專題五專題五 DNA和蛋白質(zhì)技術和蛋白質(zhì)技術ATGCAGCT5端端3端端5端端3端端-OH端為端為3磷酸基團的末端為磷酸基團的末端為5。體內(nèi)DNA復制DNA的雙螺旋結(jié)構形成的雙螺旋結(jié)構形成 能否在體外模擬體內(nèi)能否在體外模擬體內(nèi)DNA復制條件，進行復制條件，進行DNA擴增？擴增？1、 PCRPCR技術含義技術含義2 2、原理、原理 ：DNADNA的半保留復制的半保留復制 DNADNA的熱變性的熱變性一、基礎知識一、基礎知識（一）（一）PCRPCR原理：閱讀課本原理：閱讀課本P58-59P58-59 原料：模板：能量：3 3、PCRPCR反應的條件反應的條件4PCR 4PCR 循環(huán)過程循環(huán)過程 ：第一步加熱變性第一步加熱變性: :雙鏈雙鏈DNADNA解聚成為單鏈解聚成為單鏈PCR PCR 循環(huán)第二步循環(huán)第二步 ：引物與模板引物與模板DNADNA單鏈單鏈的互補序列配對結(jié)合的互補序列配對結(jié)合模板序列模板序列模板序列模板序列引物引物引物引物553 3555533553333Taq DNATaq DNA聚合酶聚合酶PCR PCR 循環(huán)第三步循環(huán)第三步 ：引物延伸引物延伸: :合成新的合成新的DNADNA鏈鏈第第1 1個個 PCR PCR 循環(huán)完成后循環(huán)完成后 ：得到得到兩個兩個拷貝的靶序列拷貝的靶序列循環(huán)循環(huán)次數(shù)次數(shù)DNADNA數(shù)量數(shù)量1 12 22 24 43 38 820201,048,5761,048,57630301,073,741,8241,073,741,8243030次循環(huán)后擴增的數(shù)量次循環(huán)后擴增的數(shù)量5 5、PCR PCR 循環(huán)的結(jié)果循環(huán)的結(jié)果 DNADNA聚合酶只能特異性地復制處于聚合酶只能特異性地復制處于兩個引物之間的兩個引物之間的DNADNA序列序列，使這段固，使這段固定長度的序列定長度的序列呈指數(shù)擴增呈指數(shù)擴增。從第二輪循環(huán)開始，從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的上一次循環(huán)的產(chǎn)物也作為模板參與反應產(chǎn)物也作為模板參與反應，并且由，并且由引引物物延伸而成的延伸而成的DNADNA單鏈會與引物單鏈會與引物（延伸而成的延伸而成的DNA單鏈）單鏈）結(jié)合結(jié)合，進行，進行DNADNA的延伸。的延伸。填空填空題題1.PCR儀加熱使（儀加熱使（ ）變性）變性, 復性使引物與模復性使引物與模板板DNA（ ）,延伸需將反應溫度升至中溫延伸需將反應溫度升至中溫( ),在（在（ ）的作用下）的作用下,以（以（ ）為原料合成新鏈。為原料合成新鏈。2.PCR經(jīng)（經(jīng)（ ）三個階段為一個）三個階段為一個循環(huán)。循環(huán)。DNA互補互補72Tap酶酶4種種dNTP變性、復性、延伸變性、復性、延伸PCR的基本原理是什么？用的基本原理是什么？用PCR擴增某一基因，擴增某一基因，必須預先得到什么樣的信息？必須預先得到什么樣的信息？。簡答簡答題題2006.廣東廣東 下列關于基因工程應用的敘述，正確的是（下列關于基因工程應用的敘述，正確的是（ ）A基因治療就是把缺陷基因誘變成正?；蚧蛑委熅褪前讶毕莼蛘T變成正?；駼基因診斷的基本原理是基因診斷的基本原理是DNA分子雜交分子雜交C一種基因探針能檢測水體中的各種病毒一種基因探針能檢測水體中的各種病毒D原核基因不能用來進行真核生物的遺傳改良原核基因不能用來進行真核生物的遺傳改良B解析：解析： 基因治療是把健康的外源基因?qū)氲交蛑委熓前呀】档耐庠椿驅(qū)氲接腥毕莼虻募毎?；一種基因探針能檢有缺陷基因的細胞中；一種基因探針能檢測相應的某一種特定的病毒；原核基因可測相應的某一種特定的病毒；原核基因可以用來進行真核生物的遺傳改良，例如用以用來進行真核生物的遺傳改良，例如用蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因改良棉花。蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因改良棉花。