思考題思考題1.1.植物體細胞雜交時首先應用什么方法去掉細胞壁？植物體細胞雜交時首先應用什么方法去掉細胞壁？ 酶解法，如纖維素酶或果膠酶酶解法，如纖維素酶或果膠酶2.2.動物細胞融合時需要進行去壁處理嗎？為什么？動物細胞融合時需要進行去壁處理嗎？為什么？無需，因為動物細胞無細胞壁無需，因為動物細胞無細胞壁3.3.植物體細胞雜交誘導原生質體融合常用的方法有哪些？植物體細胞雜交誘導原生質體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；離心、電激等物理方法；PEGPEG等化學方法等化學方法4.4.動物細胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？動物細胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能能 還可以利用滅活的病毒進行誘導還可以利用滅活的病毒進行誘導5.5.植物體細胞雜交應先進行原生質體的融合再進行組織培養(yǎng)植物體細胞雜交應先進行原生質體的融合再進行組織培養(yǎng)成完整的雜種個體，動物細胞融合后能形成雜種動物個嗎？成完整的雜種個體，動物細胞融合后能形成雜種動物個嗎？不能不能植物體細胞雜交的意義：植物體細胞雜交的意義：打破生殖隔離，克服遠緣雜交不親和的障礙，打破生殖隔離，克服遠緣雜交不親和的障礙，培育作物新品種。培育作物新品種。一、動物細胞融合一、動物細胞融合有些細胞的融合是正常的生命活動。如有些細胞的融合是正常的生命活動。如精子與卵細胞的結合。精子與卵細胞的結合。 兩個細胞正在融合兩個細胞正在融合 受精作用受精作用( (一一) )動物細胞融合的概念動物細胞融合的概念 動物細胞融合也稱細胞雜交動物細胞融合也稱細胞雜交, ,是指兩個或多是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程。個動物細胞結合形成一個細胞的過程。（二）動物細胞融合的過程（二）動物細胞融合的過程雜交細胞雜交細胞: :融合后形成的具有原來兩個或融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞。多個細胞遺傳信息的單核細胞。與植物原生質體融合原理相同，方法類似。與植物原生質體融合原理相同，方法類似。P52 圖2-23細胞細胞A A細胞細胞B雜交細胞雜交細胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學法化學法滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜連接細胞膜連接細胞融合，形成雜交細胞細胞融合，形成雜交細胞（細胞膜具有一定的細胞膜具有一定的流動性）流動性）為什么滅活的病毒能作為誘導劑？為什么滅活的病毒能作為誘導劑？因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質分因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。胞發(fā)生融合。不滅活的病毒能作為誘導劑嗎？不滅活的病毒能作為誘導劑嗎？不能，因為不滅活的病毒會感染細胞。不能，因為不滅活的病毒會感染細胞。( (三三) )動物細胞融合的應用動物細胞融合的應用1.1.突破有性雜交方法的局限突破有性雜交方法的局限, ,使遠緣雜交成為使遠緣雜交成為可能?？赡?。2.2.成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。新品種培育等的重要手段。3.3.為制造單克隆抗體開辟了新途徑。為制造單克隆抗體開辟了新途徑。鼠鼠雞、鼠雞、鼠兔、鼠兔、鼠猴、人猴、人鼠、人鼠、人兔、兔、人人雞、人雞、人蛙、蛙、酵母菌酵母菌雞雞 、人、人胡蘿卜胡蘿卜等等主要用于制備單克主要用于制備單克隆抗體隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株用途用途物理、化學方法物理、化學方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振動、電激）動、電激）化學（聚乙二醇）化學（聚乙二醇）誘導方法誘導方法使細胞分散后誘使細胞分散后誘導細胞融合導細胞融合去除細胞壁后誘去除細胞壁后誘導原生質體融合導原生質體融合細胞融合的方法細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、植物細胞全能性植物細胞全能性原理原理動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交比較項目比較項目植物體細胞雜交、動物細胞融合的比較植物體細胞雜交、動物細胞融合的比較二、單克隆抗體二、單克隆抗體 什么是抗體？什么是抗體？ 抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結合的具有并能與該抗原發(fā)生特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。免疫功能的球蛋白。 B淋巴細胞（漿細胞）能產(chǎn)生抗體淋巴細胞（漿細胞）能產(chǎn)生抗體 （一）獲得抗體的傳統(tǒng)方法（一）獲得抗體的傳統(tǒng)方法1 1、把某種抗原反復注射到動物體內，然后、把某種抗原反復注射到動物體內，然后從動物血清中分離出所需的抗體。從動物血清中分離出所需的抗體。 產(chǎn)量低，純度低，產(chǎn)量低，純度低，特異性差特異性差。2、缺點：、缺點：人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內的體內的B B淋巴細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上淋巴細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每一個的特異性抗體，但是每一個B B細胞只分泌一細胞只分泌一種特異性抗體。要想獲得大量的單一抗體，種特異性抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的必須克隆單一的B B淋巴細胞，形成細胞群淋巴細胞，形成細胞群。 1 1、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念用單個用單個B B淋巴細胞進行克隆，得到的細胞群能夠分淋巴細胞進行克隆，得到的細胞群能夠分泌一種化學性質單一、特異性強的抗體，這種抗體泌一種化學性質單一、特異性強的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。就叫做單克隆抗體。遺憾的是，在體外培養(yǎng)條件下，單個遺憾的是，在體外培養(yǎng)條件下，單個B B淋巴細胞是不可能無淋巴細胞是不可能無限增殖的限增殖的探索探索2 2、怎樣才能獲得單克隆抗體？、怎樣才能獲得單克隆抗體？提示提示1 1：僅用細胞培養(yǎng)技術可行嗎？：僅用細胞培養(yǎng)技術可行嗎？提示提示2 2：我們所學的哪種細胞是可以無限增：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B細胞產(chǎn)生抗體的能細胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細胞無限增殖能力同時具備呢？力和腫瘤細胞無限增殖能力同時具備呢？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用利用B B淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能。淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能。利用腫瘤細胞無限增殖的特性。利用腫瘤細胞無限增殖的特性。利用細胞融合的技術將兩種細胞融合利用細胞融合的技術將兩種細胞融合獲得具有獲得具有B B淋巴細胞和腫瘤細胞特性的淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞。雜交瘤細胞。利用動物細胞培養(yǎng)技術大量培養(yǎng)雜交利用動物細胞培養(yǎng)技術大量培養(yǎng)雜交瘤細胞。瘤細胞。雜交瘤細胞既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生雜交瘤細胞既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體。專一抗體。 單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備整個制備過程為何要經(jīng)過整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選兩次篩選? ?第一次篩選：第一次篩選：用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出多種用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出多種雜交瘤細胞雜交瘤細胞第二次篩選第二次篩選（克隆化培養(yǎng)和抗體檢測）：（克隆化培養(yǎng)和抗體檢測）：篩選篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。概念：概念： 由單個雜交瘤細胞由單個雜交瘤細胞進行無性繁殖進行無性繁殖, ,也就是通過也就是通過克隆，形成細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的克隆，形成細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的化學化學性質單一、特異性強的抗體性質單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。稱為單克隆抗體。 （三）（三）單克隆抗體的應用單克隆抗體的應用 與常規(guī)抗體相比，與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體特異性強，單克隆抗體特異性強，靈敏度高靈敏度高，并，并可大量制備可大量制備。應用主要有：應用主要有：1 1、作為診斷試劑、作為診斷試劑2 2、用于、用于治療疾病治療疾病和運載藥物和運載藥物準確、高效、簡易、快速準確、高效、簡易、快速 把抗癌細胞的單克隆抗體與藥物相結合，把抗癌細胞的單克隆抗體與藥物相結合，制成制成“生物導彈生物導彈”。 資料資料： 目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內分泌疾病和遺傳病，用疫性疾病、血液病、內分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內診斷，借以鑒別和另外，用單克隆抗體做體內診斷，借以鑒別和定位體內定位體內“病灶病灶”也引起人們的注意，目前，也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。