專題2細(xì)胞工程,2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體,掌握動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的區(qū)別和聯(lián)系。2.簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體制備的過程。3.了解單克隆抗體在醫(yī)學(xué)實(shí)踐中的應(yīng)用，并說出其應(yīng)用實(shí)例。,通過復(fù)習(xí)植物體細(xì)胞雜交導(dǎo)入新課；首先直接闡明動(dòng)物細(xì)胞融合的概念，再提出動(dòng)物細(xì)胞融合的原理和誘導(dǎo)因素是什么？進(jìn)入相關(guān)知識(shí)點(diǎn)的學(xué)習(xí)；接著由出動(dòng)物細(xì)胞融合的意義引出單克隆抗體的制備，通過讓學(xué)生閱讀資料，找出單克隆抗體的概念，再通觀看視頻讓學(xué)生對(duì)單克隆抗體的制備過程有一個(gè)初步的印象，然后結(jié)合教材上的圖片，對(duì)該過程進(jìn)行歸納和整理；接著講述單克隆抗體的有點(diǎn)和應(yīng)用；最后通過課堂總結(jié)及課堂檢測(cè)，完善內(nèi)化課堂知識(shí)。通過視頻展示單克隆抗體的制備過程，并結(jié)合形象的圖片對(duì)單克隆抗體的制備過程進(jìn)行分解和整理，加深學(xué)生對(duì)兩次篩選的目的以及單克隆抗體和雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)進(jìn)行區(qū)分，以此來突破單克隆抗體的制備這一重點(diǎn)和難點(diǎn)。,雜種植株,融合的原生質(zhì)體AB,再生出細(xì)胞壁,脫分化,愈傷組織,再分化,植物細(xì)胞的融合,植物組織培養(yǎng),植物細(xì)胞A,原生質(zhì)體B,原生質(zhì)體A,雜種細(xì)胞AB,去壁,去壁,人工誘導(dǎo),融合完成的標(biāo)志,植物細(xì)胞B,一、動(dòng)物細(xì)胞融合,1.概念：,動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。,融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。,2.原理：,細(xì)胞膜的流動(dòng)性,細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng),兩個(gè)細(xì)胞正在融合,受精作用,動(dòng)物細(xì)胞融合過程示意圖,不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞,滅活的病毒,有絲分裂,兩個(gè)完整的雜交細(xì)胞,3.誘導(dǎo)方法：,物理法：,化學(xué)法：,生物法：,滅活的病毒,電激等,聚乙二醇（PEG),滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。,4.意義：,突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。,5.應(yīng)用：,最重要的用途是制備單克隆抗體,主要用于制備,單克隆抗體,獲得雜種植株,主要用途,物理、化學(xué)方法,（同左）,滅活的病毒,物理（離心、振動(dòng)、電刺激）,化學(xué)（聚乙二醇）,誘導(dǎo)方法,使細(xì)胞分散后誘,導(dǎo)細(xì)胞融合,去除細(xì)胞壁后誘,導(dǎo)原生質(zhì)體融合,細(xì)胞融合的方法,細(xì)胞膜的流動(dòng)性,細(xì)胞膜的流動(dòng)性、,植物細(xì)胞全能性,細(xì)胞融合的原理,動(dòng)物細(xì)胞融合,植物體細(xì)胞雜交,比較項(xiàng)目,植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較,讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念。,人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。,用單個(gè)效應(yīng)B細(xì)胞進(jìn)行克隆，得到的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。,提示1：對(duì)B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？,提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？,如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。,提示3：有什么方法能使一個(gè)細(xì)胞同時(shí)具備產(chǎn)生抗體的能力和無限增殖能力呢？,一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖,雜交瘤細(xì)胞,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),設(shè)計(jì)方案：,動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù),單克隆抗體,既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細(xì)胞,1975年英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn),單克隆抗體的制備過程,二、單克隆抗體的制備,1.單克隆抗體的制備過程,3.為何要進(jìn)行兩次篩選？,4.如何進(jìn)行第2次篩選？,培養(yǎng)在多孔培養(yǎng)板上，每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞。,第1次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞群。,1.本過程利用了哪些原理？,免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理,2.為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？,這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體。,2.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：,3.單克隆抗體的應(yīng)用,特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備,（1）作為診斷試劑最廣泛應(yīng)用具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速,（2）用于治療疾病和運(yùn)載藥物,“生物導(dǎo)彈”單克隆抗體藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭,主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。,兩個(gè)“過程”,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程,單克隆抗體制備過程,三個(gè)“一”,一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法滅活病毒,一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞,一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì),重點(diǎn),1.動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）A動(dòng)物細(xì)胞融合B胚胎移植C動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)D核移植,在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A結(jié)果是相同的B雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C操作過程中酶的作用相同D誘導(dǎo)融合的手段相同,.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞ABCD,C,4.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)方案：,（2）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？,（4）圖中B為過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承的遺傳特性，既能，又能。,（1）該實(shí)驗(yàn)方案的目的是.,（3）A是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_。,制備單克隆抗體,B細(xì)胞,抗體,細(xì)胞融合,滅活病毒,雙親細(xì)胞,產(chǎn)生特異性抗體,無限增殖,