第四部分 淺嘗現(xiàn)代生物技術 實驗13 DNA片段的PCR擴增一、PCR技術1PCR的全稱是：_。2PCR技術是用于DNA片段復制、擴增的生化技術。3PCR技術用途：除用于基因擴增外，還用于_。4PCR技術的具體應用：在法學、醫(yī)學、食品和考古學上也是重要的實用工具，如_鑒定、_鑒定、食品質量的確定、_病診斷、腫瘤病和其他疾病的診斷以及考古中人種的確定等。答案：1.聚合酶鏈反應3測定DNA序列4親子犯罪遺傳二、DNA的體內自我復制與PCR技術DNA聚合酶在有_的存在時，利用4種_，可從_末端向_末端合成新鏈。PCR技術還需要_作為_，這一段叫_。答案：DNA模板脫氧核苷三磷酸53與DNA模板互補的一段單鏈DNA聚合酶作用的起點引物三、PCR作用的過程11個循環(huán)的操作：步驟具體操作雙鏈DNA_將雙鏈DNA加熱至_，DNA_，DNA之間的_打開，雙鏈分離(也叫做_)續(xù)表步驟具體操作與_結合雙鏈分離后，將溫度_，這一降溫過程叫_。退火后，引物可與2個_分別結合DNA新鏈的_ _下，聚合酶可利用_組裝模板的互補鏈，從引物延伸至_末端2.一般大約需要重復上述3步驟_個循環(huán)。3結果：一個循環(huán)形成_個雙鏈DNA，在20個循環(huán)后(大約1h),1個DNA片段可擴增上百萬個拷貝，30個循環(huán)可產生10億個拷貝。答案：1.分開95變性氫鍵解鏈引物迅速降至4060退火單鏈的DNA模板延伸724種dNTP32153032四、實驗操作1設備、用品(略)2材料：凝膠、DNA標樣、PCR試劑盒、TBE緩沖液、0.1%亞甲藍3.步驟：文字說明：取3個0.5 mL微量離心管，分別記做1、2、3號。用取樣器按表一加入試劑，關閉上蓋并在振蕩器上振蕩20 s，使之混合均勻將3個微量離心管放在固定器上，保證每管中的液面在水浴中的水面以下。依表二的時間依次放入3個水浴進行PCR將TBE緩沖液加入到電泳槽中，使緩沖液高出凝膠面34 mm，再將樣品加入凝膠板的加樣孔中。所加順序內容依次為：凝膠板中的加樣情況說明表加樣孔編號（對應右圖所示）1234離心管中樣品標號SA1A2A3所加樣品1號樣品20微升DNA標準溶液PCR產物1（72 1min后得到的）PCR產物2（72 1min、70 2min后得到的）對照組產物2號樣品2微升藍色緩沖液1號樣品與2號樣品必須充分混勻后再加入開始進行電泳，若用18 V電池的電泳46 h；若甲直流電泳儀電源，80 V可電泳40 min電泳后將凝膠緩沖液倒出，緩沖液可再利用。將10 mL染色劑（亞甲藍）覆蓋在凝膠表面，1520 min后移去（可再利用），再加入5 mL70%乙醇，不斷搖動12 min，使其分布均勻，再除去，加入冷水，幾分鐘后看到藍色的區(qū)帶出現(xiàn)，這就是擴增的DNA比較、判斷膠片結果圖表輔助：表一：試劑1號管(12個循環(huán))2號管(14個循環(huán))3號管(對照)PCR混合液2020蒸餾水20引物202020模板DNA101010總體積505050表二：時間溫度目的2 min30 s30 s1 min2 min95 95 49 72 70 開始變性(解鏈)最后擴增膠片染色結果6EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F375