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1、第一章復(fù)習(xí)題
1、蛋白質(zhì)1、2、3、4級結(jié)構(gòu)的基本概念和化學(xué)鍵。
答:
(1)、一級結(jié)構(gòu):蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)指多肽鏈中氨基酸的排列順序。
主要的化學(xué)鍵:肽鍵,有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。
方向:N---C
(2)、二級結(jié)構(gòu):蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu),即該段肽鏈主鏈骨架原子的
相對空間位置,并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象 。
主要的化學(xué)鍵:氫鍵。
(3)、三級結(jié)構(gòu):整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置或在一條多肽鏈中全部原子 的空間排布位置。
主要的化學(xué)鍵:氫鍵、離子鍵、疏水鍵、 Van der Waals力和二硫鍵等。
(4)、四級結(jié)構(gòu):蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布
2、及亞基接觸部位的布局和相互作用。
主要的化學(xué)鍵:氫鍵和離子鍵。
2、寡肽、多肽的概念,多肽鏈的方向和連接鍵;簡述肽鍵平面的特點。
答:
(1)、寡肽的概念:由十個以內(nèi)氨基酸相連而成的肽稱為寡肽 (oligopeptide) 。
(2):多肽的概念:由更多的(10個以上)氨基酸相連形成的肽稱多肽 (polypeptide) 。
(3)、多肽鏈的方向:N端到C端。 化學(xué)鍵:肽鍵。
(4)、肽鍵平面的特點:
①、組成肽鍵平面的 6個原子在同一平面。
②、肽鍵有部分雙鍵的性質(zhì)。 (v . v )
③、C”碳上的單鍵可自由旋轉(zhuǎn)。
(肽鍵平面是蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位 氨基酸是蛋白質(zhì)的基
3、本組成單位)
3、哪些說法與一級結(jié)構(gòu)相關(guān)。
答:
(1)、一級結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。
(2)、它由遺傳密碼決定;
(3)、其上有酶切位點;
(4)、一級結(jié)構(gòu)可測定;
(5)、不同種屬間的一級結(jié)構(gòu)有同源性 .
4、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)有哪些;等電點及應(yīng)用;與紫外吸收相關(guān)的氨基酸;蛋白質(zhì)在溶液中 的穩(wěn)定因素;何謂蛋白質(zhì)的變性作用,引起變性的因素及應(yīng)用。
答:
(1)、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì):①、兩性解離和等電點
②、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)
③、蛋白質(zhì)的變性、復(fù)性
④、蛋白質(zhì)的紫外吸收
⑤、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)
(2)、蛋白質(zhì)的等電點 (isoelectric poi
4、nt, pI) :當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一 pH 時,蛋白
質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢相等,即成為兼性離子,凈電荷為零,此時溶液的 pH稱為蛋白
-1 -
質(zhì)的等電點。
應(yīng)用:通過電泳分離和提純蛋白質(zhì)。
(3)、與紫外吸收相關(guān)的氨基酸:含有共軻雙鍵的酪氨酸和色氨酸(苯丙氨酸) 。
(4)、蛋白質(zhì)在溶液中的穩(wěn)定因素:顆粒表面電荷 水化膜
(5)、蛋白質(zhì)的變性作用:在某些物理和化學(xué)因素作用下,其特定的空間構(gòu)象被破壞,也 即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無序的/間結(jié)構(gòu),從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。
(6)、引起變性的因素:物理、化學(xué)與生物學(xué)因素如加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、 重金
5、屬離子及生物堿試劑等 。
(7)、變性的應(yīng)用:①、臨床醫(yī)學(xué)上,變性因素常被應(yīng)用來消毒及滅菌。
②、防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑 (如疫苗等)的必要條件。
5、何謂層析?常見層析的分類?簡述凝膠過濾層析,離子交換層析的原理。
答:
(1)、層析:[原理]待分離蛋白質(zhì)溶液(流動相)經(jīng)過一個固態(tài)物質(zhì)(固定相)時,根據(jù) 溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小、電荷多少及親和力等,使待分離的蛋白質(zhì)組分在兩相中 反復(fù)分配,并以不同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的 。
(2)、常見層析的分類
(3)、簡述凝膠過濾層析的原理:
①、概念:是按照被分離物質(zhì)分子大小 為凝膠過濾或分子篩過濾或排阻
6、層析。
②、原理:主要機理是分子篩效應(yīng) 小不同,在凝膠受到的阻滯作用有差異
q Ve
離。Ve V0 KdVi Kd 組
離子交換層析:利用蛋 白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不 同進行分離 凝膠過濾層析(分子篩層析)
,經(jīng)過具有一定孔徑的多孔物質(zhì)進行分離的一種方法。其又稱
,當(dāng)被分離物質(zhì)流經(jīng)凝膠柱時 ,因各組份的分子大
,從而造成各組分在凝膠柱中的遷移速度不同得到分
V0
Vi
式中Kd稱作“排阻系數(shù)”或“分配系數(shù)”。它反映了物質(zhì)分子進入凝膠顆粒的程度。式中 Ve是把某一物
質(zhì)全部洗脫下來所需要的溶液的體積。式中 V0是外水的體積。式中 Vi是內(nèi)水的體積(樹脂溶脹所滲入的
水)。
7、
a、當(dāng)Kd=1 時,Ve=VO+Vi 為全滲入。b、當(dāng)Kd=0 時,Ve=VO 為全排阻。C、當(dāng)0<Kd<1 時,
Ve=VO+KdVi為部分排阻。通常要被分離的物質(zhì)物質(zhì)的 Kd在0<Kd<1如Kd>1 ,則說明該物質(zhì)分子與
凝膠有吸附作用。
(即,用小于內(nèi)水與外水體積之和即可下來。 )
(4)、簡述離子交換層析的原理:使用離子交換樹脂做支持物,其上代正電荷,稱陽離子
交換樹脂,帶負(fù)電荷,稱陰離子交換樹脂,分別分離混合物中的陽離子與陰離子,例
N- A ~~"N* A* + B-
“ 混合物中畫更子
機哨
6、解釋鹽析,沉降系數(shù),電泳的基本概念。
答:
(1)、鹽析:將硫酸鏤、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液,使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以
及水化膜被破壞,導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。
(2)、沉降系數(shù):蛋白質(zhì)在離心場中的行為。表示 ,沉降系數(shù)與蛋白質(zhì)的密度和形狀相關(guān) 。
(3)、電泳:蛋白質(zhì)在高于或低于其 pI的溶液中為帶電的顆粒,在電場中能向正極或負(fù)極
移動。這種通過蛋白質(zhì)在電場中泳動而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù)叫做電泳。根據(jù)支撐物 的不同,可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。