微生物的培養(yǎng)與應用精選大題例：（2018全國卷I)將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M培養(yǎng)基。回答下列問題：（1）M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，則培養(yǎng)基中應加入鏈霉素一抑制_的生長，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。（2）M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質，營養(yǎng)物質類型除氮源外還有_（答出兩點即可）。氮源進入細菌后，可參與合成的生物大分子有_（答出兩點即可）。（3）若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養(yǎng)，平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產生淀粉酶的微生物，加入的顯色劑是_，該方法能篩選出產生淀粉酶微生物的原理。（4）甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結果：甲同學涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140和149，取平均值133。乙同學涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176，取平均值124。有人認為這兩位同學的結果中，乙同學的結果可信度低，其原因是：。【答案】（1）細菌選擇（2）碳源、無機鹽蛋白質、DNA、RNA （3）碘液淀粉遇碘顯藍色，產淀粉酶菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈（4）乙同學的結果中，1個平板的計數(shù)與另2個相差懸殊，結果的重復性差【解析】（1）M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，說明M培養(yǎng)基能滿足真菌的生長，而能抑制其它微生物的生長，鏈霉素是一種抗生素，可以抑制細菌的生長。加入了鏈霉素的培養(yǎng)基能篩選出真菌，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。（2）微生物生長需要多種營養(yǎng)物質除氮源外，還需要碳源、無機鹽、水以及特殊營養(yǎng)物質等。氮元素是蛋白質和核酸等生物大分子的組成元素，因此氮源進入細胞后,可參與合成的生物大分子有蛋白質和核酸。（3）淀粉與碘液會變成藍色，篩選產淀粉酶的微生物，依據(jù)淀粉遇碘液顯藍色，產淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈，再根據(jù)透明圈，來篩選產淀粉酶的微生物。（4）乙同學結果不合理，因為1個平板的計數(shù)結果與另2個相差懸殊，結果的重復性差，不能簡單的用其平均數(shù)作為最終結果。模擬精做1（2019屆廣東省深圳實驗，珠海一中等六校高三第一次聯(lián)考）硝基苯酚是工業(yè)污水中重要污染物，某同學欲從污水處理廠污泥中分離分解硝基苯酚的細菌。請回答下列有關問題：（1）為了篩選污泥中可分解硝基苯酚的細菌，在配置培養(yǎng)基時應選擇_(硝基苯酚，硝基苯酚+牛肉膏，硝基苯酚十葡萄糖）作為碳源，不采用其他兩組的原因是。（2）純化菌株時，通常使用的劃線工具是_。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落。分析造成第二劃線區(qū)域的第一條線無菌落的可能原因是_（答一點即可）。（3）進行梯度稀釋時的一般操作是將1mL菌液移入盛有_mL的無菌水中；常用_法進行活菌計數(shù)，其原理是_，但統(tǒng)計的菌落數(shù)往往_（填“多于”或“少于”)稀釋液中的活菌數(shù)，原因是_。（4）實驗數(shù)據(jù)顯示，當培養(yǎng)基中加入碳源葡萄糖時，該細菌降解速率明顯提高，原因可能是?！敬鸢浮浚?）硝基苯酚其他兩組分別含有其他碳源和氮源，不能保證硝基苯酚是唯一碳源和氮源（2）接種環(huán)接種環(huán)灼燒后未冷卻劃線（未從第一區(qū)域末端開始）（3）9稀釋涂布平板培養(yǎng)基表面的一個菌落來源于一個活菌少于有些活菌在培養(yǎng)過程中死亡（個別菌落可能是由2個或多個細菌形成）（4）能源充足，細菌代謝繁殖加快【解析】（1）為了篩選污泥中可分解硝基苯酚的細菌，在配置培養(yǎng)基時應選擇硝基苯酚作為碳源，不采用其他兩組的原因是其他兩組分別含有其他碳源和氮源，不能保證硝基苯酚是唯一碳源和氮源。（2）利用劃線分離法純化菌株時使用的劃線工具是接種環(huán)；劃線的某個平板經培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落，造成劃線無菌落可能的操作失誤有接種環(huán)灼燒后未冷卻，或者劃線未從第一區(qū)域末端開始。（3）進行梯度稀釋時，需要將1mL菌液移入盛有9ml的無菌水中；稀釋涂布平板法常用來進行微生物的計數(shù)，其原理是培養(yǎng)基表面的一個菌落來源于稀釋液中的一個活菌；由于菌落可能是由兩個或多個細胞形成或者操作時有些活菌在培養(yǎng)過程中死亡，所以統(tǒng)計的菌落數(shù)往往少于稀釋液中的活菌數(shù)。（4）當培養(yǎng)基中加入碳源葡萄糖時，該細菌降解速率明顯提高，因為此時能源充足，細菌代謝繁殖加快。2（2019屆四川省南充市高三第一次診斷性考試）有機磷農藥是用于防治植物害蟲的含磷有機化合物，廣泛應用于農業(yè)生產中，有時會造成瓜果蔬菜等食品農藥殘留超標，不少品種對人、畜的毒性很強,人誤食后如不及時醫(yī)治就會危及生命。某班同學欲從土壤中分離高效降解有機磷農藥的微生物。請回答下列問題：（1）為了獲得能降解有機磷農藥的微生物菌種，可在被有機磷農藥污染的土壤中取樣，并在含有碳源、氮源及_等的選擇培養(yǎng)基上添加適量的_進行選擇培養(yǎng)。（2）在制備固體培養(yǎng)基時需加入的常用凝固劑是_。若培養(yǎng)基需要調節(jié)pH，則應在滅菌之_（填“前”或“后”）調節(jié)。（3）該小組在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時間，這樣做的目的是。（4）若要測定培養(yǎng)液中選定菌種的菌體數(shù)，既可在顯微鏡下用 _直接計數(shù)，也可選用_法統(tǒng)計活菌數(shù)目。（5）將獲得的3種待選微生物菌種甲、乙、丙分別接種在1L含20mg有機磷農藥的相同培養(yǎng)液中培養(yǎng)（培養(yǎng)液中其他營養(yǎng)物質充裕、條件適宜），觀察從實驗開始到微生物停止生長所用的時間，甲、乙、丙分別為32小時、45小時、16小時，則應選擇微生物_（填“甲”、“乙”或“丙”）作為菌種進行后續(xù)培養(yǎng)，理由是_。【答案】（1）水和無機鹽有機磷農藥（2）瓊脂前（3）檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格（4）血細胞計數(shù)板稀釋涂布平板（5）丙微生物丙分解有機磷農藥的能力比甲、乙強【解析】 (1) 為了獲得能降解有機磷農藥的微生物菌種，就要人為提供有利于該微生物的生長條件，同時抑制或阻止其他微生物的生長，因此所用的選擇培養(yǎng)基除了含有碳源、氮源及水和無機鹽等微生物生長所需的基本營養(yǎng)成分外，還需添加適量的有機磷農藥，以便進行選擇培養(yǎng)。(2) 在制備固體培養(yǎng)基時，常需加入凝固劑瓊脂。平板培養(yǎng)基配制的基本流程為：計算稱量溶化調節(jié)pH滅菌倒平板，即調節(jié)pH應在滅菌之前調節(jié)。(3)為檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，在接種前需隨機取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時間，觀察有無菌落形成。若無菌落形成，則說明培養(yǎng)基平板滅菌合格。(4) 測定并統(tǒng)計培養(yǎng)液中選定菌種的菌體數(shù)，既可在顯微鏡下用血細胞計數(shù)板直接計數(shù)，也可選用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目。(5) 依題意可知，甲、乙、丙培養(yǎng)液中的微生物從實驗開始到停止生長所用的時間分別為32小時、45小時、16小時，說明微生物丙分解有機磷農藥的能力比甲、乙強，因此應選擇微生物丙作為菌種進行后續(xù)培養(yǎng)。3（2019屆廣東省華南師范大學附屬中學、實驗中學、廣雅中學、深圳中學高三上學期期末聯(lián)考）研究發(fā)現(xiàn)一些嗜冷細菌產生的蛋白酶可使乳蛋白分解，導致牛奶變質。為了篩選檢測變質牛奶中的嗜冷細菌，某研學小組做了如圖所示實驗。(注:培養(yǎng)皿旁的數(shù)字代表菌落數(shù)目)，請回答下列問題：（1）牛奶飲用前要經過巴氏消毒，以殺死有害微生物，與煮沸消毒相比，巴氏消毒的牛奶在常溫（約28）下保存時間較短，原因是_,導致牛奶中營養(yǎng)成分被分解而變質。（2）若要篩選嗜冷細菌，應將牛奶樣品稀釋液接種在以_為唯一氮源的固體培養(yǎng)基上，并且在_的環(huán)境條件下培養(yǎng)，以利于嗜冷細菌生長，抑制或阻止其他微生物的生長。（3）據(jù)圖分析,研學小組采用的是_法分離和計數(shù)嗜冷細菌。（4）用上述方法統(tǒng)計樣本中菌落數(shù)時是否需要設置對照組？_（填“需要”或“不需要”），其原因是_。（5）按照菌落計數(shù)的要求，據(jù)圖可得出1ml牛奶樣品中嗜冷細菌的活菌數(shù)為_個，與用血球計數(shù)板相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)目較_?！敬鸢浮浚?）（巴氏消毒的）牛奶中沒有被殺死的微生物（或細菌）在適宜溫度（或常溫）下大量繁殖（2）乳蛋白低溫（或較低溫度）（3）稀釋涂布平板（4）需要需要證明（或判斷）培養(yǎng)基是否被雜菌污染（培養(yǎng)基滅菌是否合格）（5）3.9105少【解析】（1）由于巴氏消毒的溫度為7580C之間，有些微生物在此溫度下沒有被殺死，故在適宜溫度（或常溫）下，（巴氏消毒的）牛奶中沒有被殺死的微生物（或細菌）會大量繁殖，導致牛奶中營養(yǎng)成分被分解而變質。所以巴氏消毒的牛奶在常溫（約28）下保存時間較短。（2）由于嗜冷細菌產生的蛋白酶可使乳蛋白分解，故要篩選嗜冷細菌，應將牛奶樣品稀釋液接種在以乳蛋白為唯一氮源的固體培養(yǎng)基上，并且在低溫的環(huán)境條件下培養(yǎng)，以利于嗜冷細菌生長，抑制或阻止其他微生物的生長。（3）根據(jù)圖示中將牛奶樣品稀釋后涂在培養(yǎng)基上進行菌落計數(shù)，可知研學小組采用的是稀釋涂布平板法分離和計數(shù)嗜冷細菌。（4）由于不知道制備的培養(yǎng)基是否被污染，故需要設置不接種微生物的培養(yǎng)基進行對照，以證明（或判斷）培養(yǎng)基是否被雜菌污染（培養(yǎng)基滅菌是否合格）。（5）菌體計數(shù)時應選擇菌落數(shù)在30300之間的稀釋倍數(shù)進行計數(shù)，由圖中菌落數(shù)量可知，應選擇稀釋103的進行計數(shù)，故1ml牛奶樣品中嗜冷細菌的活菌數(shù)為（36+39+42）30.1103=3.9105個。該種方法計數(shù)時，計數(shù)的是活菌的數(shù)量，且當兩個或多個菌體連在一起生長時，平板上觀察的只是一個菌落，故與用血球計數(shù)板相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)目較小。4（2019屆河北省唐山市高三上學期期末考試）淀粉酶可以通過微生物發(fā)酵生產。某科研小組想利用誘變育種的方法獲得淀粉酶高產菌株，從而提高酶的產量。實驗步驟：第一步：將菌株分為兩組，甲組用一定劑量的誘變劑處理，乙組不處理做對照。第二步：配置_(固體、液體)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的碳源應為_。第三步：將甲、乙兩組的菌株采用_方法進行接種，以便使菌落分布較均勻，然后放在相同且適宜條件下培養(yǎng)。第四步：菌落形成后加入_染色，比較兩組菌株菌落周圍透明圈的大小。預期實驗結果：a.若甲組中絕大多數(shù)菌落周圍的透明圈大小與乙組相同，則說明誘變具有_。b.若_，則說明誘變具有不定向性。從甲組培養(yǎng)基中篩選菌落周圍透明圈最_的菌株進行鑒定。【答案】固體淀粉稀釋涂布平板法碘液低頻性甲組中極少數(shù)菌落周圍的透明圈與乙組相比變大或變小大【解析】第二步：篩選用固體培養(yǎng)基，該實驗是為了篩選產淀粉酶的高產菌株，因此該培養(yǎng)基的碳源應為淀粉。第三步：將甲、乙兩組的菌株采用稀釋涂布平板法方法進行接種，以便使菌落分布較均勻，然后放在相同且適宜條件下培養(yǎng)。第四步：菌落形成后加入碘液染色，該培養(yǎng)基的碳源為淀粉，菌株能夠水解淀粉，在菌落周圍會形成透明圈，再比較兩組菌株菌落周圍透明圈的大小。預期實驗結果：a、若甲組中絕大多數(shù)菌落周圍的透明圈大小與乙組相同，則說明誘變沒有效果，誘變具有低頻性。b、若甲組中極少數(shù)菌落周圍的透明圈與乙組相比變大或變小，則說明誘變具有不定向性。從甲組培養(yǎng)基中菌落周圍透明圈最大的菌株可能淀粉酶的產量最高，篩選該菌株進行鑒定。