到目前為止，到目前為止， 幾十項諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎，化學(xué)獎幾十項諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎，化學(xué)獎 都與微生物學(xué)有關(guān)都與微生物學(xué)有關(guān)微生物微生物的類群的類群原生生物：原生生物：原核生物原核生物: :真菌真菌: :病毒病毒如酵母菌如酵母菌單細(xì)胞的動植物單細(xì)胞的動植物如草履蟲、單細(xì)如草履蟲、單細(xì)胞藻類等胞藻類等無細(xì)胞結(jié)構(gòu)：無細(xì)胞結(jié)構(gòu)：真真核核細(xì)細(xì)胞胞細(xì)菌、藍(lán)藻細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞原核細(xì)胞有細(xì)胞有細(xì)胞結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)課題課題1 1 微生物的實驗室培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)1.1.提供營養(yǎng)和條件提供營養(yǎng)和條件 2.2.防止污染防止污染一一. .培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.1.基本成分：基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、無機鹽碳源、氮源、水、無機鹽碳源碳源無機碳源：無機碳源：有機碳源：有機碳源：COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- -牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源氮源無機氮源：無機氮源：有機氮源：有機氮源：NHNH4 4、NONO3 3- -牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等等注：含注：含C C、H H、O O、N N的的有機物有機物是是異異養(yǎng)型微生物的：養(yǎng)型微生物的： 碳源碳源、氮源氮源、能源。能源。一一. .培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)2.2.特殊營養(yǎng)特殊營養(yǎng)：維生素（如乳酸桿菌）、堿基等維生素（如乳酸桿菌）、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH3.pH、氧氣的需求：、氧氣的需求：霉菌（霉菌（pHpH調(diào)至酸性）調(diào)至酸性）細(xì)菌（細(xì)菌（pHpH調(diào)至中性或微堿性）調(diào)至中性或微堿性）厭氧生物需提供無氧條件。厭氧生物需提供無氧條件。一一. .培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)4.4.培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基種類固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有有無無 凝固劑瓊脂凝固劑瓊脂分離分離 鑒定鑒定工業(yè)工業(yè) 生產(chǎn)生產(chǎn)化學(xué)成分：化學(xué)成分：物理性質(zhì)：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至定容至1000mlNaCl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g瓊脂瓊脂20.0g5. 5. 配制原則配制原則目的明確：目的明確：營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)適宜的適宜的pHpH值：值：有機碳源有機碳源異養(yǎng)型：異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的種類、培養(yǎng)目的選擇原料選擇原料自養(yǎng)型：自養(yǎng)型： 不加碳源不加碳源加入緩沖劑加入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸細(xì)菌偏堿，真菌偏酸（COCO2 2碳源）碳源）生產(chǎn)生產(chǎn)科研科研耐高溫需保持干燥的耐高溫需保持干燥的 物品，物品，160170 12小時小時接種環(huán)、接種針等接種環(huán)、接種針等 金屬用具金屬用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒滅菌滅菌定義定義方法方法較為較為溫和溫和理化方法，理化方法，殺死殺死部分有害菌體部分有害菌體（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）強烈強烈的理化方法，的理化方法，殺死殺死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑化學(xué)藥劑紫外線紫外線灼燒滅菌灼燒滅菌干熱滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，100KPa、121、1530min二二. .無菌技術(shù)：無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染防止外來雜菌的污染1.1.消毒與滅菌：消毒與滅菌：請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手2.2.無菌范圍：無菌范圍：實驗操作空間消毒實驗操作空間消毒操作者的手、衣著消毒操作者的手、衣著消毒實驗用具滅菌實驗用具滅菌實驗操作過程實驗操作過程二二. .無菌技術(shù)：無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染防止外來雜菌的污染1.1.消毒與滅菌：消毒與滅菌：酒精燈旁操作酒精燈旁操作超凈工作臺超凈工作臺單個單個或少數(shù)菌體或少數(shù)菌體2.2.特征：特征：大小、形狀、光澤度、大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。顏色、透明度等。3.3.功能：功能：1.1.定義：定義：三三. .菌落菌落鑒定菌種鑒定菌種的重要依據(jù)的重要依據(jù)固體固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上大量繁殖大量繁殖子細(xì)胞群體子細(xì)胞群體1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至定容至1000mlNaCl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g瓊脂瓊脂20.0g四四. .大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.1.計算：計算：培養(yǎng)基用量培養(yǎng)基用量依配方計算各成分的用量依配方計算各成分的用量2.2.稱量：稱量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解、少量水加熱溶解取紙取紙蛋白胨、蛋白胨、NaClNaCl瓊脂瓊脂補水定容補水定容4.4.調(diào)調(diào)pHpH、分裝、封口：、分裝、封口：5.5.滅菌：滅菌：6.6.倒平板：倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個細(xì)胞分散成單個細(xì)胞, ,形成單個菌落形成單個菌落約約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基二二. .大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：純化大腸桿菌：平板劃線法：平板劃線法：菌種菌種劃劃3 3個平板個平板1 1個不劃線個不劃線1.1.接種：接種：接種環(huán)接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實驗）（重復(fù)實驗）（空白對照）（空白對照）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時，殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。減少，以便得到菌落。及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。環(huán)境和感染操作者。6 6支試管，分別加入支試管，分別加入9ml9ml無菌水無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法：a.a.梯度稀釋菌液梯度稀釋菌液：菌液菌液微量微量 移移液器液器稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法：a.a.梯度稀釋菌液梯度稀釋菌液：b.b.涂布平板涂布平板：不超過不超過0.1ml0.1ml各梯度分別涂布各梯度分別涂布3個平板個平板1 1個不涂布作空白對照個不涂布作空白對照滴滴灼灼試試涂涂稀稀釋釋10103 3倍倍稀稀釋釋10104 4倍倍稀稀釋釋10105 5倍倍平板劃線法：平板劃線法：二二. .大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：純化大腸桿菌：1.1.接種：接種：稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法：2.2.培養(yǎng)：培養(yǎng)：將將接種后接種后的培養(yǎng)基和一個的培養(yǎng)基和一個未接種未接種的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基放入放入3737恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)12h12h24h24h后，后，觀察并記錄觀察并記錄三三. .菌種的保藏：菌種的保藏：1.1.臨時保藏：臨時保藏： 試管固體斜面培養(yǎng)基上試管固體斜面培養(yǎng)基上442.2.長期保存：長期保存：菌種易被污染、變異菌種易被污染、變異甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法：a.a.梯度稀釋菌液梯度稀釋菌液：b.b.涂布平板涂布平板：滴稀釋菌液滴稀釋菌液不超過不超過0.1ml0.1ml各梯度分別涂布各梯度分別涂布3個平板個平板1 1個不涂布作空白對照個不涂布作空白對照稀稀釋釋10103 3倍倍稀稀釋釋10104 4倍倍稀稀釋釋10105 5倍倍