菌量計算公式為：水中含菌量(cfu/ml)=kN/WV式中：k：稀釋量；N：平板上菌落數(shù)(cfu)；W：試驗樣本重量或體積(ml)；V：接種量(ml)。4.7.4.4.5 對各種致病菌的采樣、分離、培養(yǎng)與鑒定，參見有關(guān)傳染病診斷、消毒等方面的國家標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，由具備檢驗?zāi)芰Φ膶I(yè)實驗室進(jìn)行。4.7.5 檢驗結(jié)果報告由檢驗人員填寫“疫點終末消毒效果檢驗記錄”