專題重點專題難點DNA 的粗提取以及鑒定的原理及步驟PCR 技術(shù)的基本操作和應(yīng)用蛋白質(zhì)的提取和分離的基本過程用電泳法分離蛋白質(zhì)的基本操作理解 DNA 粗提取各個步驟的原理和目的PCR 技術(shù)的原理體內(nèi) DNA 復(fù)制與 PCR 技術(shù)的區(qū)別電泳法分離蛋白質(zhì)的基本原理專題 5 5DNA DNA 和蛋白質(zhì)技術(shù)課題 1DNA 的粗提取與鑒定DNA 的提取原理溶解度耐受性DNA 與雜質(zhì)的_不同，DNA 與雜質(zhì)對酶、高溫、洗滌劑的_不同。DNA 粗提取的實驗設(shè)計(1)材料的選?。哼x用 DNA 含量相對_的生物組織，如雞血、菜花、洋蔥等。NaCl 溶液NaCl 溶液(2) 破碎細(xì) 胞( 以雞血 為例 ) ：雞血 細(xì)胞，加蒸 餾水，用_攪拌，用_過濾，收集濾液。玻璃棒紗布(3)去除雜質(zhì)：利用 DNA 在不同濃度的_中溶解度不同，通過控制_的濃度去除雜質(zhì)。(4)DNA 的析出：將處理后溶液過濾，加入與濾液體積相等的、冷卻的_(體積分?jǐn)?shù)為 95%)。酒精溶液較高DNA 的鑒定二苯胺試劑藍(lán)色DNA 溶 解 在 2 mol/L 的 NaCl 溶 液 中 ， 加 入 4 mL 的_，沸水中加熱 5 min，溶液變成_。DNA 提取材料和實驗用具的選擇1實驗材料的選擇原則是選用 DNA 含量高的生物組織。有些材料不宜選用，如哺乳動物成熟紅細(xì)胞(豬、牛、羊的血細(xì)胞)無細(xì)胞核，無法提取 DNA。實驗一般選用雞血或菜花作為實驗材料。2雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的 DNA，容易被玻璃容器吸附，由于細(xì)胞內(nèi) DNA 的含量本來就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的 DNA 就會更少。因此，實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管，這樣可以減少提取過程中 DNA 的損失。實驗操作原理1.細(xì)胞破碎的原理動物細(xì)胞吸水漲破2.用不同濃度的 NaCl溶液提取 DNA 的原理DNA 在 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最小3.提純 DNA 的原理酒精可以溶解蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，而 DNA不溶于酒精；6080 可以使蛋白質(zhì)變性，而 DNA 在 80 以上才會變性；利用蛋白水解酶的專一性可以水解蛋白質(zhì)4.鑒定的原理在沸水浴條件下 DNA 遇二苯胺呈藍(lán)色DNA 的粗提取與鑒定實驗中涉及的原理方法步驟加入物質(zhì)目的1.制備雞血細(xì)胞檸檬酸鈉溶液2.提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)20 mL 蒸餾水3.溶解細(xì)胞核內(nèi)的 DNA2 mol 的 NaCl 溶液 40 mL4.析出含 DNA 的黏稠物蒸餾水5.濾取含 DNA 的黏稠物6.將 DNA 的黏稠物再溶解2 mol/L 的 NaCl 溶液 20 mL7.過濾含 DNA 的 NaCl 溶液實驗步驟分析方法步驟加入物質(zhì)目的8.提取含有雜質(zhì)較少的 DNA冷卻的 95%的酒精 50 mL9.DNA 的鑒定A：1)向試管中加入 0.015 mol/L 的NaCl 溶液 5 mL2)加入 DNA3)加入 4 mL 二苯胺試劑B：1)向試管中加入 0.015 mol/L 的NaCl 溶液 5 mL2)加入 4 mL 二苯胺試劑續(xù)表：目的()：防止血凝。加速血細(xì)胞破裂。溶解DNA。使 2 mol/L 的 NaCl 溶液稀釋至 0.14 mol/L，促使 DNA最大限度地析出。使含 DNA 的黏稠物被留在紗布上。使含 DNA 的黏稠物盡可能多地溶于溶液中。除去含 DNA 的濾液中的雜質(zhì)。提取 DNA。鑒定 DNA 的存在。A：出現(xiàn)藍(lán)色；B：無變化。提取 DNA 的原材料【例 1】做 DNA 提取與鑒定實驗時，用雞血而不用豬血的原因是()A雞血的價格低B豬的紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核，不易提取 DNAC雞血不凝固，豬血容易凝固D用雞血提取 DNA 更簡便【名師點撥】：DNA 提取實驗材料選取的原則是 DNA 含量高，便于提取。豬為哺乳動物，成熟的紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核，不含 DNA?！敬鸢浮浚築【配對練習(xí) 1】能作為提取 DNA 的最佳材料的是()A雞的全血C鴿子的血細(xì)胞液B老鼠的紅細(xì)胞D菠菜綠葉解析：雞的全血，血漿太多，應(yīng)該除去血漿；老鼠作為哺乳動物，紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核，沒有 DNA ，不適合作材料；菠菜綠葉由于有色素，影響實驗觀察的效果；鴿子的血細(xì)胞液最為適合，能夠獲得較多的 DNA。答案：CDNA 提取的實驗操作【例 2】在 DNA 的提取過程中下列操作的生成物可以丟棄的是()第一，放入 2 mol/L 的 NaCl 溶液中，攪拌后過濾，得到黏稠物和過濾液；第二，放入 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中，攪拌后過濾，得到黏稠物和過濾液；第三，放入冷卻的 95%酒精溶液中，攪拌后過濾，得到黏稠物和過濾液；ACBD【名師點撥】：不同濃度的 NaCl 溶液中 DNA 的溶解度不同，0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中 DNA 的溶解度最小，DNA 析出，過濾后，存在于黏稠物中。在 2 mol/L 的 NaCl 溶液中，DNA的溶解度大，過濾后，DNA 存在于濾液中。酒精可以溶解蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，而 DNA 不溶于酒精，這正是 DNA 提取和進(jìn)一步提純的原理?！敬鸢浮浚篋【配對練習(xí) 2】在 DNA 的粗提取中，兩次有 DNA 的析出，其依據(jù)的原理是()DNA 在 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最小，DNA 析出酒精可以溶解蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，而 DNA 不溶于酒精A兩次都是B兩次都是C第一次是，第二次是D第一次是，第二次是解析：在 DNA 的粗提取中，第一次 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最小，DNA 析出；第二次酒精可以溶解蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，而 DNA 不溶于酒精而析出，兩次都有 DNA 的析出。答案：C影響 DNA 提取質(zhì)量的因素【例 3】在 DNA 提取過程中，最好使用塑料試管和燒杯，目的是()A不易破碎B減少提取過程中 DNA 的損失C增加 DNA 的含量D容易洗刷【名師點撥】：DNA 容易被玻璃容器吸附，為減少提取過程中 DNA 的損失，最好用塑料試管和燒杯。【答案】：B【配對練習(xí) 3】下列操作中，對 DNA 的提取量影響最小的是()A使雞血細(xì)胞在蒸餾水中充分破裂，放出 DNA 等核物質(zhì)B攪拌時，要使用玻璃棒沿一個方向輕緩攪拌C在“析出 DNA 黏稠物”時，要緩緩加蒸餾水，直至溶液中黏稠物不再增加D在用酒精沉淀 DNA 時，要使用冷酒精，甚至再將混合液放入冰箱中冷卻解析：攪拌時，要使用玻璃棒沿一個方向輕緩攪拌，有利于混合均勻，加速 DNA 析出，但是對 DNA 的提取量幾乎沒有影響。答案：B