2019-2020年高考生物考前沖刺復(fù)習(xí) 第1部分 專(zhuān)題突破方略 專(zhuān)題十六 基因工程和細(xì)胞工程講義1.基因工程的誕生()2.基因工程的原理及技術(shù)(含PCR)()3.基因工程的應(yīng)用()4.蛋白質(zhì)工程()5植物的組織培養(yǎng)()6.動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆()7.細(xì)胞融合與單克隆抗體()1關(guān)于基因工程的3個(gè)誤區(qū)(1)誤認(rèn)為只能用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的片段。其實(shí)可以用不同限制酶切割，只要二者切割后產(chǎn)生相同黏性末端即可。(2)誤將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞當(dāng)作基因工程成功的標(biāo)志?；蚬こ淌欠癯晒Ρ憩F(xiàn)在目的基因是否成功表達(dá)。(3)誤認(rèn)為啟動(dòng)子就是起始密碼子，終止子就是終止密碼子。啟動(dòng)子和終止子位于DNA分子上，其作用和轉(zhuǎn)錄有關(guān)，起始密碼子和終止密碼子位于RNA上，其作用與翻譯有關(guān)。2關(guān)于細(xì)胞工程的2個(gè)誤區(qū)(1)誤認(rèn)為原生質(zhì)體的制備是原生質(zhì)體融合。原生質(zhì)體的制備是用纖維素酶和果膠酶處理植物細(xì)胞，使植物細(xì)胞壁去掉，而獲得原生質(zhì)體；而原生質(zhì)體融合是指去壁的植物細(xì)胞融合。(2)不能正確區(qū)分雜種細(xì)胞、重組細(xì)胞和雜交細(xì)胞。雜種細(xì)胞：植物體細(xì)胞雜交過(guò)程中，兩種細(xì)胞去除細(xì)胞壁之后形成的原生質(zhì)體融合，融合的原生質(zhì)體形成細(xì)胞壁之后形成的細(xì)胞叫雜種細(xì)胞。重組細(xì)胞：體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核卵母細(xì)胞之后形成的細(xì)胞叫重組細(xì)胞。雜交細(xì)胞：動(dòng)物細(xì)胞融合形成的細(xì)胞常稱為雜交細(xì)胞?？键c(diǎn)一基因工程(xx高考全國(guó)卷乙，40)某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用BamH酶切后，與用BamH 酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有_(答出兩點(diǎn)即可)，而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。(2)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的，其原因是_；并且_和_的細(xì)胞也是不能區(qū)分的，其原因是_。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落，還需使用含有_的固體培養(yǎng)基。(3)基因工程中，某些噬菌體經(jīng)過(guò)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自_。【解析】(1)作為運(yùn)載體的質(zhì)粒上應(yīng)有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，在細(xì)胞中能夠自我復(fù)制，且含有特殊的標(biāo)記基因。(2)未被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌和僅含環(huán)狀目的基因的大腸桿菌中均未導(dǎo)入質(zhì)粒載體，而質(zhì)粒上含有氨芐青霉素抗性基因，因此這樣的大腸桿菌在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。含有質(zhì)粒載體和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌中都含有氨芐青霉素抗性基因，二者在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中都能生長(zhǎng)，因此無(wú)法區(qū)分二者。根據(jù)題圖，用BamH 切割質(zhì)粒后將四環(huán)素抗性基因破壞，因此可將經(jīng)氨芐青霉素培養(yǎng)基篩選出的菌落置于含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上再次篩選，能在含四環(huán)素培養(yǎng)基上生存的是含有質(zhì)粒載體的大腸桿菌，不能生存的是含有插入目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌。(3)噬菌體為病毒，經(jīng)改造后作為載體時(shí)，其DNA復(fù)制所需原料來(lái)自受體細(xì)胞?！敬鸢浮?1)能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因(2)二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)含有質(zhì)粒載體含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或答含有重組質(zhì)粒)二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)四環(huán)素(3)受體細(xì)胞1獲取目的基因的3種途徑(1)從基因文庫(kù)中獲取。(2)PCR技術(shù)擴(kuò)增PCR原理：DNA復(fù)制原理。需要條件：模板DNA、引物、四種脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)。過(guò)程：DNA受熱變性解旋為單鏈、冷卻后RNA引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，然后在DNA聚合酶作用下延伸合成互補(bǔ)鏈。(3)化學(xué)方法人工合成。2基因表達(dá)載體的組成目的基因啟動(dòng)子終止子標(biāo)記基因復(fù)制原點(diǎn)。3使用限制酶的注意點(diǎn)(1)一般用同一種限制酶切割載體和獲取目的基因。(2)不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。4目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法(1)導(dǎo)入植物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法；花粉管通道法。(2)導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞：顯微注射法。(3)導(dǎo)入微生物細(xì)胞：Ca2處理法(感受態(tài)細(xì)胞法)。5目的基因的檢測(cè)與鑒定的方法(1)檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞：DNA分子雜交法。(2)檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA：分子雜交技術(shù)。(3)檢測(cè)目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)：抗原抗體雜交技術(shù)。(4)個(gè)體生物學(xué)水平鑒定：根據(jù)表達(dá)性狀判斷。6基因工程的?？键c(diǎn)(1)目的基因插入位置：?jiǎn)?dòng)子與終止子之間。(2)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞沒(méi)有堿基互補(bǔ)配對(duì)現(xiàn)象。(3)常用的受體細(xì)胞植物：受精卵、體細(xì)胞。動(dòng)物：受精卵。微生物：大腸桿菌、酵母菌等。(4)原核生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：多為單細(xì)胞、繁殖快、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少。考查基因工程操作的基本工具和流程1(xx高考全國(guó)卷丙改編)圖(a)中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoR 、BamH 和Sau3A 三種限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖(b)為某種表達(dá)載體的示意圖(載體上的EcoR 、Sau3A 的切點(diǎn)是唯一的)。根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題：(1)經(jīng)BamH 酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被_酶切后的產(chǎn)物連接，理由是_。(2)若某人利用圖(b)所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖(c)所示。這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有_，不能表達(dá)的原因是_。(3)DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有_和_，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是_。解析 (1)由圖(a)可知，盡管BamH 和Sau3A 兩種限制酶的識(shí)別位點(diǎn)不相同，但兩種酶切割后產(chǎn)生的DNA片段具有相同的黏性末端，故被BamH 酶切后得到的目的基因可以與圖(b)中表達(dá)載體被Sau3A 酶切后的產(chǎn)物連接。(2)運(yùn)載體上的啟動(dòng)子和終止子具有調(diào)控目的基因表達(dá)的作用，由于甲和丙的目的基因分別插入在啟動(dòng)子的上游和終止子的下游，故這兩個(gè)運(yùn)載體上的目的基因都不能被轉(zhuǎn)錄和翻譯。(3)常見(jiàn)的DNA連接酶是Ecoli DNA連接酶和T4DNA連接酶，但作用有所差別，T4DNA連接酶既能連接黏性末端，又能連接平末端，而Ecoli DNA連接酶只能連接黏性末端。答案 (1)Sau3A 兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端(2)甲和丙甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄(3)Ecoli DNA連接酶T4DNA連接酶T4DNA連接酶2(xx高考江蘇卷改編)如表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：限制酶BamH Bcl Sau3A Hind 識(shí)別序列及切割位點(diǎn)GGATCCCCTAGGTGATCAACTAGTGATC CTAGAAGCTTTTCGAA(1)用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用_兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)_酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于_態(tài)的大腸桿菌。(2)為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加_，平板上長(zhǎng)出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中_。(3)若BamH酶切的DNA末端與Bcl酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為_(kāi)，對(duì)于該部位，這兩種酶_(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開(kāi)。(4)若用Sau3A切圖1質(zhì)粒最多可能獲得_種大小不同的DNA片段。解析 (1)由題圖可知，質(zhì)粒的兩個(gè)標(biāo)記基因中都含有BamH的切點(diǎn)，因此不能用BamH進(jìn)行切割，結(jié)合題干及表中信息可知也不能用Sau3A進(jìn)行切割，所以只能用質(zhì)粒和目的基因中都含有切點(diǎn)的Bcl和Hind這兩種限制酶來(lái)切割目的基因和質(zhì)粒。酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)DNA連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒。要將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，要先用CaCl2處理大腸桿菌，使其處于感受態(tài)。(2)重組質(zhì)粒中只含有四環(huán)素抗性基因這一個(gè)標(biāo)記基因，所以為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素，含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌能在平板上長(zhǎng)出菌落。要用PCR擴(kuò)增目的基因，所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙，因?yàn)閺膱D2中可以看出，引物甲與引物丙與模板鏈結(jié)合后能完成目的基因的復(fù)制。(3)BamH酶切的DNA末端是，Bcl酶切的DNA末端是，那么這兩個(gè)末端連接后的連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為，由于連接以后的6個(gè)堿基對(duì)序列中沒(méi)有BamH和Bcl能識(shí)別的酶切位點(diǎn)，故對(duì)于該部位，BamH和Bcl都不能切開(kāi)。(4)因?yàn)橘|(zhì)粒的BamH和Bcl識(shí)別序列中都有Sau3A的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，所以用Sau3A切圖1質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。Sau3A切點(diǎn)及得到的7種大小不同的DNA片段情況如圖所示：切點(diǎn)在1的位置可以得到1種DNA分子；切點(diǎn)在1和2的位置可以得到2種DNA分子；切點(diǎn)在1和3的位置可以得到2種DNA分子；切點(diǎn)在2和3的位置可以得到2種DNA分子，故最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。答案 (1)Bcl和HindDNA連接感受(2)四環(huán)素引物甲和引物丙(3)都不能(4)73(xx懷化二模)我國(guó)科學(xué)家張道遠(yuǎn)先生通過(guò)從耐旱灌木白花檉柳中克隆得到TSOD基因，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)化到棉花中，獲得了具備更強(qiáng)抗旱性的T4代轉(zhuǎn)基因棉花株系。如圖為轉(zhuǎn)基因抗旱棉花的培育過(guò)程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)過(guò)程表示用_擴(kuò)增目的基因的方法。過(guò)程用到的工具酶有_。步驟一般用_處理農(nóng)桿菌，使其易吸收周?chē)h(huán)境中的DNA分子。(2)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞除步驟所示的方法外，還可采用_。如果受體細(xì)胞是動(dòng)物的受精卵，則一般采用的方法是_。(3)外植體培養(yǎng)成為試管苗的過(guò)程采用了_技術(shù)，利用了_的原理，步驟表示_。(4)為了確定抗旱轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功，可先用放射性同位素標(biāo)記的_作探針進(jìn)行分子水平鑒定，再_進(jìn)行個(gè)體水平鑒定棉花植株的抗旱性。答案 (1)PCR技術(shù)限制酶(限制性核酸內(nèi)切酶)、DNA連接酶Ca2(或CaCl2)(2)花粉管通道法(基因槍法)顯微注射法(3)植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞的全能性脫分化、再分化(4)抗旱基因(TSOD基因、目的基因)移栽到干旱土地中考查蛋白質(zhì)工程4(xx高考全國(guó)卷改編)已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)(P)，該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由305個(gè)氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸，改變后的蛋白質(zhì)(P1)不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)從上述資料可知，若要改變蛋白質(zhì)的功能，可以考慮對(duì)蛋白質(zhì)的_進(jìn)行改造。(2)以P基因序列為基礎(chǔ)，獲得P1基因的途徑有修飾_基因或合成_基因。所獲得的基因表達(dá)時(shí)是遵循中心法則的，中心法則的全部?jī)?nèi)容包括_的復(fù)制，以及遺傳信息在不同分子之間的流動(dòng)，即：_。 (3)蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程，其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā)，通過(guò)_和_，進(jìn)而確定相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列，據(jù)此獲得基因，再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì)，之后還需要對(duì)蛋白質(zhì)的生物_進(jìn)行鑒定。解析 (1)從題中所述資料可知，將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸后，該蛋白質(zhì)的功能發(fā)生了改變，此過(guò)程是通過(guò)對(duì)構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸的排列順序進(jìn)行改造，進(jìn)而改變了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，從而改變了蛋白質(zhì)的功能。(2)在蛋白質(zhì)工程中，目的基因可以以P基因序列為基礎(chǔ)，對(duì)生物體內(nèi)原有P基因進(jìn)行修飾，也可以通過(guò)人工合成法合成新的P1基因。中心法則的內(nèi)容如圖所示：由圖可知，中心法則的全部?jī)?nèi)容包括：DNA以自身為模板進(jìn)行的復(fù)制，DNA通過(guò)轉(zhuǎn)錄將遺傳信息傳遞給RNA，最后RNA通過(guò)翻譯將遺傳信息表達(dá)成蛋白質(zhì)；在某些病毒中RNA可自我復(fù)制(如煙草花葉病毒等)，在某些病毒中能以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成DNA(如HIV)，這是對(duì)中心法則的補(bǔ)充。(3)蛋白質(zhì)工程的基本途徑是預(yù)期蛋白質(zhì)功能設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列合成DNA表達(dá)出蛋白質(zhì)，經(jīng)過(guò)該過(guò)程得到的蛋白質(zhì)，需要對(duì)其生物功能進(jìn)行鑒定，以保證其發(fā)揮正常作用。答案 (1)氨基酸序列(或結(jié)構(gòu))(2)PP1DNA和RNA(或遺傳物質(zhì))DNARNA、RNADNA、RNA蛋白質(zhì)(或轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯)(3)設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)推測(cè)氨基酸序列功能5閱讀如下資料：資料甲：科學(xué)家將牛生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫芫阎校玫搅梭w型巨大的“超級(jí)小鼠”；科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因煙草。資料乙：T4溶菌酶在溫度較高時(shí)易失去活性。科學(xué)家對(duì)編碼T4溶菌酶的基因進(jìn)行了改造，使其表達(dá)的T4溶菌酶第3位的異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼幔谠摪腚装彼崤c第97位的半胱氨酸之間形成了一個(gè)二硫鍵，提高了T4溶菌酶的耐熱性?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)資料甲屬于基因工程的范疇。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠的受精卵中常用_法。構(gòu)建基因表達(dá)載體常用的工具酶是_和_。在培育有些轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，農(nóng)桿菌的作用是_。(2)資料乙中的技術(shù)屬于_工程的范疇，該工程是指以分子生物學(xué)相關(guān)理論為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)_進(jìn)行改造，或制造一種_的技術(shù)。在該實(shí)例中，引起T4溶菌酶空間結(jié)構(gòu)改變的原因是組成該酶肽鏈的_序列發(fā)生了改變。解析 (1)小鼠細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞，將基因表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用的方法是顯微注射法；構(gòu)建基因表達(dá)載體常用的工具酶是限制酶和DNA連接酶；將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，農(nóng)桿菌的作用是作為載體，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。(2)從資料乙中可以得出是對(duì)基因進(jìn)行改造，結(jié)果是得到耐熱性提高的蛋白質(zhì)，因此屬于蛋白質(zhì)工程的范疇，該工程是指以分子生物學(xué)相關(guān)理論為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有的蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新蛋白質(zhì)的技術(shù)。對(duì)基因進(jìn)行改造后，第3位的異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼?，該半胱氨酸與第97位的半胱氨酸之間形成二硫鍵，引起了空間結(jié)構(gòu)的改變，所以最終是由于氨基酸序列的改變導(dǎo)致了空間結(jié)構(gòu)的改變。答案 (1)顯微注射限制酶DNA連接酶感染植物，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中(2)蛋白質(zhì)現(xiàn)有的蛋白質(zhì)新蛋白質(zhì)氨基酸考點(diǎn)二細(xì)胞工程(xx高考全國(guó)卷甲，40)如圖表示通過(guò)核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物(二倍體)的流程?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)圖中A表示正常細(xì)胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可為_(kāi)。過(guò)程表示去除細(xì)胞核，該過(guò)程一般要在卵母細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)期再進(jìn)行，去核時(shí)常采用_的方法。代表的過(guò)程是_。(2)經(jīng)過(guò)多次傳代后，供體細(xì)胞中_的穩(wěn)定性會(huì)降低。因此，選材時(shí)必須關(guān)注傳代次數(shù)。(3)若獲得的克隆動(dòng)物與供體動(dòng)物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是_。(4)與克隆羊“多莉(利)”培育成功一樣，其他克隆動(dòng)物的成功獲得也證明了_?！窘馕觥?1)核移植過(guò)程中，供體的體細(xì)胞中性染色體組成可為XX或XY；去核時(shí)常采用顯微操作的方法；圖示過(guò)程表示胚胎移植。(2)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，經(jīng)過(guò)多次傳代培養(yǎng)，細(xì)胞中遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性會(huì)降低。(3)由于卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響，所以克隆動(dòng)物與供體性狀不完全相同。(4)克隆動(dòng)物的成功獲得證明了已分化的動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。【答案】(1)XX或XY顯微操作胚胎移植(2)遺傳物質(zhì)(3)卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響(4)動(dòng)物已分化體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性1細(xì)胞工程概念的?？键c(diǎn)(1)定向性：按照人的意愿。(2)目的：改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)和獲得細(xì)胞產(chǎn)品。2植物組織培養(yǎng)易錯(cuò)點(diǎn)(1)條件：無(wú)菌、離體。(2)培養(yǎng)基組成：無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)、激素、瓊脂。3植物體細(xì)胞雜交?？键c(diǎn)(1)制備原生質(zhì)體：用纖維素酶和果膠酶處理。(2)原生質(zhì)體融合：離心、振動(dòng)、電激、聚乙二醇。(3)雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志：新細(xì)胞壁的形成。4動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)?？键c(diǎn)(1)條件無(wú)菌、無(wú)毒；特殊營(yíng)養(yǎng)：血清、血漿；適宜的溫度和pH；氣體環(huán)境：含95%的空氣加5%CO2的混合氣體。(2)兩大階段：原代培養(yǎng)細(xì)胞株；傳代培養(yǎng)細(xì)胞系。5動(dòng)物細(xì)胞核移植易錯(cuò)點(diǎn)(1)受體細(xì)胞：去核的卵母細(xì)胞。(2)原因：營(yíng)養(yǎng)豐富；體積大，易操作；含有刺激細(xì)胞核恢復(fù)分裂能力的物質(zhì)。6核移植獲得的克隆動(dòng)物與提供細(xì)胞核的親本性狀可能不同(1)克隆動(dòng)物遺傳物質(zhì)來(lái)自兩個(gè)親本。(2)發(fā)育過(guò)程中可能發(fā)生基因突變或染色體變異。(3)外界環(huán)境條件可能引起不遺傳的變異。7制備單克隆抗體常考點(diǎn)(1)3種細(xì)胞特點(diǎn)不同B淋巴細(xì)胞：能分泌抗體，不能大量增殖。骨髓瘤細(xì)胞：能大量增殖，不能分泌抗體。雜交瘤細(xì)胞：既能分泌抗體，又能大量增殖。(2)2次篩選目的不同第1次：獲得能分泌抗體的雜種細(xì)胞。第2次：獲得能分泌所需特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。考查植物細(xì)胞工程1植物組織培養(yǎng)技術(shù)被廣泛應(yīng)用于培育無(wú)病毒植株、育種及獲得植物次生代謝產(chǎn)物等生產(chǎn)生活實(shí)際。如圖為番茄植株的培育過(guò)程。分析回答下列問(wèn)題：(1)過(guò)程中使用了_酶，獲得植物細(xì)胞原生質(zhì)體，此處使用的溶液濃度不宜過(guò)小，以防止細(xì)胞原生質(zhì)體_。(2)鋪平板類(lèi)似于微生物接種，該過(guò)程必須在_旁進(jìn)行操作。平板中添加蔗糖的目的除了提供營(yíng)養(yǎng)外，還有_的作用。(3)同一番茄植株不同部位的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)獲得的愈傷組織基因_(填“相同”“不相同”或“不一定相同”)；圖中屬于再分化的過(guò)程是_(填序號(hào))。(4)多倍體番茄植株所結(jié)果實(shí)中維生素含量更高，若想培育多倍體番茄，可選擇在圖中的過(guò)程中添加_進(jìn)行處理，也可以選擇在過(guò)程中添加_進(jìn)行處理。解析 (1)過(guò)程中使用了纖維素酶和果膠酶，破壞植物細(xì)胞的細(xì)胞壁，而不損傷細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，以獲得具有活力的單個(gè)的原生質(zhì)體，因?yàn)槭チ思?xì)胞壁的支撐作用，因此此處使用的溶液濃度不宜過(guò)小，以防止細(xì)胞原生質(zhì)體吸水漲破。(2)鋪平板類(lèi)似于微生物接種，該過(guò)程必須在酒精燈火焰旁進(jìn)行無(wú)菌操作。平板中添加蔗糖的目的除了提供營(yíng)養(yǎng)外，還有調(diào)節(jié)滲透壓的作用，保持細(xì)胞正常的形態(tài)和功能。(3)同一番茄植株不同部位的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)獲得的愈傷組織基因不一定相同。如體細(xì)胞培養(yǎng)得到的細(xì)胞中含兩個(gè)染色體組，而花粉離體培養(yǎng)得到的細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)目減半，因此基因不一定相同；圖中表示獲得外植體，表示已分化的細(xì)胞在一定因素作用下恢復(fù)細(xì)胞分裂能力，失去原有分化狀態(tài)的過(guò)程，叫做脫分化，表示已經(jīng)脫分化的愈傷組織在一定條件下，再分化出胚狀體，形成完整植株，這一過(guò)程叫做再分化。(4)若想培育多倍體番茄，可選擇在圖中的過(guò)程中添加聚乙二醇作為誘導(dǎo)劑來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞的融合，使融合細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)目加倍。也可以選擇在過(guò)程中添加秋水仙素，抑制細(xì)胞分裂時(shí)紡錘體的形成，從而使染色體數(shù)目加倍。答案 (1)纖維素酶和果膠吸水漲破(2)酒精燈火焰調(diào)節(jié)滲透壓(3)不一定相同(4)聚乙二醇秋水仙素2(xx鄭州模擬)為培育出含胡蘿卜素的“黃金大米”，科研人員提出以下兩套培育方案。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：甲方案：胡蘿卜素基因“黃金大米”乙方案：(1)甲方案中，胡蘿卜素基因能在玉米和水稻體內(nèi)出現(xiàn)相同表達(dá)結(jié)果的原因是_。若研究人員已知胡蘿卜素基因序列，可采用_方法獲得胡蘿卜素基因。過(guò)程中可用_技術(shù)檢測(cè)水稻體細(xì)胞DNA上是否插入了胡蘿卜素基因。(2)乙方案中，在體細(xì)胞雜交前需要用_酶除去細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體，誘導(dǎo)其融合的化學(xué)試劑常用_。通過(guò)獲得“黃金大米”幼苗需要經(jīng)過(guò)_兩個(gè)過(guò)程，依據(jù)的原理是_。在培養(yǎng)過(guò)程中，除了在培養(yǎng)基中添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還需要添加_。(3)與傳統(tǒng)育種方法相比，甲、乙兩套方案共同的優(yōu)點(diǎn)是_。解析 (1)玉米的基因能在水稻體內(nèi)表達(dá)的原因是所有生物共用一套遺傳密碼。若已知基因序列，可采用人工合成的方法獲得目的基因。檢測(cè)目的基因是否插入水稻體細(xì)胞中可用DNA分子雜交技術(shù)。(2)在植物體細(xì)胞雜交前需要用纖維素酶和果膠酶除去細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體，誘導(dǎo)體細(xì)胞融合的化學(xué)試劑常用聚乙二醇。乙方案中通過(guò)獲得“黃金大米”幼苗需要經(jīng)過(guò)脫分化和再分化兩個(gè)過(guò)程，依據(jù)的原理是植物細(xì)胞的全能性，在培養(yǎng)過(guò)程中，除了在培養(yǎng)基中添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還需要添加植物激素。(3)與傳統(tǒng)育種方法相比，兩套方案共同的優(yōu)點(diǎn)是克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。答案 (1)所有生物共用一套遺傳密碼(密碼子)人工合成DNA分子雜交(2)纖維素酶和果膠聚乙二醇脫分化和再分化(植物)細(xì)胞的全能性(植物)激素(生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素)(3)克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙(打破生殖隔離)動(dòng)物細(xì)胞工程3(xx襄陽(yáng)調(diào)研)如圖是利用人成纖維細(xì)胞(具有分裂能力，能在HAT培養(yǎng)基上存活)和小鼠骨髓瘤細(xì)胞(具有分裂能力，不能在HAT培養(yǎng)基上存活)進(jìn)行人類(lèi)基因定位的操作示意圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)該技術(shù)的基礎(chǔ)是_技術(shù)。(2)操作所用的成纖維細(xì)胞應(yīng)在_代以內(nèi)；誘導(dǎo)融合所運(yùn)用的生物學(xué)原理是_。該過(guò)程中，區(qū)別于植物原生質(zhì)體融合的方法是運(yùn)用_處理。(3)HAT培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基內(nèi)需要加入_等天然物質(zhì)。(4)培養(yǎng)時(shí)，pH一般為_(kāi)；操作過(guò)程中，加入烏本苷的目的是_。答案 (1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(2)10細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性滅活病毒(3)選擇血漿(血清)(4)7.27.4除去成纖維細(xì)胞4科研人員為了判定人體中某兩個(gè)基因是否在同一條染色體上，做了人鼠細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)。人鼠融合細(xì)胞在細(xì)胞增殖過(guò)程中會(huì)隨機(jī)地丟失人的染色體(人染色體數(shù)46條，鼠染色體數(shù)60條)，選出保留了要研究的人染色體的融合細(xì)胞，測(cè)定其是否出現(xiàn)待測(cè)基因的表現(xiàn)型(已知這些性狀都是小鼠細(xì)胞所沒(méi)有的)，從而判斷待測(cè)基因所屬的染色體。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)人鼠細(xì)胞融合常用的生物融合誘導(dǎo)劑是_，融合過(guò)程體現(xiàn)了細(xì)胞膜的_性。(2)如果僅考慮兩兩融合的細(xì)胞，融合體系中除含有人鼠融合細(xì)胞外，可能還有_、_。(3)細(xì)胞融合后的增殖方式是_，一個(gè)人鼠融合細(xì)胞，在不分裂時(shí)染色體數(shù)目最多是_條。(4)有五個(gè)人鼠融合細(xì)胞株A、B、C、D、E，分別測(cè)得甲、乙、丙、丁四種表現(xiàn)型，結(jié)果如表：保留的人染色體測(cè)定的性狀123甲乙丙丁細(xì)胞株ABCDE注：表示保留的染色體或具有某一性狀，表示沒(méi)有。實(shí)驗(yàn)表明：控制_兩個(gè)性狀的基因都在人的2號(hào)染色體上。(5)若想制備單克隆抗體，需要用已免疫的_細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合。解析 (1)動(dòng)物細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性，誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有物理法、化學(xué)法和生物法，生物法即用滅活的病毒處理。(2)如果僅考慮兩兩融合的細(xì)胞，融合體系中除含有人鼠融合細(xì)胞外，可能還有人人融合細(xì)胞、鼠鼠融合細(xì)胞。(3)細(xì)胞融合后的增殖方式是有絲分裂，一個(gè)人鼠融合細(xì)胞，在不分裂時(shí)染色體數(shù)目最多是：人的染色體數(shù)目鼠的染色體數(shù)目4660106。 (4)分析表格可知：A組有鼠的全部染色體和人的1號(hào)染色體，具有乙、丁性狀；D組只有鼠的全部染色體，具有丁性狀，可見(jiàn)丁性狀在鼠的染色體上，人的1號(hào)染色體上含有控制乙性狀的基因。B組有鼠的全部染色體和人的2號(hào)染色體，具有甲、丙、丁性狀；可見(jiàn)人的2號(hào)染色體上含有控制甲、丙性狀的基因。(5)若想制備單克隆抗體，需要用已免疫的B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合。答案 (1)滅活的病毒流動(dòng)(2)人人融合細(xì)胞鼠鼠融合細(xì)胞(3)有絲分裂106(4)甲、丙(5)B5如圖是某實(shí)驗(yàn)室做的通過(guò)動(dòng)物纖維母細(xì)胞等獲得單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)研究。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)X、Y、Z細(xì)胞的名稱分別是_、_、_。(2)過(guò)程類(lèi)似于植物組織培養(yǎng)技術(shù)中的_過(guò)程。與纖維母細(xì)胞相比，誘導(dǎo)干細(xì)胞的全能性較_。過(guò)程的實(shí)質(zhì)是_。(3)生產(chǎn)單克隆抗體一般不直接培養(yǎng)漿細(xì)胞，主要原因是_。(4)處需要篩選，從而得到_細(xì)胞，且培養(yǎng)該細(xì)胞的氣體環(huán)境為_(kāi)。答案 (1)骨髓瘤細(xì)胞抗原刺激過(guò)的B細(xì)胞(或漿細(xì)胞)雜交瘤細(xì)胞(2)脫分化高基因的選擇性表達(dá)(3)漿細(xì)胞高度分化，不能無(wú)限(或大量)增殖(4)能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤95%的空氣5%的CO21請(qǐng)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)回答下列問(wèn)題：(1)cDNA文庫(kù)屬于_文庫(kù)，其構(gòu)建方法是：用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的_反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中。(2)切割DNA分子的工具是_，它能使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的_鍵斷開(kāi)，從而形成黏性末端或平末端。(3)基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類(lèi)，其中只能“縫合”黏性末端的是_DNA連接酶；既可以“縫合”黏性末端，又可以“縫合”平末端的是_DNA連接酶。(4)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的方法是_；如果受體細(xì)胞是大腸桿菌，需要用_處理細(xì)胞，使之成為感受態(tài)細(xì)胞。解析 (1)基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)，cDNA文庫(kù)屬于部分基因文庫(kù)。(2)限制酶可切割DNA分子，使磷酸二酯鍵斷開(kāi)。(3)Ecoli DNA連接酶只能“縫合”黏性末端。T4DNA連接酶既可以“縫合”黏性末端，又可以“縫合”平末端。(4)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；如果受體細(xì)胞是大腸桿菌，需要用Ca2處理細(xì)胞，使之成為感受態(tài)細(xì)胞。答案 (1)部分基因mRNA(2)限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)磷酸二酯(3)EcoliT4(4)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法Ca22(xx龍巖調(diào)研)如圖是植物體細(xì)胞雜交過(guò)程示意圖，如果A、B植物均為二倍體，據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)圖中所示過(guò)程的原理有_。(2)圖中的過(guò)程是_。(3)植物體細(xì)胞融合成功的標(biāo)志是_，其產(chǎn)生與細(xì)胞內(nèi)_(細(xì)胞器)有關(guān)。(4)和過(guò)程分別是_和_過(guò)程。則該雜交植株有_個(gè)染色體組。(5)該技術(shù)的最顯著優(yōu)勢(shì)是_。解析 (1)植物體細(xì)胞雜交過(guò)程中有原生質(zhì)體A和原生質(zhì)體B的融合過(guò)程，其原理是細(xì)胞膜具有流動(dòng)性；將雜種細(xì)胞培育成新的個(gè)體，其原理是植物細(xì)胞具有全能性。(2)圖中的過(guò)程是去除植物細(xì)胞壁，制備原生質(zhì)體。(3)植物體細(xì)胞融合成功的標(biāo)志是形成新的細(xì)胞壁，植物細(xì)胞壁的形成與高爾基體有關(guān)。(4)雜種細(xì)胞通過(guò)脫分化形成愈傷組織，然后經(jīng)再分化形成雜種植株。圖中雜種植株是由兩個(gè)二倍體的細(xì)胞融合成的雜種細(xì)胞培育成的新個(gè)體，含有四個(gè)染色體組。(5)植物體細(xì)胞雜交可以克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。答案 (1)細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性、植物細(xì)胞具有全能性(缺一不可)(2)(去壁)制備原生質(zhì)體(3)形成新的細(xì)胞壁高爾基體(4)脫分化再分化四(5)克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙3資料顯示我國(guó)每年移植器官需求人數(shù)為150萬(wàn)，但每年器官移植手術(shù)量?jī)H為1萬(wàn)例。從2015年1月1日起，我國(guó)停止使用死囚作為移植供體來(lái)源。此舉受到人權(quán)組織的廣泛歡迎，但令中國(guó)移植器官短缺問(wèn)題更加嚴(yán)重。科研工作者把目光投向了治療性克隆的研究。(1)取病人體細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)_的卵母細(xì)胞中，構(gòu)成重組細(xì)胞。這個(gè)過(guò)程供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，原因是_。(2)重組細(xì)胞需要經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)分化，形成相應(yīng)的組織、器官才可用于移植，這個(gè)過(guò)程采用的技術(shù)是_。培養(yǎng)液中通常要添加_等一些天然成分，而氣體環(huán)境中CO2的主要作用是_。培養(yǎng)過(guò)程中，為了清除代謝產(chǎn)物，防止對(duì)細(xì)胞造成危害，應(yīng)定期_。(3)用此方式得到的器官進(jìn)行移植的優(yōu)點(diǎn)是_。(4)中國(guó)政府不反對(duì)治療性克隆，但禁止_。答案 (1)去核10代以內(nèi)的細(xì)胞能保持正常的二倍體核型(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)血清、血漿維持培養(yǎng)液的pH更換培養(yǎng)液(3)不發(fā)生免疫排斥(4)生殖性克隆4如圖是科學(xué)家利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素的部分過(guò)程。請(qǐng)結(jié)合相關(guān)知識(shí)回答問(wèn)題：(1)除圖示方法獲得目的基因(人胰島素基因)外，還可通過(guò)_的方法獲得目的基因。(2)圖示所獲得的人胰島素基因在大腸桿菌中不能表達(dá)，需要質(zhì)粒為其提供_等調(diào)控因子；質(zhì)粒含有一個(gè)或多個(gè)_切割位點(diǎn)，供目的基因插入其中；質(zhì)粒上還含有_，供重組DNA的鑒定和選擇。(3)圖中切割人胰島素基因和質(zhì)粒的酶(酶A)相同，其目的是_，將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌前，常需用_處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。(4)由于大腸桿菌中沒(méi)有_等結(jié)構(gòu)，其內(nèi)合成的人胰島素沒(méi)有活性，需要經(jīng)過(guò)再加工。解析 (1)獲取目的基因的方法除題圖所示方法外，還有人工合成法。(2)圖示所獲得的人胰島素基因由于不含啟動(dòng)子和終止子，因此需要運(yùn)載體質(zhì)粒提供。質(zhì)粒上還應(yīng)含有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，供目的基因插入其中；質(zhì)粒上還含有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。(3)用同一種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，以便獲得相同的末端。將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌前，需用Ca2處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。(4)由于大腸桿菌中沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等結(jié)構(gòu)，其內(nèi)合成的人胰島素沒(méi)有活性，需要經(jīng)過(guò)再加工。答案 (1)人工合成(2)啟動(dòng)子、終止子限制酶標(biāo)記基因(3)獲得相同的末端Ca2(4)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體5利用動(dòng)物乳腺生產(chǎn)產(chǎn)品的技術(shù)稱為動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器技術(shù)。青島“嶗山奶山羊乳腺生物反應(yīng)器的研制”項(xiàng)目生產(chǎn)的藥用蛋白具有表達(dá)效率高、成本低、安全性高、易于分離純化的優(yōu)點(diǎn)，可產(chǎn)生乙肝表面抗原及抗凝血酶等醫(yī)藥產(chǎn)品，造福人類(lèi)。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)在基因工程中，A表示_，如果直接從蘇云金芽孢桿菌中獲得抗蟲(chóng)基因，過(guò)程使用的酶區(qū)別于其他酶的特點(diǎn)是_，B表示_。(2)在研究過(guò)程中，研究人員首先從相關(guān)基因組中獲取了目的基因，并采用_技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，然后將目的基因與質(zhì)粒等載體組合形成了重組載體。在重組載體的構(gòu)建過(guò)程中需要的工具酶有_。(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的過(guò)程中，在過(guò)程中一般采用_，在過(guò)程中一般采用_，受體細(xì)胞一般是_。(4)由于轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物存在于山羊的乳汁中，檢測(cè)其體內(nèi)是否出現(xiàn)藥用蛋白，在分子水平上的檢測(cè)方法及結(jié)果是什么？_。(5)要確定目的基因(抗蟲(chóng)基因)導(dǎo)入棉花細(xì)胞后，是否能穩(wěn)定遺傳并表達(dá)，需進(jìn)行檢測(cè)和鑒定，請(qǐng)寫(xiě)出在個(gè)體水平上的鑒定過(guò)程：_。解析 基因工程的工具酶有限制酶、DNA連接酶，其中限制酶具有專(zhuān)一性：一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，并在特定的位點(diǎn)切割DNA分子。目的基因的檢測(cè)與鑒定有四種方法：采用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因；采用分子雜交技術(shù)檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA；采用抗原抗體雜交技術(shù)檢測(cè)目的基因是否翻譯成了蛋白質(zhì)；進(jìn)行個(gè)體水平的鑒定(進(jìn)行抗蟲(chóng)或抗病的接種實(shí)驗(yàn))。答案 (1)目的基因一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，并在特定的位點(diǎn)切割DNA分子重組DNA(2)PCR限制酶(限制性核酸內(nèi)切酶)、DNA連接酶(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法受精卵(4)從轉(zhuǎn)基因山羊的乳汁中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原抗體雜交。如果出現(xiàn)雜交帶，表明乳汁中出現(xiàn)了藥用蛋白；如果不出現(xiàn)雜交帶，表明乳汁中未出現(xiàn)藥用蛋白(5)讓害蟲(chóng)吞食轉(zhuǎn)基因棉花的葉子，觀察害蟲(chóng)的存活情況，以確定其是否具有抗蟲(chóng)性狀6(xx保定調(diào)研)如圖是人體免疫物質(zhì)的制備方法，表示不同的過(guò)程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)方法1中，細(xì)胞A應(yīng)具備的特點(diǎn)是_。體外培養(yǎng)細(xì)胞Y需要滿足以下條件：_、添加了血漿(或血清)的培養(yǎng)基、適宜溫度與pH、_的氣體環(huán)境等。(2)方法2中，通過(guò)得到的目的基因與細(xì)胞B中原有基因_(填“一定”或“不一定”)相同，過(guò)程必須用到的工具酶有_，結(jié)構(gòu)甲的組成必須包括_及目的基因等。(3)若用棉花生產(chǎn)抗體2，過(guò)程的受體細(xì)胞應(yīng)選用_，經(jīng)過(guò)一系列的過(guò)程得到再生植株。要確認(rèn)該抗體基因是否在再生植株中正確表達(dá)，通常采用_法檢測(cè)植株是否含有該種抗體。解析 (1)將能夠產(chǎn)生抗體的細(xì)胞B和細(xì)胞A融合后，雜種細(xì)胞Y可產(chǎn)生大量的抗體，則細(xì)胞A應(yīng)具有無(wú)限增殖的特點(diǎn)。體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞Y，需要滿足無(wú)菌無(wú)毒、添加有血清的培養(yǎng)基、適宜的溫度和pH、通入95%的空氣5%二氧化碳的氣體環(huán)境等條件。(2)通過(guò)反轉(zhuǎn)錄獲得的目的基因中，沒(méi)有內(nèi)含子等，和細(xì)胞B中原有的基因不一定相同；表示目的基因和載體結(jié)合，需要的工具酶有限制酶和DNA連接酶，結(jié)構(gòu)甲是基因表達(dá)載體，組成部件一定含有啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因等。(3)培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，則的受體細(xì)胞為土壤農(nóng)桿菌?？贵w基因正確表達(dá)后會(huì)產(chǎn)生抗體，通常采用抗原抗體雜交的方法來(lái)檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)。答案 (1)能無(wú)限增殖無(wú)菌、無(wú)毒含5%CO2、95%空氣(2)不一定限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)和DNA連接酶啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因(3)土壤農(nóng)桿菌抗原抗體雜交7(xx石家莊質(zhì)檢)如圖表示構(gòu)建轉(zhuǎn)入了人抗體基因的小鼠生產(chǎn)人源性單克隆抗體的流程。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)圖示過(guò)程涉及的生物技術(shù)有_、_、_。(2)構(gòu)建的基因表達(dá)載體除含有人抗體基因、標(biāo)記基因外，還應(yīng)具有_。(3)向轉(zhuǎn)基因小鼠注射特定的抗原后，從小鼠的_中提取B淋巴細(xì)胞；過(guò)程通常用_誘導(dǎo)。(4)細(xì)胞X是_，體外培養(yǎng)細(xì)胞X所用的培養(yǎng)液必須添加_等天然成分，培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生接觸抑制嗎？_。答案 (1)轉(zhuǎn)基因技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合(其他合理答案亦可)(2)啟動(dòng)子、終止子(3)脾臟聚乙二醇或滅活的病毒(4)雜交瘤細(xì)胞血漿或血清不會(huì)8如圖是培養(yǎng)生產(chǎn)人生長(zhǎng)激素的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)是含有人生長(zhǎng)激素基因的質(zhì)粒，為了使人生長(zhǎng)激素基因在羊乳腺細(xì)胞中表達(dá)，需要將目的基因與乳腺蛋白基因的_等調(diào)控組件重組在一起。中是根據(jù)_基因表達(dá)的性狀篩選出的細(xì)胞。(2)從白臉羊體內(nèi)分離出的組織要經(jīng)過(guò)酶處理變?yōu)閱蝹€(gè)細(xì)胞再培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)中使用的細(xì)胞通常在10代以內(nèi)，以保持細(xì)胞正常的_。(3)為了使產(chǎn)藥動(dòng)物種群迅速擴(kuò)大，現(xiàn)對(duì)階段的胚胎進(jìn)行分割，一次給受體母羊移入多個(gè)胚胎，胚胎分割時(shí)應(yīng)注意_。(4)細(xì)胞和細(xì)胞融合所利用的原理是_。產(chǎn)藥動(dòng)物的產(chǎn)生涉及_(填“胚胎細(xì)胞核移植”或“體細(xì)胞核移植”)技術(shù)，該技術(shù)的成功率較_。(5)移植后的胚胎能在受體子宮中存活的生理基礎(chǔ)為_(kāi)。解析 (1)因?yàn)槟康幕蛏蠜](méi)有啟動(dòng)子，要使人生長(zhǎng)激素基因在羊乳腺細(xì)胞中表達(dá)，需要將目的基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起。(2)細(xì)胞在傳至1050代左右時(shí)，增殖會(huì)逐漸緩慢，以至于完全停止，這時(shí)部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能會(huì)發(fā)生變化，所以實(shí)驗(yàn)中使用的細(xì)胞通常在10代以內(nèi)，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型。(3)在對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)，要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。(4)細(xì)胞融合所利用的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性。根據(jù)圖示可知，培養(yǎng)產(chǎn)生人生長(zhǎng)激素的過(guò)程涉及體細(xì)胞核移植技術(shù)，該技術(shù)的成功率較低。(5)受體子宮對(duì)外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能。答案 (1)啟動(dòng)子標(biāo)記(2)二倍體核型(3)將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割(4)細(xì)胞膜的流動(dòng)性體細(xì)胞核移植低(5)受體子宮對(duì)外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)9如圖是科學(xué)家利用現(xiàn)代生物技術(shù)研制用于癌癥治療的鼠人嵌合抗體的流程圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)對(duì)鼠源雜交瘤抗體進(jìn)行改造時(shí)，首先必須根據(jù)預(yù)期_，設(shè)計(jì)_，進(jìn)一步推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列，最終通過(guò)基因拼接，將鼠源抗體基因改造成鼠人嵌合抗體基因，然后導(dǎo)入鼠淋巴細(xì)胞中使其_。在Ig基因表達(dá)載體構(gòu)建的過(guò)程中，人和鼠的基因要用_切割核苷酸之間的磷酸二酯鍵。(2)圖中嵌合載體啟動(dòng)子位于基因的首端，它是_識(shí)別和結(jié)合的部位，終止子是_的終點(diǎn)；嵌合載體中還應(yīng)含有_，以便重組DNA的鑒定和篩選。(3)圖中的“抗體分泌細(xì)胞”的名稱是_，檢測(cè)目的基因在淋巴細(xì)胞中是否得到表達(dá)可采用_技術(shù)。(4)在制備單克隆嵌合抗體過(guò)程中要進(jìn)行篩選，第二次篩選的目的是_