乙肝病毒大蛋白研究 病毒血清學(xué)檢測指標 直接指標 外膜蛋白 表面抗原 降解或代謝產(chǎn)物蛋白 病毒核酸DNA或RNA間接指標 各種抗體IgG IgM等 目前乙肝實驗血清學(xué)檢測的需要 狀況 指標不少 但是缺少以下關(guān)鍵指標1 什么是e CHB肝炎 e抗原陰性肝炎 血清學(xué)指標 抗病毒治療沒有實驗室終點指標 臨床肝炎治療合理用藥指導(dǎo) 避免過度用藥 特別是 陰性后應(yīng)該持續(xù)多長時間用藥 目前臨床乙肝病毒檢測的缺陷 HBeAg陰性肝炎 小三陽肝炎 的血清學(xué)診斷指標缺乏過去認為大三陽轉(zhuǎn)小三陽即HBeAg的陰轉(zhuǎn)意味著乙肝病毒復(fù)制降低 傳染性減弱 但是近年國內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)部分小三陽在血清轉(zhuǎn)化 或變異 后病毒仍然復(fù)制 而且預(yù)后更嚴重 但是目前沒有血清免疫學(xué)指標可以檢測小三陽病毒攜帶者是否病毒復(fù)制 藥物治療效果評價血清學(xué)指標缺乏由于HBsAg非常難轉(zhuǎn)陰 而HBVDNA轉(zhuǎn)陰停藥容易反彈 抗病毒治療缺乏終點指標 抗病毒治療效果監(jiān)測 臨床上缺乏評估抗病毒治療效果的指標 以HBVDNA陰轉(zhuǎn)作為治療的終點不恰當 此時停藥病情易反復(fù) 小三陽兩種預(yù)后 病毒休眠 不復(fù)制 預(yù)后好 病毒保持復(fù)制水平 肝硬化 肝癌 什么指標能夠分辨開 抗病毒治療過程中病毒顆粒消退順序 最先消失 其次消失 最后消失 DNA陽性大蛋白陽性 DNA陰性大蛋白陽性 DNA陰性大蛋白陰性 抗病毒治療效果監(jiān)測 臨床上缺乏評估抗病毒治療效果的指標 以HBVDNA陰轉(zhuǎn)作為治療的終點不恰當 此時停藥病情易反復(fù) 沒有指標預(yù)示治療終點 期望HBsAg轉(zhuǎn)陰 帶來過高期待 導(dǎo)致過度用藥 增加患者負擔以及浪費資源 據(jù)估計每年20 40 左右的治療是 多余 的 陰轉(zhuǎn)就停藥 導(dǎo)致過早停藥 引起病情反彈 尋找比外周血DNA檢測更合適的指標 大部分人熟悉的 乙肝兩對半 檢測 其實并非乙肝病毒的傳染物質(zhì)和致病物 乙肝兩對半 只能反映一個人是否感染過乙肝 卻不能直接深入地揭示乙肝病毒在人體內(nèi)的復(fù)制和致病情況 也就不能更好地指導(dǎo)臨床用藥和制訂治療方案 有效的辦法 乙肝病毒DNA定量試驗 但是外周血中DNA陰轉(zhuǎn)已經(jīng)不能作為治療終點還有比DNA更好的標志物嗎 HBeAg陰性活動期肝炎 HBeAg陰性活動期肝炎臨床診斷現(xiàn)狀 1 傳統(tǒng) 兩對半 指標不能反映此類患者HBV復(fù)制程度 2 缺乏指導(dǎo)合理治療的指標 3 HBVDNA檢測不易于各級醫(yī)療機構(gòu)廣泛開展 4 臨床上急需能夠反映HBV復(fù)制程度及指導(dǎo)治療的血清學(xué)指標 解決方案 通過研制針對復(fù)雜構(gòu)象結(jié)構(gòu)的大蛋白的單抗直接檢測大蛋白反式激活域大蛋白是外周血中唯一可以檢測的病毒反式激活因子大蛋白與肝內(nèi)病毒復(fù)制密切相關(guān) 和病情反彈密切相關(guān) 是抗病毒治療的輔助終點指標 大蛋白檢測可以彌補目前項目的不足 檢測Dane顆粒 管狀病毒顆粒 大蛋白與肝內(nèi)病毒復(fù)制 不是外周血 密切相關(guān)用于e抗原檢測的補充大蛋白晚于血液內(nèi) 消退 早于HBsAg消退大蛋白直接導(dǎo)致肝細胞損傷 直接毒性作用大蛋白具有反式激活增強病毒復(fù)制作用 HBV LHBs臨床使用的意義 e抗原的補充 病毒攜帶者體內(nèi)病毒復(fù)制的確切血清學(xué)指標 特別是e抗原變異或轉(zhuǎn)化后可作為e抗原的補充 2 大蛋白具有反式激活病毒復(fù)制的能力 大蛋白存在與否可預(yù)測病情反彈 大蛋白轉(zhuǎn)陰是病毒清除的最早跡象 可以作為抗病毒治療終點輔助指標 HBV的表面抗原的組成 不存在單獨前 蛋白 前 是大蛋白一部分 乙肝病毒包膜蛋白研究進展 1995 2004年發(fā)現(xiàn)大蛋白前S區(qū)有復(fù)雜構(gòu)象結(jié)構(gòu) 是被發(fā)現(xiàn)具有拓撲結(jié)構(gòu)的第一個病毒外膜蛋白1996 年發(fā)現(xiàn)大蛋白具有反式激活病毒復(fù)制的作用2002年發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致肝細胞病變及凋亡的主要原因是大蛋白 致病性蛋白 2003年Nature發(fā)表文章總結(jié)其反式激活機理2004年國際上進行大蛋白特殊拓撲結(jié)構(gòu)研究2004年成功構(gòu)建針對構(gòu)象型表位的單克隆抗體 反式激活蛋白 在同一條核酸鏈上起調(diào)控基因表達作用的核酸序列稱為順式作用元件 反式激活 transactivation 既某一基因的編碼蛋白轉(zhuǎn)而激活同一基因的遠離部位 或另一基因的轉(zhuǎn)錄和表達 研究發(fā)現(xiàn)乙肝病毒的一些組成蛋白具有反式激活作用 蛋白質(zhì) DNA 反式激活作用 大蛋白試劑臨床研究 1 HBVDNA陽性標本中HBV LP的陽性符合率 注 1阿德福韋抗病毒治療患者43例 共檢出HBVDNA陽性152次 2拉米夫定抗病毒治療患者51例 共檢出HBVDNA陽性133次 2 不同HBVDNA拷貝數(shù)中HBV LP陽性率以及OD值比較 大蛋白試劑臨床研究 注 解放軍傳染病研究所 HBVDNA拷貝數(shù)對數(shù)值與HBV LPOD值的相關(guān)系數(shù) r 0 945 大蛋白試劑臨床研究 注 北京地壇醫(yī)院與沈陽傳染病醫(yī)院匯總 其中北京地壇醫(yī)院為阿德福韋抗病毒治療患者標本 HBVDNA拷貝數(shù)對數(shù)值與HBV LP含量 ng 的相關(guān)系數(shù) 3 不同HBVDNA拷貝數(shù)中HBV LP陽性率以及含量比較 r 0 935 大蛋白試劑臨床研究 大蛋白試劑臨床研究 5 HBVDNA HBeAg與HBV LP三者在乙肝患者中的比較 HBV LP可以作為一個評估抗病毒治療效果以及判定治療終點的指標 能夠合理的指導(dǎo)患者的用藥 避免過早停藥導(dǎo)致的病情反復(fù)