實(shí)驗(yàn)五：從番茄醬中提取番茄紅素和胡蘿卜素一、實(shí) 驗(yàn) 目 的1. 學(xué)習(xí)從天然產(chǎn)物中提取有機(jī)化合物的方法。2. 學(xué)習(xí)用薄層層析法檢驗(yàn)有機(jī)化合物的基本原理，點(diǎn)樣，展開(kāi)和計(jì)算Rf值的方法。二、提 取 方 法1. 浸取法：選用合適的溶劑，根據(jù)相似相溶原理，直接把溶劑加到固體樣品上加熱回流提取，本次試驗(yàn)就用的是此法。平時(shí)熬中藥也是使用的該方法。用水煮中藥就是把中藥的有效成分提取出來(lái)。2. 水蒸汽蒸餾法：天然動(dòng)植物中含有一些較易揮發(fā)的成分。利用水蒸汽可以把這些物質(zhì)蒸出提取。天然的很多香料的提?。ㄈ绯扔偷奶崛。┚褪怯玫拇朔?。3. 連續(xù)提取法：原理同第一種方法，但是使用了一種特殊的裝置索氏提取器。使用少量的溶劑能重復(fù)用來(lái)浸取達(dá)到濃縮的目的。如：茶葉種咖啡因的提取就是用此法。三、本實(shí)驗(yàn)中的具體方法1. 取一平勺番茄醬于50ml圓底燒瓶中，加5 ml 95 的乙醇，裝上冷凝管，回流3-5分鐘，冷卻。用玻璃漏斗墊棉花過(guò)濾。濾液置于帶塞子的錐形瓶?jī)?nèi)，濾渣放回原燒瓶。加入乙醇的目的是破壞細(xì)胞壁，為下一步用石油醚的提取創(chuàng)造條件。2. 上部的濾渣及棉花一起放入燒瓶中，加入10 ml石油醚，加熱回流10分鐘，冷卻，過(guò)濾。濾液和上面濾液合并，濾渣扔掉。3. 將合并的濾液倒入分液漏斗中，加入5 ml飽和食鹽水，萃取，分層。其中有機(jī)層進(jìn)行薄板層析，無(wú)機(jī)層作對(duì)比用。加入飽和食鹽水的目的：1）鹽析，分層快且清；2）因?yàn)镹aCl溶液是飽和水溶液，所以溶解有效成分少，即損失小。4. 有機(jī)相加入少量Na2SO4干燥很重要。b-胡蘿卜素是合成VB6的原料，極性小，Rf值大，在上邊。番茄紅素極性大，Rf值小，在下邊。四、本實(shí)驗(yàn)中薄板層析的爬板1. 介紹色譜法包括薄層法，柱色譜，紙色譜氣相色譜和液相色譜。今天只作薄層色譜。2. 色譜法是分離和鑒定有機(jī)化合物的常用方法。3. 原理：利用混合物個(gè)組分在固定相和流動(dòng)相的溶解度不同，即在兩相間分配系數(shù)的不同而使各組分分開(kāi)。4. 特點(diǎn)：時(shí)間短；分離效果好；需要樣品量少；適用于在較高溫度下容易發(fā)生化學(xué)變化的化合物。5. 事先準(zhǔn)備：用鉛筆和尺子輕輕畫(huà)出起始線和終止線；6. 點(diǎn)樣：用直徑1mm的平頭毛細(xì)管點(diǎn)取提取物，先在廢紙上點(diǎn)一下（快速），然后在起始線線上少量多次地點(diǎn)樣（保證一定濃度，一般需要50次以上）。待溶劑揮發(fā)以后，輕放到裝好展開(kāi)劑地展開(kāi)缸內(nèi)，不要讓展開(kāi)劑濺起或傾斜；7. 展開(kāi)（爬板）：當(dāng)展開(kāi)劑爬到終止線時(shí)，停止爬行，取出。因?yàn)閎-胡蘿卜素（黃點(diǎn)）易揮發(fā)，所以要盡快畫(huà)出黃點(diǎn)的位置；8. Rf值的計(jì)算：分離效果好時(shí)Rf應(yīng)為0.15 0.75之間。9. 意義：定性鑒定，監(jiān)測(cè)化學(xué)反應(yīng)等等。10. 點(diǎn)樣：再薄板一端10mm（下）及另一端5mm（上）處用鉛筆輕輕畫(huà)一道痕跡，用直徑小于1mm的毛細(xì)管（平口）點(diǎn)樣，點(diǎn)樣時(shí)要做到少量多次，保證樣品點(diǎn)小而又有一定的濃度，一塊板上可以點(diǎn)兩個(gè)點(diǎn)。 11. 展開(kāi)劑的選擇：根據(jù)樣品的極性而定，極性大的化合物可選用極性較大的展開(kāi)劑。為達(dá)到較好的分離效果，可用混合溶劑。做多次展開(kāi)后可確定一合適的配比。展開(kāi)時(shí)，溶劑前沿離板頂5mm停止。12. 顯示方法：A)有色化合物可直接觀察；B)無(wú)色的，用顯色劑顯色，如碘熏法；紫外光顯色，用硅膠GF254，有樣品點(diǎn)的位置再紫外燈光照射下發(fā)暗。13. Rf值計(jì)算公式：Rf = 樣品中某組份移動(dòng)離開(kāi)原點(diǎn)的距離 / 展開(kāi)劑前沿距離原點(diǎn)中心的距離五、注 意 事 項(xiàng) 本次實(shí)驗(yàn)使用95乙醇和石油醚提取。兩種混合后用NaCl水溶液洗滌。乙醇主要進(jìn)入水相，建議水相不要棄去。點(diǎn)樣時(shí)在一塊板上點(diǎn)兩點(diǎn)：一為有機(jī)相，一為水相。觀察比較有何不同。 展開(kāi)劑的配比控制在石油醚:丙酮=9:1。 同時(shí)可以做一個(gè)比較，采用12:1。在混合展開(kāi)劑中丙酮的極性大于石油醚，因此如果丙酮含量增大，極性增大，使得分離效果很差。如果增加石油醚的含量，使展開(kāi)劑的極性變小，分離效果較好。 觀察：如果紅點(diǎn)緊追黃點(diǎn)，且Rf>0.75，則要增加石油醚的用量如達(dá)到12:1。 番茄紅素為紅色，b-胡蘿卜素為黃色，展開(kāi)后的薄板放置一段時(shí)間后，樣品顏色褪去。因?yàn)閎-胡蘿卜素極易氧化，故在提取和展開(kāi)過(guò)程中，注意不要敞開(kāi)口，要用瓶蓋蓋住。 番茄紅素的雙鍵比b-胡蘿卜素的雙鍵多，因此番茄紅素的極性大，在爬板時(shí)爬地慢，在下面，b-胡蘿卜素的極性小，爬地快，且易氧化。 展開(kāi)缸用后不要用水洗！ 薄板展開(kāi)后臨摹在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上，板用后洗干凈放回窗臺(tái)上地塑料筐內(nèi)。 在實(shí)驗(yàn)報(bào)告臨摹一塊走好的薄板最理想的。 六、所用儀器1 50ml圓底燒瓶 2 球形冷凝管3 25ml錐形瓶4 50ml錐形瓶5 14#/19#變口6 梨形分液漏斗7 5ml量筒8 10ml量筒9 滴管10 藥勺11 攪拌棒12 展開(kāi)缸13 塞子 2個(gè)14 普通漏斗 共15件