2019-2020年高三生物總復(fù)習(xí) 第40講 微生物的利用教案【考綱要求】 微生物的利用 考綱要求具體內(nèi)容(1)進(jìn)行微生物的分離和培養(yǎng)(2)測定某種微生物的數(shù)量(3)研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用(4)探討微生物的利用 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)培養(yǎng)基的配制(2)高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌(3)倒平板操作(4)平板劃線操作和稀釋涂布平板法(5)應(yīng)用選擇培養(yǎng)基分離某種特定的微生物 實(shí)驗(yàn)與探究能力【考點(diǎn)分析】考點(diǎn)試卷類型分值題型(1)進(jìn)行微生物的分離和培養(yǎng)(2)測定某種微生物的數(shù)量(3)研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用(4)探討微生物的利用(1)培養(yǎng)基的配制(2)高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌(3)倒平板操作(4)平板劃線操作和稀釋涂布平板法(5)應(yīng)用選擇培養(yǎng)基分離某種特定的微生物xx 寧夏15非選擇題xx 江蘇2選擇題xx 山東8非選擇題xx 江蘇3選擇題xx 廣東15非選擇題xx 寧夏15非選擇題xx 廣東10非選擇題xx 廣東10非選擇題xx 廣東10非選擇題xx 遼寧、寧夏15非選擇題xx 上海9非選擇題【考點(diǎn)預(yù)測】從近幾年高考試題看，微生物的營養(yǎng)、培養(yǎng)基的種類和配制、進(jìn)行微生物的培養(yǎng)與分離等內(nèi)容是命題的素材。培養(yǎng)基的種類與配制是本模塊的重點(diǎn)內(nèi)容，今年高考命題可能會(huì)從下面三個(gè)方面展開： 1培養(yǎng)基及其無菌技術(shù) 2應(yīng)用選擇培養(yǎng)基分離某種特定的微生物 3有關(guān)的實(shí)驗(yàn)原理、方法、步驟和預(yù)測 本專題內(nèi)容側(cè)重考查學(xué)生的實(shí)際應(yīng)用能力，由于很多課題的開展具有一定的難度，從考試的角度上講也很難實(shí)現(xiàn)動(dòng)手能力的考查。從近幾年掰課標(biāo)地區(qū)生物試題看注重考查基礎(chǔ)知識(shí)，同時(shí)進(jìn)行簡單應(yīng)用的考查?？疾橹R(shí)點(diǎn)分布主要集中在微生物的營養(yǎng)、培養(yǎng)基種類和配制、程序及其注意事項(xiàng)、無菌技術(shù)、微生物的選擇和鑒別培養(yǎng)等。以非選擇題為主，為選做題之一?！局R(shí)梳理】一、 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1、培養(yǎng)基2、無菌技術(shù)3、試驗(yàn)操作二、土壤中分解尿素的細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)1、試驗(yàn)設(shè)計(jì)2、設(shè)置對(duì)照3、篩選菌株三、分解纖維素的微生物的分離1、纖維素2、試驗(yàn)設(shè)計(jì)【重點(diǎn)解析】微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1、 微生物的營養(yǎng)物質(zhì)及功能 碳源 氮源 生長因子 水無機(jī)攔概念凡能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)凡能為微生物提供所需氮元素的營養(yǎng)物質(zhì)微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物來源無機(jī)碳源：C02、NaHC03等；有機(jī)碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等無機(jī)氮源：N2、氨、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等酵母膏、蛋白胨、動(dòng)植物組織提取液作用 主要用于構(gòu)成微生物的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；異養(yǎng)微生物的主要能源物質(zhì)主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物酶和核酸的組成成分溶劑、生化反應(yīng)的介質(zhì)酶的成分、調(diào)節(jié)滲透壓等說明不同種類的微生物，對(duì)碳源的需要差別較大。例：甲基營養(yǎng)菌只利用甲醇、甲烷；假單胞菌利用90多種含碳化合物對(duì)于異養(yǎng)微生物，含C、H、0、N的化合物既是碳源，又是氮源微生物需要補(bǔ)充生長因子是由于缺乏合成這些物質(zhì)所需要的酶或合成能力有限2、 培養(yǎng)基的種類劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途按物理性質(zhì) 液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基加凝固劑，(如瓊脂)微生物分離、鑒定，活菌計(jì)數(shù)，保藏菌種按用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；培養(yǎng)金黃色葡萄球菌，可在培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅一美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤) 3、 無菌技術(shù)消毒與滅菌 概念 常用方法 應(yīng)用的范圍消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法：在100煮沸56 min一般物品巴氏消毒法：7075煮30 min或在80煮15min對(duì)于一些不耐高溫的液體，如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如用體積分?jǐn)?shù)7075的酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等紫外線消毒：30 W紫外燈照射30 min接種室空氣滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼燒滅菌：酒精燈火焰接種工具的滅菌干熱滅菌：160l70下滅菌12 h玻璃器皿、金屬工具的滅菌高壓蒸汽滅菌：121100 kPa條件下，滅菌1530 min培養(yǎng)基及容器的滅菌4制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基操作分析 (1)培養(yǎng)基需冷卻至50時(shí)開始倒平板 原因：瓊脂是一種多糖，在98以上熔化，在44以下凝固，倒平板時(shí)高于50則會(huì)燙手，低于50時(shí)若不能及時(shí)操作，瓊脂就會(huì)凝固。 估計(jì)培養(yǎng)基溫度的方法是：培養(yǎng)基從滅菌鍋中取出冷卻一段時(shí)間后用手觸摸，感覺上以剛不燙手為準(zhǔn)。 (2)平板倒置原因：平板皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，培養(yǎng)基表面的溫度也較高，平板倒置后，既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止肛蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。5純化大腸桿菌操作過程中的注意事項(xiàng) 微生物的接種方法中最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。 (1)平板劃線法 操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前接種環(huán)都需要進(jìn)行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：第一次操作 每次劃線之前 劃線結(jié)束目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者從第二次以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。(2)稀釋涂布平板法 稀釋涂布平板的操作比較復(fù)雜，且各個(gè)細(xì)節(jié)均需保證“無菌”應(yīng)特別注意： 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適。 吸管頭不要接觸任何其他物體。吸管要在酒精燈火焰周圍使用。例1某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計(jì)數(shù)。請(qǐng)回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問題。 (1)培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了 和 。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本：成分是 和 。 (2)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是 。 (3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于 中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種 作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 (4)培養(yǎng)20小時(shí)后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中 種細(xì)菌。一般說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越 。 (5)如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐 細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱為 。解析：(1)蛋白胨主要是為細(xì)菌提供氮源，淀粉只能為細(xì)茵提供碳源，其實(shí)，兩者還都能為細(xì)菌提供能源。雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。(2)培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌，接種環(huán)等用灼燒滅茵，玻璃器皿等適于用干熱滅菌。(3)適宜的溫度條件下微生物繁殖速度快，恒溫箱可通過設(shè)定維持適宜的溫度；對(duì)照組應(yīng)接種不含細(xì)菌的樣品，比如接種無菌水。(4)每一種類型的菌落就表示有一種類型的細(xì)菌。茵落總數(shù)與湖水遭受細(xì)菌污染的程度呈正相關(guān)。(5)加入NaCl可制作篩選耐鹽細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基。蛋白質(zhì)中含有氮元素和碳元素，為細(xì)菌的生長提供了氮源和碳源，而淀粉只能提供碳源。培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽進(jìn)行滅茵。不同的微生物形成的茵落不同，有多種茵落即有多種細(xì)菌；污染越重，茵落總數(shù)就越多。耐鹽細(xì)茵可以在高濃度的NaCl培養(yǎng)基中生存，而其他的細(xì)菌則很難生存。答案：(1)氮源(碳源不作要求) 碳源 無機(jī)鹽 水(2)高壓蒸汽滅菌 (3)恒溫培養(yǎng)箱無菌水 (4)多高 (5)鹽(或NaCl)選擇性培養(yǎng)基例2苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選出只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，為土壤樣品。請(qǐng)問答下列問題： (1)中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入 作為碳源，中不同濃度碳源的培養(yǎng)基 (A影響；B不影響)細(xì)菌的數(shù)量，如果要測定中活細(xì)菌數(shù)量，常采用 法。(2)為對(duì)照，微生物在中不生長，在中生長，與培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于 使用 法可以在上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)? (3)如何比較不同菌株降解苯酚能力的大小?(4)實(shí)驗(yàn)過程中如何防止其他微生物的污染？解析：本題以實(shí)驗(yàn)材料作為背景考查微生物培養(yǎng)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)分析和設(shè)計(jì)能力等。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹?，從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，說明苯酚是該種細(xì)菌的碳源。如何比較不同菌株降解苯酚能力的大小?該問中應(yīng)注意自變量為不同菌株，苯酚的濃度是無關(guān)變量。由于苯酚顯酸性，不同菌株的菌種降解苯酚的能力不同，pH值會(huì)不同。可考慮用pH試紙來檢測作為因變量。實(shí)驗(yàn)中為防止微生物污染，應(yīng)從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過程保持無菌操作，如用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌等。答案：(1)苯酚A影響稀釋涂布平板法。 (2)的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源，培養(yǎng)基中加入苯酚作為碳源稀釋涂布平板法或平板劃線法 以防止培養(yǎng)基冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。(3)5支潔凈培養(yǎng)瓶一分別加入相同培養(yǎng)基(加等量的苯酚，用pH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基的pH值，用苯酚調(diào)試使它們的pH值相等，苯酚是唯一的碳源)一分別接種5種等量的來自不同菌株的菌種一在相同的適宜條件下培養(yǎng)相同的時(shí)間一再用pH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基的pH值。苯酚顯酸性，不同菌株的菌種降解苯酚的能力不同，5支；瓶內(nèi)培養(yǎng)基中的苯酚被分解的量不同，所以pH值不同。用pH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基的pH值，從而比較不同菌株降解苯酚能力的大小。 (4)從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過程保持無菌操作：a對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。b將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。c實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈的火焰附近進(jìn)行。d實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸?！緦?shí)戰(zhàn)訓(xùn)練】 材料：飼料原料中的磷元素有相當(dāng)一部分存在于植酸中，豬、禽等動(dòng)物由于缺乏有關(guān)酶，無法有效利用植酸，造成磷源浪費(fèi)，而且植酸隨糞便排除后易造成環(huán)境有機(jī)磷污染。植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成為目前重要的飼料添加劑之一。（09廣東卷）1.（10分）生物技術(shù)實(shí)踐（1）商品化植酸酶主要來自微生物。在產(chǎn)酶菌株篩選過程中，常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板，植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產(chǎn)生 ，可根據(jù)其大小選擇目的菌株，所得菌株需要進(jìn)一步測定植酸酶活性?；钚詼y定可以植酸鈉作為底物，活性可用一定條件下單位時(shí)間 表示。（2）利用上述所得菌株制備植酸酶的流程如下圖：中的主要成分為 ；中包含多種酸酶等多種蛋白質(zhì)。請(qǐng)寫出一種純化得到植酸酶的方法及其依據(jù)。（3）為建設(shè)基因工程菌，可用PCR等技術(shù)從上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反應(yīng)包含多次循環(huán)，每次循環(huán)包括三步： 。反應(yīng)過程中打開模板DNA雙鏈的方法是 。（4）除植酸酶外，微生物還應(yīng)用在 的生產(chǎn)中。答案：（1）透明圈 植酸鈉的消耗量（肌醇和磷酸的生成量）（2）小分子雜質(zhì) 凝膠色譜法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間分子大小，吸附性質(zhì)等差異進(jìn)行純化。（或電泳法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間電荷，分子大小等差異進(jìn)行純化。）（3）變性，復(fù)性，和延伸 加熱（4）蛋白酶，脂肪酶，纖維素酶解析：本題考查對(duì)微生物的分離和培養(yǎng)，蛋白質(zhì)的純化，酶活性鑒定等知識(shí)，結(jié)合實(shí)際應(yīng)用。（09遼寧、寧夏卷）2.【生物選修1生物技術(shù)實(shí)踐】（15分）（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮_、_和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、_、_等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。（2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行_（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和_；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能_。（3）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的_。（4）通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的_。（5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是_。（6）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過_處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。答案：（1）溫度 酸堿度 易培養(yǎng) 生活周期短（2）滅菌 消毒 損傷DNA的結(jié)構(gòu)（3）比例合適（4）鑒定(或分類)（5）將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生.（6）滅菌解析：（1）大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點(diǎn)，培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。（2）滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，所以對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌，消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物，操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒， 紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。（3）稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)保證樣品稀釋的比例適合。（4）對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定。（5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。（6）因?yàn)橛械拇竽c桿菌會(huì)釋放一種強(qiáng)烈的毒素，并可能導(dǎo)致腸管出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。（09上海卷）3 .（9分）氯苯化合物是重要的有機(jī)化工原料，原因不易降解，會(huì)污染環(huán)境。某研究小組依照下列實(shí)驗(yàn)方案（圖1）篩選出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培養(yǎng)基配方如表1。（1）配制號(hào)固體培養(yǎng)基時(shí)，除添加號(hào)液體培養(yǎng)基成分外，還應(yīng)添加1%的_。（2）培養(yǎng)基配制時(shí)，滅菌與調(diào)PH的先后順序是_。（3）從用途上來說，號(hào)培養(yǎng)基和號(hào)培養(yǎng)基分別屬于_培養(yǎng)基和_培養(yǎng)基。在號(hào)培養(yǎng)基中，為SP1菌提供氮源的成分是_。（4）在營養(yǎng)缺乏或環(huán)境惡劣時(shí)，SP1的菌體會(huì)變成一個(gè)圓形的休眠體，這種休眠體被稱為_。（5）將SP1菌接種在含不同濃度氯苯的號(hào)培養(yǎng)液中培養(yǎng)，得到生長曲線（如圖2）。從圖2可知SP1菌在_培養(yǎng)條件下最早停止生長，其原因是_。答案：（1）瓊脂（2）先調(diào)PH，后滅菌（3）通用 選擇 硝酸銨（4）芽孢（5）20mg/L氯苯 硝酸最早耗盡解析：本題主要考查微生物相關(guān)知識(shí)。（1）固體培養(yǎng)基必須含有適量的瓊脂；（2）配置培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先調(diào)PH后滅菌；（3）號(hào)培養(yǎng)基是為了獲得更多的菌株，屬于通用培養(yǎng)基，號(hào)培養(yǎng)基是為選擇出SP1菌株屬于選擇培養(yǎng)基，號(hào)培養(yǎng)基成分中含N物質(zhì)為硝酸銨，則應(yīng)由它為SP1菌株提供氮源；（4）在惡劣環(huán)境下一些菌體會(huì)形成芽孢休眠體，來度過不良環(huán)境；（5）SP1菌株是以氯苯為碳源，當(dāng)氯苯消耗盡菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)生存，故氯苯含量越少，SP1菌株越早停止生長?！久麕燑c(diǎn)撥】1無菌技術(shù)及其常用的方法 滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、紫外線滅菌法等 在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，因?yàn)椴僮鞯牡谝徊阶茻臃N環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。 劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。2.微生物的純化培養(yǎng)的兩種方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法 (1)平板劃線法 在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)。在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。由于劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。 (2)稀釋涂布平板法 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。每一個(gè)稀釋度下涂布三個(gè)平板作為重復(fù)組，不同稀釋度下涂布的平板形成對(duì)照組，且每個(gè)平板所用的樣液不超過01毫升。統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)注意選取菌落數(shù)介于30300個(gè)之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，且重復(fù)組結(jié)果要有相近性。