考綱要求考綱要求考綱分析考綱分析(1)微生物的分離和微生物的分離和培育培育()(1)主要是無菌技術(shù)與培養(yǎng)主要是無菌技術(shù)與培養(yǎng)基的種類及其應(yīng)用基的種類及其應(yīng)用(2)培養(yǎng)基對微生物培養(yǎng)基對微生物的選擇作用的選擇作用()(2)主要是微生物的篩選、主要是微生物的篩選、分離、純化、鑒別技術(shù)分離、純化、鑒別技術(shù)營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì) 營養(yǎng)基質(zhì)營養(yǎng)基質(zhì) 水、碳源、氮源、無機鹽水、碳源、氮源、無機鹽 pH 氧氣氧氣 稱量稱量 單個細(xì)胞單個細(xì)胞 平板劃線法平板劃線法 無菌無菌 尿素尿素 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法 配制培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基 復(fù)合復(fù)合 C1酶、酶、CX酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶 纖維二糖纖維二糖 透明圈透明圈 纖維素纖維素 纖維素纖維素 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 纖維素酶纖維素酶 比較項目比較項目平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法關(guān)鍵操作關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線基表面連續(xù)劃線一系列的梯度稀釋一系列的梯度稀釋涂布平板法操作涂布平板法操作注意事項注意事項每次劃線先后均需灼燒每次劃線先后均需灼燒接種環(huán)接種環(huán)稀釋度要足夠高，為確保稀釋度要足夠高，為確保實驗成功可以增加稀釋度實驗成功可以增加稀釋度的范圍的范圍菌體獲取菌體獲取在具有顯著的菌落特征在具有顯著的菌落特征的區(qū)域菌落中挑取菌體的區(qū)域菌落中挑取菌體從適宜的稀釋度的平板上從適宜的稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體的菌落中挑取菌體優(yōu)點優(yōu)點可以根據(jù)菌落的特點獲可以根據(jù)菌落的特點獲得某種微生物的單細(xì)胞得某種微生物的單細(xì)胞菌落菌落既可以獲得單細(xì)胞菌落，既可以獲得單細(xì)胞菌落，又能對微生物計數(shù)又能對微生物計數(shù)缺點缺點不能對微生物計數(shù)不能對微生物計數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個操作復(fù)雜，需要涂布多個平板平板比較比較項目項目間接計數(shù)法間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法直接計數(shù)法(顯微計數(shù)法顯微計數(shù)法)原理原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌約含有多少活菌利用特定細(xì)菌計數(shù)利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微定容積的樣品中微生物的數(shù)量生物的數(shù)量公式公式每克樣品中的菌落數(shù)：每克樣品中的菌落數(shù)：(CV)MC：某稀釋度下平板上生長：某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；的平均菌落數(shù)；V：涂布平：涂布平板時所用的稀釋液的體積板時所用的稀釋液的體積(mL)；M：稀釋倍數(shù)：稀釋倍數(shù)每毫升原液所含細(xì)每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)：每小格平均菌數(shù)：每小格平均細(xì)菌數(shù)細(xì)菌數(shù)40010000稀稀釋倍數(shù)釋倍數(shù)缺點缺點當(dāng)兩個或多個菌體連在一起當(dāng)兩個或多個菌體連在一起時，平板上觀察到的只是一時，平板上觀察到的只是一個菌落個菌落不能區(qū)分細(xì)胞死活不能區(qū)分細(xì)胞死活結(jié)果結(jié)果 比實際值偏小比實際值偏小比實際值偏大比實際值偏大比較項目比較項目對照對照重復(fù)重復(fù)目的目的排除非測試因素排除非測試因素對實驗結(jié)果的影對實驗結(jié)果的影響響排除偶然因素排除偶然因素對實驗結(jié)果的對實驗結(jié)果的影響影響實例實例空白對照：確定空白對照：確定培養(yǎng)基制作是否培養(yǎng)基制作是否合格合格同一稀釋度涂同一稀釋度涂布至少布至少3個平個平板板條件條件結(jié)果結(jié)果常用方法常用方法應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍消消毒毒較為溫較為溫和的物和的物理或化理或化學(xué)方法學(xué)方法僅殺死物體僅殺死物體表面或內(nèi)部表面或內(nèi)部的部分對人的部分對人體有害的微體有害的微生物生物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高溫的液體不耐高溫的液體化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源氯氣消毒水源滅滅菌菌強烈的強烈的理化因理化因素素殺死物體內(nèi)殺死物體內(nèi)外所有的微外所有的微生物，包括生物，包括芽孢和孢子芽孢和孢子灼燒滅菌法灼燒滅菌法接種工具接種工具干熱滅菌法干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌培養(yǎng)基及容器的滅菌比較比較項目項目土壤中分解尿素的細(xì)菌的土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離分離分解纖維素的微生物的分分解纖維素的微生物的分離離方法方法利用以尿素為唯一氮源的利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)利用富含纖維素的選擇培利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)原理原理只有分解尿素的細(xì)菌能夠只有分解尿素的細(xì)菌能夠合成脲酶，才能在以尿素合成脲酶，才能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長長因為培養(yǎng)基中含有豐富的因為培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的維素的微生物具有更多的生存機會而大量繁殖生存機會而大量繁殖鑒定鑒定在培養(yǎng)基中加入酚紅指示在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑變紅說明菌落劑，指示劑變紅說明菌落中的菌體為分解尿素的細(xì)中的菌體為分解尿素的細(xì)菌菌剛果紅染色法，菌落周圍剛果紅染色法，菌落周圍出現(xiàn)不變紅的透明圈的菌出現(xiàn)不變紅的透明圈的菌落為分解纖維素的微生物落為分解纖維素的微生物的菌落的菌落酵母膏酵母膏無機鹽無機鹽淀粉淀粉纖維纖維素粉素粉瓊脂瓊脂 CR溶液溶液 水水培養(yǎng)培養(yǎng)基甲基甲培養(yǎng)培養(yǎng)基乙基乙