實驗一 大黃中游離蒽醌的提取分離與檢識（一）目的要求學(xué)習(xí)羥基蒽醌類化合物的提取分離和檢識，通過實驗要求：1.掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法。2.掌握用pH梯度萃取法分離不同酸性的羥基蒽醌類化合物。3.掌握蒽醌類化合物的主要檢識方法。4.熟悉蒽醌類化合物的色譜檢識方法。5.了解用柱色譜法分離蒽醌類成分。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和藥用大黃Rheum officinale Baill.的干燥根及根莖。大黃中含有大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚及其苷，總含量約35。1大黃酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。黃色針狀結(jié)晶（升華法），mp.321322，330分解。能溶于堿水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，幾不溶于水。2大黃素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶(乙醇)，mp.256257，能升華。易溶于乙醇、堿水，微溶于乙醚、氯仿，幾不溶于水。3蘆薈大黃素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶（甲苯），mp.223224。易溶于熱乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黃色；溶于堿液呈紅色；氨水及硫酸中呈緋紅色。4大黃酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。橙黃色六方形或單斜結(jié)晶（乙醇或苯），mp.196197，能升華。易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，極微溶于石油醚、冷乙醇，幾不溶于水。大黃酚 R1=CH3 R2=H大黃素 R1=CH3 R2=OH大黃酸 R1=COOH R2=H大黃素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3蘆薈大黃素 R1=CH2OH R2=H5大黃素甲醚(physcion) 分子式C16H12O5，分子量284.26。磚紅色單斜針狀結(jié)晶，mp.203207，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。（三）實驗原理本實驗是根據(jù)大黃中的羥基蒽醌苷經(jīng)酸水解成游離羥基蒽醌，而游離羥基蒽醌不溶于水，可溶于氯仿、乙醚等親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，用氯仿從水解液中將游離羥基蒽醌提取出來，再利用各游離羥基蒽醌的酸性不同，采用pH梯度萃取法將其分離。其中大黃酚和大黃素甲醚的酸性十分近似，用pH梯度萃取法難以分離，可利用兩者的極性不同，采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離。（四）實驗內(nèi)容1. 提取與分離見書。2檢識（1）堿液試驗 分別取各蒽醌化合物結(jié)晶少許，置試管中，加1ml乙醇溶解，加數(shù)滴10氫氧化鈉試劑振搖，觀察顏色變化，羥基蒽醌應(yīng)顯紅色。（2）醋酸鎂試驗 分別取各蒽醌化合物結(jié)晶少許，置試管中，加1ml乙醇溶解，加數(shù)滴0.5醋酸鎂乙醇試劑，觀察顏色變化，羥基蒽醌應(yīng)顯橙、紅、紫等顏色。（3）薄層色譜檢識薄層板：硅膠G-CMC-Na試 樣：自制大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素的氯仿溶液對照品：上述各成分對照品乙醇溶液展開劑：石油醚（3060）-醋酸乙酯-甲酸（1551）上層溶液顯 色：在可見光下觀察，記錄黃色斑點的位置。然后再用濃氨水熏蒸或噴霧5醋酸鎂甲醇溶液，斑點應(yīng)顯紅色。（五）實驗說明及注意事項1大黃中蒽醌類化合物的種類、含量與大黃的品種、采集季節(jié)、炮制方法及貯存時間均有關(guān)系，實驗用藥材應(yīng)注意。2萃取用pH8緩沖液為檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液 ；pH9.9緩沖液為碳酸氫鈉-碳酸鈉緩沖液。配制好的緩沖液要測pH值。一般萃取大黃酸用pH78范圍的，萃取大黃素用pH9.511范圍的。3用各緩沖液進(jìn)行萃取時，采用一次性加入的方法，實驗證明，如將緩沖液分次萃取，分離效果不理想。4本實驗也適應(yīng)于以虎杖為原料的提取，但虎杖中不含大黃酸，故直接由大黃素開始分離。5色譜分離大黃酚及大黃素甲醚時，先用氯仿洗脫至出現(xiàn)黃色色帶時，改用氯仿醋酸乙酯（82）混合溶劑繼續(xù)洗脫，并更換收集器，每10ml為一份，按順序編號，直至色譜柱的第一色帶全部洗脫下來為止。各流分經(jīng)硅膠-CMC-Na板，氯仿醋酸乙酯(82)展開，用大黃酚和大黃素甲醚作對照，合并斑點相同流分，分別濃縮、放置析晶，即可獲得大黃酚及大黃素甲醚。（六）思考題1大黃中5種羥基蒽醌化合物的酸性和極性大小應(yīng)如何排列？為什么？2pH梯度萃取法的原理是什么？適用于哪些中藥成分的分離？3蒽醌類化合物及其苷的薄層色譜用什么作吸附劑、展開劑和顯色劑？4蒽醌類與醋酸鎂顯色反應(yīng)的必要條件是什么？其顏色反應(yīng)與羥基所在的位置有何關(guān)系？實驗二 補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的提取分離與檢識（一）目的要求學(xué)習(xí)香豆素類化合物的提取分離及檢識，通過實驗要求：1掌握用溶劑法提取香豆素類化合物的操作技術(shù)。2通過補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的分離，熟悉干柱色譜的操作技術(shù)。3掌握香豆素類化合物的檢識方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)補(bǔ)骨脂 為豆科植物補(bǔ)骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果實，全國各地多有栽培。含有多種呋喃香豆素類成分，主要含補(bǔ)骨脂內(nèi)酯 （補(bǔ)骨脂素）、異補(bǔ)骨脂內(nèi)酯 （異補(bǔ)骨脂素）和補(bǔ)骨脂次素等。其中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素為抗白癜風(fēng)的主要有效成分，具有光敏性質(zhì)。1.補(bǔ)骨脂素(psoralen) 又稱補(bǔ)骨脂內(nèi)酯，分子式C11H6O3，分子量186.16。無色針狀結(jié)晶（乙醇），mp.189190，有揮發(fā)性。溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。2.異補(bǔ)骨脂素(isopsoralen) 分子式 C11H6O3，分子量186.16。無色針狀結(jié)晶，mp.137138，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，難溶于冷石油醚。 補(bǔ)骨脂素 異補(bǔ)骨脂素3.補(bǔ)骨脂乙素(isobavachalcone) 又稱補(bǔ)骨脂酮、異補(bǔ)骨脂查耳酮。分子式C20H20O4，分子量324.36。黃色片狀結(jié)晶（甲醇-水），mp. 166167。4.補(bǔ)骨脂甲素(coryfolin) 又稱補(bǔ)骨脂黃酮，分子式C20H20O4，分子量324.36。無色針狀結(jié)晶，mp.191192。 補(bǔ)骨脂乙素 補(bǔ)骨脂甲素（三）實驗原理本實驗根據(jù)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇從中藥補(bǔ)骨脂中提取補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素等，并用活性炭吸附脫色，再依據(jù)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的極性差異，利用氧化鋁干柱色譜予以分離。（四）實驗內(nèi)容1.提取方法:見書方法:見書2.精制見書3.分離取色譜用中性氧化鋁12g，裝于直徑1.0cm28cm的干柱用色譜柱中。將補(bǔ)骨脂素精制品0.2g溶于少量甲醇，加入0.5g氧化鋁拌勻，60烘干，加樣，以苯-石油醚（41）并每50ml加入15滴丙酮為洗脫劑，展層至柱底，置紫外燈下觀察，用刀片切取兩段藍(lán)色熒光色帶，分別用甲醇回流提取，濾過，濾液回收溶劑至小體積，靜置析晶，抽濾，分別得到補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素結(jié)晶。4.檢識（1）異羥肟酸鐵反應(yīng) 取試樣少許于試管中，加入7鹽酸羥胺甲醇溶液23滴，再加10氫氧化鈉甲醇溶液23滴，于水浴上加熱數(shù)分鐘，冷卻后，加鹽酸調(diào)pH34，加1三氯化鐵12滴，觀察溶液顏色。（2）開環(huán)閉環(huán)試驗 取試樣少許加稀氫氧化鈉溶液12ml，加熱，觀察現(xiàn)象，再加稀鹽酸試劑數(shù)滴，觀察所產(chǎn)生現(xiàn)象。（3）熒光 取試樣少許溶于氯仿中，用毛細(xì)管點于濾紙上，晾干后在紫外燈下觀察熒光。（4）薄層色譜檢識薄層板：硅膠G-CMC-Na板試 樣：補(bǔ)骨脂素乙醇液異補(bǔ)骨脂素乙醇液對照品：補(bǔ)骨脂素對照品乙醇液異補(bǔ)骨脂素對照品乙醇液展開劑：苯-醋酸乙酯（91） 苯-石油醚（41）每50ml含丙酮15滴顯 色：紫外燈下觀察熒光（五）實驗說明及注意事項1提取藥材應(yīng)是未炮制過的補(bǔ)骨脂種子,其補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素等成分含量較高。2補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，具有內(nèi)酯類成分的通性，可用堿提酸沉法提取，但因補(bǔ)骨脂種子中含有大量油脂和糖類成分，易與堿水發(fā)生皂化反應(yīng)和形成膠狀物，致使難以濾過，降低收得率，故選用50乙醇提取而不用堿溶酸沉法提取。3由補(bǔ)骨脂種子中提取所得的精制品，為補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的混合物結(jié)晶，兩者含量近于11，但隨藥材品種、質(zhì)量等不同而有差異。在進(jìn)行干柱色譜分離之前，應(yīng)先進(jìn)行薄層色譜檢查，了解兩者含量情況。因兩者皆具有光敏作用，均為有效成分，故臨床應(yīng)用時，不必將兩者分開。（六）思考題1從中藥中提取香豆素類成分還有哪些方法？2異羥肟酸鐵反應(yīng)的機(jī)理是什么？實驗三 陳皮中橙皮苷的提取分離與檢識（一）目的要求學(xué)習(xí)橙皮苷的提取精制和檢識，通過實驗要求：1掌握橙皮苷的結(jié)構(gòu)特點和理化性質(zhì)及一般提取方法。2了解橙皮苷的檢識方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)陳皮為蕓香科植物福橘Citrus tangerina Hort.et Tanaka、朱橘Citrus erythrosa Tanaka的果皮。含揮發(fā)油和黃酮類成分橙皮苷、川陳皮素等。20D橙皮苷(hesperidin) 又稱陳皮苷、橘皮苷。分子式C28H34O15，為細(xì)樹枝狀針形結(jié)晶，mp.258262， -76（C=2,吡啶）。易溶于稀堿及吡啶，微溶于甲醇及熱冰醋酸，幾乎不溶于丙酮、苯及氯仿，在60溶于二甲基甲酰胺及甲酰胺。橙皮苷（三）實驗原理本實驗是根據(jù)陳皮中的主要成分是揮發(fā)油和橙皮苷，先用石油醚溶除揮發(fā)油，再用甲醇提取及用活性炭精制得到橙皮苷。也可利用橙皮苷易溶于稀堿水的性質(zhì)，進(jìn)行堿溶酸沉法提取，用甲酰胺精制得橙皮苷。（四）實驗內(nèi)容1提取、精制方法：見書方法：見書2檢識（1）Molish反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加乙醇1ml，在水浴中加熱溶解，加-萘酚乙醇溶液23滴振搖，傾斜試管45，沿管壁徐徐滴加1ml濃硫酸，靜置，觀察二層溶液界面變化，應(yīng)呈現(xiàn)紫紅色環(huán)。（2）鹽酸-鎂粉反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加乙醇2ml，在水浴中加熱溶解，加入鎂粉約50mg振搖后，滴加濃鹽酸34滴，產(chǎn)生劇烈反應(yīng)，溶液逐漸由黃色變?yōu)榧t色。（3）鋯-枸櫞酸反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加甲醇2ml，在水浴中加熱溶解，加2二氯氧鋯甲醇試劑3 4滴，呈鮮黃色。再加2枸櫞酸甲醇試劑34滴，黃色變淺。（4）三氯化鋁反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加甲醇2ml，在水浴中加熱溶解，加1三氯化鋁甲醇試劑23滴，呈鮮黃色。（5）四氫硼鈉反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加2ml甲醇溶解，加入等量的2四氫硼鈉的甲醇液，一分鐘后，再加濃鹽酸或濃硫酸數(shù)滴，生成紫色紫紅色。此反應(yīng)也可在濾紙上進(jìn)行。（6）薄層色譜檢識薄層板：硅膠G-CMC-Na板試 樣：自制橙皮苷乙醇飽和溶液對照品：橙皮苷對照品乙醇飽和溶液展開劑：醋酸乙酯-甲醇-水（1001713）顯色劑：噴霧0.5醋酸鎂試劑，在紫外燈下觀察顯天藍(lán)色熒光（五）實驗說明及注意事項1精制橙皮苷粗品時所用活性炭，應(yīng)事先用稀鹽酸處理。2橙皮苷微溶于甲醇，故工業(yè)生產(chǎn)中，以甲醇為溶劑提取時，應(yīng)加熱提取多次。實驗四 槐花米中蕓香苷的提取及槲皮素的制備與檢識（一）目的要求學(xué)習(xí)黃酮類化合物的提取、分離和檢識，通過實驗要求：1通過蕓香苷提取與精制，掌握堿溶酸沉法提取黃酮類化合物的原理和操作。2掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識方法。3掌握由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)槐花米為豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾，主要含蕓香苷（蘆?。?，含量高達(dá)1220，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖；槐花亦含蕓香苷，但含量較槐米為少。蕓香苷(rutoside) 分子式C27H30O16，分子量610.51。淡黃色針狀結(jié)晶，mp.177178，難溶于冷水（18000），略溶于熱水（1200），溶于熱甲醇（17）、冷甲醇（1100）、熱乙醇（130）、冷乙醇（1650），難溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀堿液中。槲皮素(quercetin) 又稱槲皮黃素，分子式C15H10O7，分子量302.23。黃色結(jié)晶，mp.314（分解）。溶于熱乙醇（123）、冷乙醇（1300），可溶于甲醇、丙酮、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等溶劑，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，幾不溶于水。 蕓香苷 R=葡萄糖鼠李糖 槲皮素 R=H（三）實驗原理由槐花米中提取蕓香苷的方法很多，本實驗是根據(jù)蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進(jìn)行提取和精制，或根據(jù)蕓香苷分子中具有酚羥基，顯弱酸性，能與堿成鹽而增大溶解度，以堿水為溶劑煮沸提取，其提取液加酸酸化后則蕓香苷游離析出。（四）實驗內(nèi)容1蕓香苷的提取方法：水提取法 見書方法 ：堿溶酸沉法見書2蕓香苷的精制見書4蕓香苷、槲皮素及糖的檢識取蕓香苷、槲皮素少許，分別用8ml乙醇溶解，制成試樣溶液，按下列方法進(jìn)行實驗，比較苷元和苷的反應(yīng)情況。（1）Molish反應(yīng)：取試樣溶液各2ml，分置于兩支試管中，加10-萘酚乙醇溶液1ml，振搖后傾斜試管45，沿管壁滴加1ml濃硫酸，靜置，觀察并記錄兩液面交界處顏色變化。（2）鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取試樣溶液各2ml，分別置于兩支試管中，各加入鎂粉少許，再加入鹽酸數(shù)滴，觀察并記錄顏色變化。（3）醋酸鎂反應(yīng)：取兩張濾紙條，分別滴加試樣溶液后，加1醋酸鎂甲醇溶液2滴，于紫外燈下觀察熒光變化，并記錄現(xiàn)象。（4）三氯化鋁反應(yīng)：取兩張濾紙條，分別滴加試樣溶液后，加1三氯化鋁乙醇溶液2滴，于紫外燈下觀察熒光變化，并記錄現(xiàn)象。（5）鋯-檸檬酸反應(yīng)：取試樣溶液各2ml，分別置于兩支試管中，各加2二氯氧鋯甲醇溶液34滴，觀察顏色，然后加入2檸檬酸甲醇溶液34滴，觀察并記錄顏色變化。（6）紙色譜檢識支持劑：新華層析濾紙(中速,20CM7CM)試 樣：自制蕓香苷乙醇溶液自制槲皮素乙醇溶液對照品：蕓香苷對照品乙醇溶液槲皮素對照品乙醇溶液展開劑：正丁醇-醋酸-水（415上層）或15醋酸溶液顯色劑：1）在可見光下觀察斑點顏色，再在紫外燈下觀察斑點顏色2）噴霧三氯化鋁試劑，置日光下及紫外燈下觀察并記錄斑點的顏色變化。（7）薄層色譜檢識薄層板：硅膠G-CMC-Na試 樣：自制1蕓香苷乙醇溶液自制1槲皮素乙醇溶液對照品：1蕓香苷對照品乙醇溶液1槲皮素對照品乙醇溶液展開劑：氯仿-甲醇-甲酸（1551）顯色劑：噴霧1三氯化鐵和1鐵氰化鉀水溶液，臨用時等體積混合（8）糖的紙色譜檢識取糖的供試液做徑向紙色譜，和已知糖液作對照，可得到與葡萄糖、鼠李糖相同Rf值的斑點。支持劑：新華層析濾紙（圓形）試 樣：糖的供試液對照品：1葡萄糖對照品水溶液1鼠李糖對照品水溶液展開劑：正丁醇-醋酸-水（415上層）顯色劑：噴霧苯胺-鄰苯二甲酸試劑，于105加熱10分鐘或紅外燈下加熱1015分鐘，顯棕色或棕紅色斑點。（五）實驗說明及注意事項1在提取前應(yīng)將槐花米略搗碎，使蕓香苷易于被熱水溶出。2本實驗直接用沸水由槐花米中提取蕓香苷，收得率穩(wěn)定，且操作簡便。如用堿溶酸沉法提取，加入石灰乳可以達(dá)到堿性溶解的目的，又可除去槐花7米中所含的大量粘液質(zhì)，但應(yīng)嚴(yán)格控制其堿性pH89，不可超過pH10。如pH值過高，加熱提取過程中蕓香苷可被水解破壞，降低收得率。加酸沉淀時，控制pH34,不宜過低，否則蕓香苷可生成yang鹽而溶于水，也降低收得率。3在提取過程中，加入硼砂的目的是使其與蕓香苷分子中的鄰二酚羥基發(fā)生絡(luò)合，既保護(hù)了鄰二酚羥基不被氧化破壞，又避免了鄰二酚羥基與鈣離子絡(luò)合（蕓香苷的鈣絡(luò)合物不溶于水），使蕓香苷不受損失，提高收得率。（六）思考題1 黃酮類化合物還有哪些提取方法？蕓香苷的提取還可用什么方法？2 酸水解常用什么酸？為什么用硫酸比用鹽酸水解后處理更方便？3 本試驗中各種色譜的原理是什么？解釋化合物結(jié)構(gòu)與Rf值的關(guān)系。4 試討論苷類成分的檢識程序。實驗五 穿心蓮內(nèi)酯的提取分離與檢識（一）目的要求學(xué)習(xí)中藥中內(nèi)酯類成分的提取分離及檢識，通過實驗要求：1掌握從穿心蓮中提取、分離穿心蓮內(nèi)酯的操作方法。2學(xué)習(xí)穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成物的制備。3熟悉穿心蓮內(nèi)酯類成分的性質(zhì)和檢識方法。4了解去除葉綠素的方法。（二）、主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)穿心蓮為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees的全草。穿心蓮中含有多種二萜類化合物，主要為穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯等。1穿心蓮內(nèi)酯(andrographolide) 又稱穿心蓮乙素。分子式C20H30O5，分子量350.44。無色方形或長方形結(jié)晶，味極苦。mp.230231，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶中，微溶于氯仿、乙醚、難溶于水、石油醚、苯。2新穿心蓮內(nèi)酯(neoandrographolide) 又稱穿心蓮丙素、穿心蓮新苷。分子式C26H40O8，分子量480.58。無色柱狀結(jié)晶，無苦味。mp.167168，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶中，微溶于水，較難溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚。22.5D3去氧穿心蓮內(nèi)酯(deoxyandrographolide) 又稱穿心蓮甲素。分子式C20H30O4，分子量334.44。無色片狀（丙酮、乙醇或氯仿）或無色針狀結(jié)晶（醋酸乙酯），味稍苦。mp.174175， -40（C=1,無水乙醇）。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶、氯仿，可溶于乙醚、苯中，微溶于水。4脫水穿心蓮內(nèi)酯(dehydroandrographolide) 分子式C20H28O4,分子量332.42。無色針狀結(jié)晶（30或50乙醇），mp.204。易溶于乙醇、丙酮，可溶于氯仿，微溶于苯，幾不溶于水。穿心蓮內(nèi)酯 去氧穿心蓮內(nèi)酯 新穿心蓮內(nèi)酯 脫水穿心蓮內(nèi)酯（三）實驗原理本實驗是利用穿心蓮內(nèi)酯類成分易溶于甲醇、乙醇、丙酮等溶劑的性質(zhì)，選用乙醇為提取溶劑進(jìn)行提取。穿心蓮中含有大量葉綠素，故用活性炭吸附，除去葉綠素等脂溶性雜質(zhì)。又根據(jù)穿心蓮內(nèi)酯與去氧穿心蓮內(nèi)酯在氯仿中溶解度不同而進(jìn)行分離。也可利用穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯及新穿心蓮內(nèi)酯結(jié)構(gòu)上的差異所表現(xiàn)的極性不同，用氧化鋁柱色譜分離。（四）實驗內(nèi)容1 提取方法：略方法：略2 精制 略3 分離 略4穿心蓮內(nèi)酯類成分的檢識（1）異羥肟酸鐵反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶數(shù)毫克，加乙醇1ml溶解，加7鹽酸羥胺甲醇溶液23滴，加10氫氧化鉀甲醇溶液12滴使呈堿性，于水浴上加熱2分鐘，放冷后，加稀鹽酸使呈酸性，加1三氯化鐵溶液12滴，混勻，呈紫紅色。（2）Legal反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許，加乙醇1ml溶解，加0.3亞硝酰鐵氰化鈉溶液24滴，加10氫氧化鈉溶液12滴，呈紫色。（3）Kedde反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許，加乙醇1ml溶解，加堿性3,5-二硝基苯甲酸試劑2滴，呈紫色。（4）穿心蓮內(nèi)酯類成分的薄層色譜檢識薄層板：硅膠G-CMC-Na試 樣：自制穿心蓮內(nèi)酯乙醇溶液對照品：穿心蓮內(nèi)酯對照品乙醇溶液展開劑：氯仿-甲醇（91）氯仿-正丁醇-甲醇（212）顯色劑：噴霧Kedde試劑，加熱顯色（五）實驗說明及注意事項1穿心蓮內(nèi)酯類化合物為二萜類內(nèi)酯，性質(zhì)極不穩(wěn)定，易氧化、聚合而樹脂化。因此提取所用的穿心蓮應(yīng)是當(dāng)年產(chǎn)的新藥材，并且要未受潮變質(zhì)的莖葉部分，否則內(nèi)酯含量明顯下降至極低，難以提取得到。2提取時，如用熱乙醇加熱回流提取穿心蓮總內(nèi)酯，能同時提出大量穿心蓮中的葉綠素、樹脂以及無機(jī)鹽等雜質(zhì)。使析晶和精制較為困難，因此本實驗用冷浸法和超聲波振蕩法提取。3以超聲波振蕩法提取省時，濃縮析晶時脂溶性雜質(zhì)少，易得到黃色結(jié)晶，得率高。4穿心蓮內(nèi)酯的析晶宜在含乙醇量稍高的情況下進(jìn)行，此時晶形與結(jié)晶的純度都較好。當(dāng)溶液的含水量較高，或粘稠度太大時，往往不易析出結(jié)晶。（六）思考與練習(xí)1葉綠素除用活性炭吸附法去除外，還可采用哪些方法去除？2穿心蓮總內(nèi)酯的分離可采用哪些方法？試比較各種方法的優(yōu)缺點。3根據(jù)穿心蓮內(nèi)酯類成分的結(jié)構(gòu)，試判斷其極性的強(qiáng)弱，在進(jìn)行吸附薄層色譜時其Rf值大小如何？4Legal反應(yīng)和Kedde反應(yīng)的機(jī)理是什么？什么樣的結(jié)構(gòu)才有陽性反應(yīng)？實驗六 八角茴香油的提取分離與檢識（一）目的要求學(xué)習(xí)揮發(fā)油的提取和各類組成成分的檢識，通過實驗要求：1掌握揮發(fā)油的水蒸氣蒸餾提取法。2學(xué)習(xí)揮發(fā)油的一般檢識及揮發(fā)油中固體成分的分離。3掌握揮發(fā)油中化學(xué)成分的薄層點滴定性檢識。4了解揮發(fā)油單向二次薄層色譜檢識。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)八角茴香為木蘭科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.的干燥成熟果實。分布于福建、廣東、廣西、貴州、云南等省區(qū)。含揮發(fā)油49，一般約5（果皮中較多）、脂肪油約22（主要存在于種子中）及蛋白質(zhì)、樹膠、樹脂等。揮發(fā)油中主要成分是茴香醚，約為總揮發(fā)油的8090，冷時常自油中析出，故稱茴香腦。此外，尚含莽草酸及少量甲基胡椒酚、茴香醛、茴香酸等。 茴香醚（腦） 甲基胡椒酚 茴香醛 莽草酸 茴香酸1茴香腦(anethole) 又稱大茴香醚、茴香烯、茴香醚。分子式C10H12O，分子量148.21。為白色結(jié)晶，mp.21.4，bp.235。與乙醚、氯仿混溶，溶于苯、醋酸乙酯、丙酮、二硫化碳及石油醚，幾不溶于水。2莽草酸(shikimic acid) 又稱毒八角酸。分子式C7H10O5,分子量174.15。無色針狀結(jié)晶（甲醇醋酸乙酯），mp.190191。在100ml水中可溶解18g，100ml無水乙醇中可溶解2.5g，幾乎不溶于氯仿、苯、石油醚。3甲基胡椒酚(methylchavicol) 分子式C10H12O，為無色液體，bp.215216。4茴香醛 (anisaldehyde) 分子式C8H8O2，有兩種狀態(tài)：棱晶，mp.36.3，bp.236；液體，mp.0，bp.248。5.茴香酸 (anisic acid) 分子式C8H8O3，為針狀結(jié)晶，mp.184，bp.275280。（三）實驗原理本實驗是水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油的通法。揮發(fā)油的組成成分較復(fù)雜，常含有烷烴、烯烴、醇、酚、醛、酮、酸、醚等官能團(tuán)。因此可以用一些檢出試劑在薄層板上進(jìn)行點滴試驗，從而了解組成揮發(fā)油的成分類型。揮發(fā)油中各類成分的極性互不相同，一般不含氧的烴類和萜類化合物極性較小，在薄層色譜板上可被石油醚較好的展開；而含氧的烴類和萜類化合物極性較大，不易被石油醚展開，但可被石油醚與醋酸乙酯的混合溶劑較好的展開。為了使揮發(fā)油中各成分能在一塊薄層色譜板上進(jìn)行分離，常采用單向二次色譜法展開。（四）實驗內(nèi)容1茴香腦的提取分離取八角茴香50g，搗碎，置圓底燒瓶中，加適量水浸泡濕潤，按一般水蒸氣蒸餾法進(jìn)行蒸餾提取。也可將搗碎的八角茴香置于揮發(fā)油測定器的燒瓶中，加蒸餾水500ml與數(shù)粒玻璃珠，連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，并使溢流入燒瓶時為止。緩緩加熱至沸，至測定器中油量不再增加，停止加熱，放冷，分取油層（見圖）。實圖-1 揮發(fā)油測定器將所得的八角茴香油置冰箱中冷卻1小時，即有白色結(jié)晶析出，趁冷濾過，用濾紙壓干。結(jié)晶為茴香腦，濾液為析出茴香腦后的八角茴香油。2檢識（1）油斑試驗 取八角茴香油適量，滴于濾紙片上，常溫下（或加熱烘烤），觀察油斑是否消失。（2）薄層色譜板點滴反應(yīng) 取硅膠G薄層色譜板1塊，用鉛筆按表畫線。將揮發(fā)油試樣用510倍量乙醇稀釋后，用毛細(xì)管分別滴加于每排小方格中，再將各種檢識試劑用滴管分別滴于各揮發(fā)油試樣斑點上，觀察顏色變化。初步推測每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的類型。實-表1 揮發(fā)油薄層板點滴反應(yīng) 試劑試樣試劑1三氯化鐵試劑22,4-二硝基苯肼試劑3堿性高錳酸鉀試劑4香草醛-濃硫酸試劑50.05溴酚藍(lán)試劑6硝酸鈰銨試劑1 2 3 4 5 6八角茴香油檸檬油丁香油薄荷油樟腦油桉葉油松節(jié)油空白對照（3）揮發(fā)油薄層色譜單向二次展開檢識 取硅膠G-CMC-Na薄層板（6cm15cm）一塊，在距底邊1.5cm及8cm處分別用鉛筆畫起始線和中線。將八角茴香油溶于丙酮，用毛細(xì)管點于起始線上呈一長條形，先用石油醚（3060）-醋酸乙酯（8515）為展開劑展開至薄層板中線處取出，揮去展開劑，再放入石油醚（3060）中展開至接近薄層板頂端時取出，揮去展開劑后，分別用下列幾種顯色劑噴霧顯色。1香草醛-硫酸試劑：可與揮發(fā)油產(chǎn)生紫色、紅色等。熒光素-溴試劑：如產(chǎn)生黃色斑點，表明含有不飽和化合物。2,4-二硝基苯肼試劑：如產(chǎn)生黃色斑點，表明含有醛或酮類化合物。0.05溴甲酚綠乙醇試劑：如產(chǎn)生黃色斑點，表明含有酸性化合物。觀察斑點的數(shù)量、位置及顏色，推測每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的種類及數(shù)量。（五）實驗說明及注意事項1通過觀察餾出液的混濁程度來判斷揮發(fā)油是否提取完全。最初的餾出液中含油量較多，明顯混濁，隨著餾出液中油量的減少，混濁度也隨著降低，至餾出液變?yōu)槌吻迳踔翢o揮發(fā)油氣味時，停止蒸餾。2提取完畢，須放冷，待油水完全分層后，再將油層放出，盡量不帶出水分。3進(jìn)行單向二次展開時，先用極性較大的展開劑展開至中線，然后再用極性較小的展開劑展開。在第一次展開后，應(yīng)將展開劑完全揮干，再進(jìn)行第二次展開，否則將影響第二次展開劑的極性，從而影響分離效果。4揮發(fā)油易揮發(fā)逸失，因此進(jìn)行層析檢識時，操作應(yīng)迅速及時，不宜久放。5噴灑香草醛-濃硫酸顯色劑時，應(yīng)于通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；用溴甲酚綠試劑顯色時，應(yīng)避免在酸性條件下進(jìn)行。（六）思考題1從八角茴香中提取分離茴香腦的原理是什么？2利用點滴反應(yīng)檢識揮發(fā)油的組成優(yōu)點是什么？3單向二次展開薄層色譜法檢識揮發(fā)油中各成分時，為什么第一次展開所用的展開劑極性最好大于第二次展開所用的展開劑的極性？單向二次展開薄層色譜法有什么優(yōu)點？ 實驗七 丁香中揮發(fā)油的提取分離與檢識（一）目的要求1掌握揮發(fā)油的一般化學(xué)檢識及薄層色譜檢識方法。2熟悉揮發(fā)油中酸性成分的分離方法。3學(xué)會應(yīng)用揮發(fā)油含量測定器提取藥材中揮發(fā)油及含量測定的操作方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)丁香 別名：公丁香（花蕾）、母丁香（果實）。為桃金娘科植物丁香Eugenia caryophyllata Thunb.的干燥花蕾及果實。原產(chǎn)于非洲摩洛哥，現(xiàn)我國廣東亦有種植。丁香花蕾含揮發(fā)油（即丁香油）1420，油中主要成分丁香酚，約7895，乙酰丁香酚約3及少量的丁香烯、甲基正戊酮、甲基正庚酮、香莢蘭醛等。另尚含齊墩果酸、鞣質(zhì)、脂肪油及蠟。果實含丁香油29。丁香酚(eugenol) 分子式C10H12O2，分子量164.20。無色或蒼黃色液體，bp.225。幾不溶于水，與乙醇、乙醚、氯仿可混溶。 丁香酚（三）實驗原理本實驗用水蒸氣蒸餾法提取丁香揮發(fā)油。利用丁香酚為苯丙素類衍生物，具有酚羥基，遇到氫氧化鈉水溶液即轉(zhuǎn)為鈉鹽而溶解，酸化時又可游離的性質(zhì)將丁香酚從揮發(fā)油中分離出來。并利用可與三氯化鐵試劑發(fā)生反應(yīng)的性質(zhì)進(jìn)行檢識，也可進(jìn)行薄層色譜檢識。（四）實驗內(nèi)容1丁香油的提取 取丁香50g，搗碎，置于燒瓶中，加適量水浸泡濕潤，按一般水蒸氣蒸餾法進(jìn)行蒸餾提取。也可將搗碎的丁香置于揮發(fā)油測定器的燒瓶中，加蒸餾水300ml與數(shù)粒玻璃珠，連接揮發(fā)油測定器。自測定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時為止，精確加入1ml二甲苯，然后連接回流冷凝管。加熱蒸餾30分鐘后，停止加熱，放置15分鐘以上，讀取測定器中二甲苯油層容積，減去開始蒸餾前加入二甲苯的量，即為揮發(fā)油的量，再計算出丁香中揮發(fā)油的含量。2丁香酚的分離 將所得的丁香油置于分液漏斗中，加10氫氧化鈉溶液80ml提取，并加150ml蒸餾水稀釋，分取下層水溶液，用10鹽酸酸化使丁香酚呈油狀液體，分取油層，用無水硫酸鈉脫水干燥，得純品丁香酚。3檢識 取少許丁香酚置于試管中，加1ml乙醇溶解，加23滴三氯化鐵試劑，顯藍(lán)色。4薄層色譜檢識 將提取得到的丁香油用乙醚配制成每1ml含0.02ml丁香油的供試液。另取丁香酚對照品，加乙醚制成每1ml含20微升的對照品溶液，吸取上述兩種溶液各5微升，分別點于同一硅膠G薄層色譜板上，以石油醚（6090）醋酸乙酯（91）為展開劑，展開，取出，晾干，噴灑5香草醛硫酸溶液，于105加熱烘干。在供試品色譜與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。（五）實驗說明及注意事項1采用揮發(fā)油含量測定器提取揮發(fā)油，可以初步了解該藥材中揮發(fā)油的含量，但所用的藥材量應(yīng)使蒸出的揮發(fā)油量不少于0.5ml為宜。2揮發(fā)油含量測定裝置一般分為兩種，一種適用于相對密度小于1.0的揮發(fā)油測定。另一種適用于測定相對密度大于1.0的揮發(fā)油。藥典規(guī)定，測定相對密度大于1.0的揮發(fā)油，也在相對密度小于1.0的測定器中進(jìn)行，其作法是在加熱前，預(yù)先加入1ml二甲苯于測定器內(nèi)，然后進(jìn)行水蒸氣蒸餾，使蒸出的相對密度大于1.0的揮發(fā)油溶于二甲苯中。由于二甲苯的相對密度為0.8969，一般能使揮發(fā)油與二甲苯的混合溶液浮于水面。由測定器刻度部分讀取油層的量時，扣除加入二甲苯的體積即為揮發(fā)油的量。3用揮發(fā)油測定器提取揮發(fā)油，以測定器刻度管中的油量不再增加作為判斷是否提取完全的標(biāo)準(zhǔn)。（六）思考題1從丁香中提取分離丁香酚的原理是什么？2除可利用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油外，還可采用什么方法提取揮發(fā)油？原理是什么？實驗八 甾體皂苷元的提取分離與檢識（一）目的要求學(xué)習(xí)從藥材中提取、精制和檢識甾體皂苷元，通過實驗要求：1掌握用酸水解，有機(jī)溶劑提取和精制皂苷元的方法。2熟悉皂苷及皂苷元的性質(zhì)和檢識方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)甾體皂苷主要存在于百合科、薯蕷科、龍舌蘭科等植物中。某些甾體皂苷元如薯蕷皂苷元、替告皂苷元及?？稍碥赵仁侵扑幑I(yè)中合成甾體激素類藥物及甾體避孕藥的重要原料。穿山龍為薯蕷科植物穿龍薯蕷Dioscorea nipponica Mak.的干燥根莖。具有舒筋活血、消食利水、祛痰截瘧的功效。主治風(fēng)寒濕痹、慢性氣管炎、消化不良、勞損扭傷、瘧疾、癰腫。常被作為提取薯蕷皂苷元的原料，穿山龍總皂苷水解可得1.52.6薯蕷皂苷元。1薯蕷皂苷(dioscin) 分子式C45H72O16，分子量869.08，針狀結(jié)晶，mp.275277（分解），可溶于甲醇、乙醇、醋酸，微溶于丙酮、戊醇，難溶于石油醚、苯，不溶于水。 薯蕷皂苷 2薯蕷皂苷元(diosgenin) 又稱薯蕷皂素,分子式C27H42O3，分子量414.61。為白色結(jié)晶性粉末（乙醇），mp.206208，可溶于常用的有機(jī)溶劑及醋酸中，不溶于水。（三）實驗原理本實驗是根據(jù)藥材中的薯蕷皂苷，經(jīng)酸加熱水解可產(chǎn)生薯蕷皂苷元和糖。因甾體皂苷元不溶于水，可溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，用石油醚連續(xù)回流提取總皂苷元，再用活性炭吸附脫色精制，得到精制薯蕷皂苷元。（四）實驗內(nèi)容1薯蕷皂苷元的提取、精制略2薯蕷皂苷與皂苷元的檢識（1）泡沫試驗：取穿山龍的水浸液2ml，置于小試管中，用力振搖1分鐘，應(yīng)產(chǎn)生多量泡沫，放置10分鐘，泡沫量應(yīng)無顯著變化。（2）溶血試驗：取清潔試管二支，一支加入穿山龍的水浸液0.5ml，另一支加入蒸餾水0.5ml作對照，然后各加入0.8氯化鈉水溶液0.5ml，搖勻，再向每支試管中加入紅細(xì)胞懸浮液1ml，充分搖勻，靜置，觀察溶血現(xiàn)象。如試管中溶液為透明的鮮紅色，管底無紅色沉淀物為全部溶血；如試管中溶液透明但無色，管底沉著大量紅細(xì)胞，振搖立即發(fā)生混濁為不溶血。（3）醋酐-濃硫酸反應(yīng)：取薯蕷皂苷元結(jié)晶少許，置白瓷板上，加醋酐數(shù)滴溶解后，加濃硫酸1滴，觀察顏色變化。（4）三氯醋酸反應(yīng)：取薯蕷皂苷元結(jié)晶少許，置于干燥試管中，加等量固體三氯醋酸，于6070恒溫水浴中加熱數(shù)分鐘后，觀察顏色變化。（5）磷鉬酸試驗：取薯蕷皂苷元結(jié)晶少許，溶于乙醇中，用毛細(xì)管點于濾紙片或硅膠薄層板上，滴加磷鉬酸試劑于斑點上，110加熱，觀察顏色變化，并與空白試劑作對照。（6）薄層色譜檢識薄層板：硅膠G-CMC-Na板試 樣：薯蕷皂苷元精制品乙醇溶液對照品：薯蕷皂苷元對照品乙醇溶液展開劑：氯仿-丙酮（937）顯 色：噴5磷鉬酸乙醇溶液，110加熱10分鐘顯色。（五）實驗說明及注意事項1穿山龍經(jīng)酸水解后應(yīng)充分洗滌呈中性，以免烘干時被碳化。2在干燥水解后的原料時，應(yīng)注意經(jīng)常翻動，以縮短干燥時間。3石油醚極易揮發(fā)和燃燒，必須用水浴加熱且水浴溫度不宜過高，以能使石油醚微沸即可，并應(yīng)加大冷凝水流速，以便冷凝完全。4本實驗也可用石蒜科龍舌蘭屬植物劍麻Agaue sisalana Perrine為原料提取甾體皂苷元，此植物南方各省有種植，將劍麻葉片刮去纖維，殘渣壓榨取汁，將汁液自然發(fā)酵2周（酶水解得其次生苷），布袋濾過收集沉淀，曬干，以干渣為原料，用硫酸水解，再用石油醚提取得甾體皂苷元。（六）思考題1從植物中提取甾體皂苷元可用什么方法？要注意什么問題？2請設(shè)計從其他含甾體皂苷的藥材中提取分離皂苷元的方法，并說明原理。實驗九 防己中粉防己堿的提取分離與檢識（一）目的要求學(xué)習(xí)生物堿類成分的一般提取分離法，通過實驗要求：1掌握生物堿的溶劑提取法和粉防己堿與防己諾林堿的分離方法。2熟悉生物堿的一般理化性質(zhì)。3熟悉粉防己堿和防己諾林堿的檢識方法。4掌握連續(xù)回流法（索氏提取器）、萃取法、結(jié)晶法等的基本操作過程及注意事項。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)防己為防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根?？偵飰A含量約為1.52.3，主要為粉防己堿和防己諾林堿。1粉防己堿(tetrandrine) 又稱粉防己甲素，分子式C38H42N2O6，在防己中的含量約為1，為無色針狀結(jié)晶（乙醚），mp.217218。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有機(jī)溶劑，幾乎不溶于水和石油醚。 粉防己堿 R=CH3防己諾林堿 R=H2防己諾林堿(fangchinoline) 又稱粉防己乙素，分子式C37H40N2O6，在防己中的含量約為0.5，六面體粒狀結(jié)晶（丙酮），mp.237238。溶解度與粉防己堿相似，但因較粉防己堿多一個酚羥基，故極性較粉防己堿稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己堿，可利用此性質(zhì)相互分離。（三）實驗原理本實驗是根據(jù)粉防己堿和防己諾林堿游離時難溶于水，易溶于氯仿，成鹽后易溶于水，難溶于氯仿的性質(zhì)提取得到總生物堿。再利用兩者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分離。（四）實驗內(nèi)容1防己總生物堿的提取 略2防己總生物堿的精制 略3粉防己堿和防己諾林堿的分離 略4防己生物堿的檢識（1）生物堿沉淀反應(yīng) 取粉防己堿的鹽酸水溶液8 ml分置于4支試管中，分別滴加下列試劑23滴，觀察并記錄有無沉淀產(chǎn)生及顏色變化。碘化鉍鉀試劑 碘化汞鉀試劑 碘碘化鉀試劑 硅鎢酸試劑（2）薄層色譜檢識薄層板：硅膠G-CMC-Na板試 樣：自制粉防己堿乙醇溶液 自制防己諾林堿乙醇溶液對照品：粉防己堿標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液 防己諾林堿標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液展開劑：氯仿-丙酮-甲醇（611）氨氣飽和顯色劑：噴霧改良碘化鉍鉀試劑（五）實驗說明及注意事項1提取總生物堿時，回收乙醇至稀浸膏狀即可，不宜過干，否則當(dāng)加入1鹽酸水溶液后，易結(jié)成膠狀團(tuán)塊，影響提取效果。2兩相溶劑萃取時，應(yīng)注意不可用力振搖，應(yīng)將分液漏斗輕輕旋轉(zhuǎn)搖動，以免產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，影響分層，但萃取振搖的時間需適當(dāng)延長。且不可因怕產(chǎn)生乳化現(xiàn)象而不敢振搖或為預(yù)防乳化現(xiàn)象產(chǎn)生而減少振搖的程度和時間，從而造成萃取分離不完全。要力求萃取完全，提盡生物堿，防止生物堿丟失過多而影響收得率。倘若發(fā)生嚴(yán)重乳化現(xiàn)象難以分層時，可用以下方法解決：將難以分層的乳化液置于三角燒瓶中，取定性濾紙少許揉成蓬松的團(tuán)塊，放入乳化液中，用玻璃棒攪拌片刻后，乳化液中的粘稠物質(zhì)被吸附在濾紙團(tuán)的周圍，從而削弱和破壞了乳化液的穩(wěn)定性，克服了乳化現(xiàn)象，因而得到澄清溶液。然后濾過，必要時可再加入適量溶劑洗滌濾紙團(tuán)，濾過，合并濾液即可。3檢查生物堿是否萃取完全的方法，通常采用薄層色譜、紙上斑點試驗或生物堿沉淀反應(yīng)。取最后一次氯仿萃取液數(shù)滴，水浴上蒸去溶劑，殘留物加5鹽酸溶液0.5ml溶解后，傾入試管中，加碘化鉍鉀試劑12滴，如無沉淀或無明顯混濁，則表示生物堿已提取完全或基本被提取完全，否則應(yīng)繼續(xù)萃取。也可取最后一次氯仿萃取液1滴，滴于一薄層板或濾紙片上，干燥后，噴灑改良碘化鉍鉀試劑，觀察有無紅棕色斑點出現(xiàn)，若無紅棕色斑點，表示已萃取完全。（六）思考題1粉防己堿、防己諾林堿在結(jié)構(gòu)與性質(zhì)上有何異同點？實驗過程中，應(yīng)怎樣利用它們的共性及個性進(jìn)行提取及分離？請設(shè)計方案。2分離水溶性與脂溶性生物堿的常用方法有哪些？3萃取過程中怎樣防止和消除乳化？實驗十 黃連中鹽酸小檗堿的提取分離與檢識（一）目的要求學(xué)習(xí)提取精制和檢識黃連中的小檗堿，通過實驗要求：1掌握小檗堿的結(jié)構(gòu)特點和理化性質(zhì)。2熟悉浸漬法、鹽析法、結(jié)晶法和薄層色譜法的基本操作過程及注意事項。3了解鹽酸小檗堿的檢識方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao、峨嵋野連Coptis omeiensis(Chen)C.Y.Cheng或云連Coptis teeta Wall.的根莖。黃連的根狀莖含多種生物堿，主要為小檗堿（黃連素），約58，其次為黃連堿、甲基黃連堿、掌葉防己堿、藥根堿、木蘭堿等。葉含小檗堿1.49。小檗堿(berberine)：分子式(C20H18NO4)，分子量336.37。系季銨生物堿。游離小檗堿為黃色針狀結(jié)晶（乙醚），mp.145，能緩緩溶于冷水（120），可溶于冷乙醇（1100），易溶于熱水或熱乙醇，難溶于丙酮、氯仿、苯，幾乎不溶于石油醚。鹽酸小檗堿(C20H17NO4HCl2H2O)，為黃色結(jié)晶，微溶于冷水（1500），易溶于沸水，幾乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。硫酸小檗堿( (C20H18NO4)2SO43H2O)，溶于水（130），溶于乙醇。重硫酸小檗堿(C20H18NO4HSO4)為黃色結(jié)晶或粉末，溶于水（1150），微溶于乙醚。 小檗堿 木蘭堿（三）實驗原理根據(jù)小檗堿的鹽酸鹽在水中溶解度小，而小檗堿的硫酸鹽水中溶解度較大。因此，從植物原料中提取小檗堿時常用稀硫酸水溶液浸泡或滲漉，然后向提取液中加入10的食鹽，在鹽析的同時，也提供了氯離子，使其硫酸鹽轉(zhuǎn)變?yōu)槁然￠迚A（即鹽酸小檗堿）而析出。（四）實驗內(nèi)容1鹽酸小檗堿的提取、精制 略2鹽酸小檗堿的檢識（1）濃硝酸或漂白粉試驗：取鹽酸小檗堿少許，加4ml稀硫酸溶解，分置于兩支試管中。一支試管滴加濃硝酸數(shù)滴，即顯櫻紅色。另一支試管加少許漂白粉，也立即顯櫻紅色。（2）丙酮試驗：取鹽酸小檗堿約50mg，加蒸餾水3ml緩緩加熱溶解后，加氫氧化鈉試劑2滴，顯橙色。溶液放冷后，加丙酮4滴振搖，即發(fā)生混濁。放置后析出黃色丙酮小檗堿沉淀。（3）沒食子酸試驗：取鹽酸小檗堿約20mg，置白瓷皿中，加硫酸1ml溶解后，加5沒食子酸的乙醇溶液5滴，置水浴上加熱，即顯翠綠色。（4）薄層色譜檢識薄層板：中性氧化鋁（軟板）試 樣：自制鹽酸小檗堿乙醇溶液對照品：鹽酸小檗堿對照品乙醇溶液展開劑：氯仿甲醇（91）顯 色：自然光下觀察黃色斑點或紫外燈下觀察熒光（5）紙色譜檢識支持劑：新華層析濾紙（中速、20cm7cm）試 樣：自制鹽酸小檗堿乙醇溶液對照品：鹽酸小檗堿對照品乙醇溶液展開劑：正丁醇-醋酸-水（411）顯 色：紫外燈下觀察熒光（五）實驗說明及注意事項1浸泡黃連粗粉的硫酸水溶液，一般為0.20.3為宜。若硫酸水溶液濃度過高，小檗堿可成為重硫酸小檗堿，其溶解度（1150）明顯較硫酸小檗堿（130）小，從而影響提取效果。硫酸水溶液浸出效果與浸漬時間有關(guān)，有報道，浸漬12小時約可浸出小檗堿80，浸漬24小時，可浸出92。常規(guī)提取應(yīng)浸漬多次，使小檗堿提取完全，本實驗中只收集第一次浸出液。2進(jìn)行鹽析時，加入氯化鈉的量，以提取液量的10（g/v）計算，即可達(dá)到析出鹽酸小檗堿的目的。氯化鈉的用量不可過多，否則溶液的相對密度增大，造成析出的鹽酸小檗堿結(jié)晶呈懸浮狀態(tài)難以下沉。鹽析用的氯化鈉用市售的精制食鹽，因粗制食鹽混有較多泥沙等雜質(zhì)，影響產(chǎn)品質(zhì)量。3在精制鹽酸小檗堿過程中，因鹽酸小檗堿放冷極易析出結(jié)晶，所以加熱煮沸后，應(yīng)迅速抽濾或保溫濾過，防止溶液在濾過過程中冷卻，析出鹽酸小檗堿結(jié)晶阻塞濾材，造成濾過困難，減低提取率。4本實驗流程也適用于以三棵針、黃柏為原料提取小檗堿，但因其小檗堿含量較低，應(yīng)加大藥材量，以150g以上為宜。（六）思考題1怎樣從黃連中提取分離鹽酸小檗堿？原理是什么？2試述小檗堿的檢識方法。3用薄層色譜法檢識小檗堿時，為什么常選用氧化鋁為吸附劑？如果選用硅膠作吸附劑，怎樣操作才能達(dá)到較準(zhǔn)確的結(jié)果。實驗十一 應(yīng)用薄層色譜法檢識中藥制劑（一）目的要求學(xué)習(xí)中藥制劑的鑒別方法，通過實驗要求：1掌握薄層色譜法的操作技術(shù)及分離原理。2掌握中藥制劑鑒別的一般程序及定性檢識的原理。3熟悉檢識其所含化學(xué)成分的方法與實驗技術(shù)。（二）實驗原理本實驗是根據(jù)中藥制劑牛黃解毒片中的主要成分或特征成分的性質(zhì)，選用適當(dāng)?shù)娜軇┖头椒▽υ嚇舆M(jìn)行預(yù)處理，盡量排除干擾物質(zhì)，達(dá)到提高待測成分或特征成分的相對濃度，以利在進(jìn)行薄層色譜鑒別時提高色譜清晰度，實現(xiàn)應(yīng)用薄層色譜檢測技術(shù)鑒別和控制中藥制劑質(zhì)量。（三）實驗內(nèi)容牛黃解毒片為包衣片。處方為：牛黃50g，雄黃50g，石膏200g，大黃200g，黃芩150g，桔梗100g，冰片25g，甘草50g。以上八味藥，雄黃水飛或粉碎成極細(xì)粉；大黃粉碎成細(xì)粉；牛黃、冰片研細(xì)；其余黃芩等四味加水煎煮2次，每次2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮成稠膏，加入大黃、雄黃粉末，制成顆粒，干燥，再加入牛黃、冰片粉末，混勻，壓制成1000片，包衣即得。1牛黃的鑒別（1）供試液制備；取本品10片，刮去包衣，研碎，加10ml氯仿研磨，濾過，再用10ml氯仿浸洗濾渣，合并濾液，濃縮至1ml為供試液。（2）對照液制備：取膽酸0.001g溶于1ml氯仿中，作為對照品溶液。取缺牛黃的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于10片），按供試液制備法處理，得陰性對照液。（3）薄層色譜檢識薄層板：硅膠G-CMC-Na樣 品：牛黃解毒片供試液對照品：膽酸對照液模擬牛黃解毒片對照液展開劑：正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（63211）顯色劑：噴霧5磷鉬酸乙酸溶液，110加熱10分鐘2冰片的鑒別（1）供試液制備：取本品2片，刮去包衣，研碎，加4ml甲醇-氯仿（11），室溫下浸漬30min，時加振搖，濾過，濾液使成5ml，作為供試液。（2）對照液制備：取冰片適量，加甲醇-氯仿（11）溶解，制成1ml含4mg的溶液。取缺冰片的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于2片），按供試液制備法處理，得陰性對照液。（3）薄層色譜檢識薄層板：硅膠G試 樣：牛黃解毒片供試液對照品：冰片對照液，模擬牛黃解毒片對照液展開劑：石油醚-醋酸乙酯-苯（1824）顯色劑：噴霧5磷鉬酸乙醇溶液，110加熱顯色3大黃的鑒別（1）供試液制備：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml甲醇回流提取15分鐘，冷后濾過，濾液使成5ml，作為供試液。（2）對照液制備：取1g大黃藥材，同供試液制備法制成對照液。分別取大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品適量，加乙醇溶解成1ml對照品溶液。取缺大黃的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于6片），同供試液制備法制得陰性對照液。（3）薄層色譜檢識薄層板：硅膠CMC-Na試 樣：牛黃解毒片供試液、對照品：大黃藥材對照液，模擬牛黃解毒片對照液大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照液展開劑：石油醚（6090）-甲酸乙酯-甲酸（1551）上層溶液顯色劑：顯色前后置日光及紫外光（365nm）下觀察，再噴霧0.5醋酸鎂乙醇溶液顯色。4黃芩的鑒別（1）供試液的制備：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml甲醇回流提取15分鐘，放冷后濾過，濾液使成5ml，作為供試液。（2）對照液的制備：取1g黃芩，同供試液制備法處理，得對照液。取黃芩苷對照品適量，加乙醇溶液1ml含1mg的對照品溶液。取缺黃芩的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于6片），同供試液制備法制