化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則1農(nóng)藥對環(huán)境安全性影響的因素化學(xué)農(nóng)藥對環(huán)境的安全性與農(nóng)藥的性質(zhì)、施用方法及施用地區(qū)的氣候土壤條件密切相關(guān)，就這三方面的問題分別討論如下：1.1農(nóng)藥的理化性質(zhì)對生態(tài)環(huán)境安全性影響的預(yù)測農(nóng)藥理化性質(zhì)的指標(biāo)很多，它們從不同方面影響農(nóng)藥對環(huán)境的安全性，其中影響最大的有以下幾個指標(biāo)：1.1.1蒸氣壓農(nóng)藥進(jìn)入環(huán)境后在氣、水、土各介質(zhì)間遷移、擴(kuò)散與再分配特性受農(nóng)藥蒸氣壓影響很大，蒸氣壓愈大，農(nóng)藥就愈容易從土壤或水域環(huán)境轉(zhuǎn)向大氣空間，這樣就容易進(jìn)一步引起農(nóng)藥的光降解作用；農(nóng)藥在土壤中的移動性能，受農(nóng)藥蒸氣壓影響也很大。1.1.2水溶性水溶性的大小對農(nóng)藥在環(huán)境中的移動性、吸附性、生物富集性以及農(nóng)藥的毒性都有很大影響。水溶性大的農(nóng)藥容易從農(nóng)田流向水體，或通過滲漏進(jìn)入地下水之中，也容易被生物吸收，導(dǎo)致對生物的急性危害；水溶性弱脂溶性強的農(nóng)藥，容易在生物體內(nèi)積累，引起對生物的慢性危害。1.1.3分配系數(shù)分配系數(shù)是指農(nóng)藥在互不相溶的兩種極性與非極性溶劑中的分配能力，分配系數(shù)大的農(nóng)藥容易在非生物物質(zhì)與生物體內(nèi)富集，分配系數(shù)小的農(nóng)藥，容易在環(huán)境中擴(kuò)散，從而也擴(kuò)大了農(nóng)藥的污染范圍。1.1.4化學(xué)穩(wěn)定性農(nóng)藥的穩(wěn)定性是指農(nóng)藥進(jìn)入環(huán)境后遭受物理、化學(xué)因子影響時分解難易程度的指標(biāo)，這是評價農(nóng)藥在環(huán)境中穩(wěn)定性基礎(chǔ)資料。1.1.5雜質(zhì)一般優(yōu)質(zhì)農(nóng)藥其雜質(zhì)成份對農(nóng)藥影響不大，但有些農(nóng)藥的雜質(zhì)成份則成了影響環(huán)境安全的主要對象，如666中的幾點種異構(gòu)體，氟樂靈中的亞硝煙彌漫胺，甲胺磷中的不純物等，因此農(nóng)藥的純度和不純物的成份必須在基礎(chǔ)資料中提供。1.2農(nóng)藥環(huán)境行為特征對環(huán)境安全性影響預(yù)測農(nóng)藥環(huán)境行為是指農(nóng)藥進(jìn)入環(huán)境后，在環(huán)境中遷移轉(zhuǎn)化過程中的表現(xiàn)，其中包括物理行為、化學(xué)行為與生物效應(yīng)等三個方面，它比農(nóng)藥理化特性指標(biāo)更直觀地反映了農(nóng)藥對生態(tài)環(huán)境污染影響的狀態(tài)。農(nóng)藥環(huán)境行為的主要指標(biāo)有：1.2.1揮發(fā)作用農(nóng)藥揮發(fā)作用是指在自然條件下農(nóng)藥從植物表面、水面與土壤表面通過揮發(fā)逸入大氣中的現(xiàn)象。農(nóng)藥揮發(fā)作用的大小除與農(nóng)藥蒸氣壓有關(guān)外，還與施藥地區(qū)的土壤和氣候條件有關(guān)。農(nóng)藥殘留在高溫、濕潤、沙質(zhì)的土壤中比殘留在寒冷、干燥、粘質(zhì)的土壤中容易發(fā)揮。農(nóng)藥揮發(fā)性的大小，也會影響農(nóng)藥在土壤中的持留性及其在環(huán)境中在分配的情況。揮發(fā)性大的農(nóng)藥一般持留較短，而在環(huán)境中的影響范圍較大。1.2.2土壤吸附作用農(nóng)藥吸附作用是指農(nóng)藥被吸持在土壤中的能力。農(nóng)藥吸附能力的強弱決定與農(nóng)藥的水容性，分配系數(shù)與離解特性等。水溶性小，分配系數(shù)大，離解作用強的農(nóng)藥，容易被土壤吸附；土壤性質(zhì)對農(nóng)藥吸附作用的影響也很大。有機(jī)質(zhì)含量高，代換量大，質(zhì)地粘重的土壤，就容易吸附農(nóng)藥。農(nóng)藥吸附性能的強弱對農(nóng)藥的生物活性、殘留性與移動性都有很大影響。農(nóng)藥被土壤強烈吸附后其生物活性與微生物對它的降解性能都會減弱。吸附性能強的農(nóng)藥，其移動與擴(kuò)散的能力弱，不易進(jìn)一步造成對周圍環(huán)境污染。1.2.3農(nóng)藥淋溶作用農(nóng)藥淋溶作用是指農(nóng)藥在土壤中隨水垂直向下移動的能力。影響農(nóng)藥淋溶作用的因子與影響農(nóng)藥吸附作用的因子基本相同，恰好成反相關(guān)關(guān)系。一般來說，農(nóng)藥吸附作用愈強，其淋溶作用愈弱。另外與施用地區(qū)的氣候、土壤條件也關(guān)系密切。在多雨，土壤砂性的地區(qū)，農(nóng)藥容易被淋溶。農(nóng)藥淋溶作用的強弱，是評價農(nóng)藥是否對地下水有污染危險的重要指標(biāo)。1.2.4土壤降解作用農(nóng)藥在土壤的降解包括土壤微生物降解、化學(xué)降解與光降解三部分。影響土壤降解的因子，除與農(nóng)藥的性質(zhì)有關(guān)外，與氣候及土壤條件密切。在高溫濕潤，土壤有機(jī)質(zhì)含量高，土壤微生物活躍和土壤偏堿的地區(qū)，農(nóng)藥就容易降解。土壤是農(nóng)藥在環(huán)境中的貯藏庫，也是農(nóng)藥在環(huán)境中的集散地。農(nóng)藥在土壤中的降解性能，是評價農(nóng)藥對整個環(huán)境危害影響十分重要的指標(biāo)。農(nóng)藥在土壤中的持留愈長，對環(huán)境的污染以及對各種環(huán)境生物，以至對人類的潛在威脅也愈大。1.2.5水環(huán)境中的降解與水解作用農(nóng)藥在水環(huán)境中的降解是指農(nóng)藥在水環(huán)境中遭受微生物降解、化學(xué)降解與光降解的總稱，它是評價農(nóng)藥在水體中殘留特性的指標(biāo)。其降解速率受農(nóng)藥的性質(zhì)與水環(huán)境條件兩方面因子所制約。水解是指在實驗室特定條件下農(nóng)藥遭受化學(xué)降解的能力。一般的農(nóng)藥，在高溫、偏堿性的水體中容易降解。1.2.6農(nóng)藥光降解是指揮發(fā)進(jìn)入大氣中的農(nóng)藥與殘留在作物、水體和土壤表面的農(nóng)藥在陽光的作用下遭受光降解的能力。農(nóng)藥光降解作用的難易除與農(nóng)藥的性質(zhì)、施藥季節(jié)的光照強度有關(guān)外，還與農(nóng)藥在環(huán)境中的存在狀態(tài)，以及環(huán)境中是否存在有光敏性質(zhì)有關(guān)。溶液中含有丙酮或環(huán)境存在有胡敏酸、富非酸等物質(zhì)時，對一般農(nóng)藥都能促進(jìn)其光降解強度。1.2.7生物富集作用生物富集作用是指農(nóng)藥從環(huán)境中進(jìn)入生物體內(nèi)蓄積，進(jìn)而在食物鏈中互相傳遞與富集的能力。農(nóng)藥生物富集作用大小與農(nóng)藥的水溶性、分配系數(shù)以及與生物的種類，生物體內(nèi)的脂肪含量，生物對農(nóng)藥代謝能力等因子有關(guān)。農(nóng)藥的生物富集能力愈強，對生物的污染與慢性危害愈大。1.3農(nóng)藥施用方法對環(huán)境安全影響預(yù)測農(nóng)藥的不同施用方式對農(nóng)藥在環(huán)境中的行為與對非靶生物安全性影響關(guān)系極大，主要影響因子有；1.3.1劑型不同的農(nóng)藥劑型對農(nóng)藥在環(huán)境中的殘留性、移動性以及對非靶生物的危害性均有影響。從農(nóng)藥在環(huán)境中殘留性比較，顆粒劑>粉劑>乳劑；對非靶生物接觸危害的程度比較，它剛好與殘留性成反相關(guān)關(guān)系。1.3.2施藥方法噴施、撒施，特別是用飛機(jī)噴灑的方式，影響范圍廣，對非靶生物的危害性大；條施，穴施和用作土壤處理的方法，污染范圍小，對非靶生物比較安全。1.3.3施藥時間施藥時間的影響主要與氣候條件及非靶生物生長發(fā)育的時期有關(guān)。在高溫多雨地區(qū)，農(nóng)藥容易在環(huán)境中降解與消散，在非靶生物活動期與繁殖期噴灑農(nóng)藥，對非靶生物的殺傷率大；另外，施藥時間對農(nóng)產(chǎn)品是否會遭受污染的關(guān)系也十分密切。1.3.4施藥數(shù)量農(nóng)藥對環(huán)境的危害性主要決定于農(nóng)藥的毒性與用量兩個因子。高毒的農(nóng)藥，只要將其用量控制在允許值范圍內(nèi)，它就不會造成對環(huán)境的實際危害；相反，低毒農(nóng)藥用量過大，同樣會造成危害。1.3.5施藥地區(qū)與施藥范圍施藥地區(qū)的影響主要與當(dāng)?shù)氐臍夂蚺c土壤條件有關(guān)，在高溫多雨地區(qū)，農(nóng)藥在環(huán)境中消減速率就要比在干寒地區(qū)快；在稻田或堿性土中施用農(nóng)藥，一般比在旱地或酸性土中降解要袂；施藥范圍愈廣，其影響面也愈大。在水源保區(qū)、風(fēng)景旅游區(qū)與珍稀物種保護(hù)區(qū)施用農(nóng)藥，更應(yīng)注意安全。1.4農(nóng)藥對非靶生物影響的預(yù)測在靶生物與非靶生物并存的環(huán)境中，使用農(nóng)藥難免對非靶生物會造成一定的危害。不同的農(nóng)藥品種，由于其施藥對象、施藥方式、毒性及其危及生物種類的不同，其影響程度也隨之而異。環(huán)境生物種類很多，在評價時只能選擇有代表性的，并具有一定經(jīng)濟(jì)價值的生物品種，其中包括陸生生物、水生生物和土壤生物作為評價指標(biāo)。2農(nóng)藥安全性評價指標(biāo)與評價試驗程序2.1農(nóng)藥環(huán)境安全評價指標(biāo)由于農(nóng)藥的環(huán)境安全性評價還兼有安全性綜合評價的職能，因此，在進(jìn)行環(huán)境安全評價時，除了提供環(huán)境評價必備的資料外，還須提供有關(guān)的基礎(chǔ)資料與附加試驗資料，所謂必備的評價資料，是指由國家環(huán)境保護(hù)局規(guī)定的項目，它是評價環(huán)境安全性的核心資料；而基礎(chǔ)資料可參照或引自化工部門、衛(wèi)生部門或農(nóng)業(yè)部門提供的實驗數(shù)據(jù)；附加資料是指在審查必備資料時認(rèn)為還須補充提供的一些試驗項目。這三部分資料的具體內(nèi)容如下：2.1.1必備資料A基本理化性質(zhì)與環(huán)境行為特征指標(biāo)水溶性、蒸氣壓、分配系數(shù)；揮發(fā)作用、土壤吸附作用、淋溶作用、土壤降解作用、水解作風(fēng)、光降解作用、富集作用。B非靶生物的毒性指標(biāo)鳥類、蜜蜂、家蠶、天敵（赤眼蜂、蛙類）、魚類、水蚤、藻類、蚯蚓、土壤微生物。2.1.2基礎(chǔ)資料A農(nóng)藥理化特性指標(biāo)農(nóng)藥的通用名、化學(xué)名、結(jié)構(gòu)式、有效成份合量及雜質(zhì)成份、熔點、沸點、密度、外觀、吸收光譜-紫外、可見光譜，乳化性、懸浮性、儲藏穩(wěn)定性。B推薦的農(nóng)藥使用模式與作物殘留資料劑型、施用方法、施用時間、施用數(shù)量、施用地區(qū)和施用范圍以及農(nóng)藥在作物上的最終殘留量和MRL值。C農(nóng)藥的毒理學(xué)指標(biāo)農(nóng)藥對溫血動物的急性毒性、亞急性毒性、慢性毒性與三致試驗資料及ADI值。2.1.3附加資料對一些溶解度大，吸附性弱，同時又有可能污染化水體的農(nóng)藥，必要時須做地下水影響評價試驗；在土壤中積累性強，對環(huán)境可能有危害的降解產(chǎn)物，須增做有毒降解物的環(huán)境行為與生物效應(yīng)試驗；對一些脂溶性強，毒性大，在生物體內(nèi)難降解的農(nóng)藥，及其具有同樣性質(zhì)的代謝產(chǎn)物，須進(jìn)一步做富集性試驗與慢性毒性試驗。2.2農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗程序由于農(nóng)藥的品種很多，性質(zhì)和使用方法各異，因此在安全評價時要求提供的指標(biāo)也隨之而異。對擬開發(fā)的農(nóng)藥品種，首先要測定其對環(huán)境行為密切相關(guān)的幾個理化指標(biāo)，包括水溶性、蒸氣壓、分配系數(shù)，然后同時進(jìn)行對非靶生物的急性毒性試驗與農(nóng)藥的環(huán)境行為特征試驗。在非靶生物的毒性試驗中，在旱地上噴施、撒施的農(nóng)藥，須做陸生生物的毒性試驗，包括對鳥類、蜜蜂、家蠶、天敵、蚯蚓與土壤微生物的影響；用作土壤處理的農(nóng)藥，僅須做對蚯蚓土壤生物的影響；種子包衣或用作毒餌的農(nóng)藥，只須做對鳥類的毒性；而對雖用與旱地，但其殘留性與移動性都很強，有污染水體危害的農(nóng)藥，須做對水生物毒性試驗。用于水田或直接用于水域的農(nóng)藥，須做對水生生物的毒性試驗，包括魚類、水蚤和藻類；對一些揮發(fā)性、飄移性強，用于水田的農(nóng)藥，應(yīng)增加做對陸生生物的毒性試驗。環(huán)境行為試驗部分，分在水域施用與在農(nóng)田施用（包括旱地和水田）兩種不同情況：直接用于水域的農(nóng)藥，須做在水體中的降解性試驗，對其中難降解的農(nóng)藥，還須做在魚體內(nèi)的富集試驗與慢性毒性試驗；用于農(nóng)田的農(nóng)藥，首先要做土壤降解試驗，對其中難降解的農(nóng)藥，既要求做對蚯蚓、鳥類的富集試驗和慢性試驗，又要求做在土壤中的移動性能的測定；對其中移動性強，又有可能污染水體的農(nóng)藥，還要進(jìn)一步做農(nóng)藥在水體中的降解試驗與在魚體內(nèi)的富集試驗和慢性毒性試驗，必要時還要做對地下水影響評價試驗。對一些蒸氣壓高的農(nóng)藥，須做輝發(fā)性試驗。上述評價試驗程序適用于殺蟲劑、殺菌劑、除草劑與植物生長調(diào)節(jié)劑在農(nóng)田或水域中施用時的情況，對衛(wèi)生用藥與殺鼠劑的評價試驗須另作規(guī)定。對一些可能進(jìn)入環(huán)境的其它有毒化學(xué)品的評價試驗，也可參照本試驗程序試行。以上是新農(nóng)藥在申請登記時須要做的農(nóng)藥環(huán)境安全性預(yù)評價工作。對一些使用量大，在預(yù)評價中對其潛在危害性一時尚難確定的農(nóng)藥品種，在其登記后，仍須在實地做一些化學(xué)與生物的監(jiān)測與監(jiān)視的安全性現(xiàn)狀中發(fā)現(xiàn)有較大問題的農(nóng)藥品種，在其申請農(nóng)藥再登記時，就可修改其原登記的有關(guān)條款。3農(nóng)藥對環(huán)境安全性評價試驗準(zhǔn)則3.1環(huán)境行為特征評價試驗準(zhǔn)則（包括理化特性部分）3.1.1蒸氣壓測定測定蒸氣壓的方法很多，有動態(tài)法、靜態(tài)法、蒸氣壓力計法，蒸氣壓平衡法、氣體飽和法等，各種不同方法適用于一定蒸氣壓范圍的化合物，一般農(nóng)藥的蒸氣壓較低，氣體飽和適用多數(shù)農(nóng)藥的蒸氣壓測定。3.1.2溶解度測定供試農(nóng)藥要用純品，試驗用水用重蒸餾水，溫度一般為20，或根據(jù)使用地區(qū)情況選擇兩極溫度，因各種農(nóng)藥的溶解度差異很大，分別選用以下合適的測定方法，溶解度的單位用g/L或mg/L。（1）柱淋洗法適用于溶解度<10-2g/L的化合物，將供試農(nóng)藥涂布在惰性的玻璃微球上，裝于玻璃柱內(nèi)，用水以不同速度淋滌，待流出液中農(nóng)藥含量不變時，根據(jù)已恒定不變的數(shù)值，求出農(nóng)藥的溶解度。（2）調(diào)溫法適用于溶解度>10-2g/L的物質(zhì)，將供試農(nóng)藥在略高于試驗溫度的水中溶解，然后將溫度降至試驗溫度，并在20的恒溫下振搖24小時，達(dá)到平衡后，除去不溶物，再測定溶液中農(nóng)藥的濃度，即為水中的溶解度。農(nóng)藥水溶性的大小，可用來估算農(nóng)藥的分配系數(shù)與生物富集性；農(nóng)藥的安全性，根據(jù)水溶性的大小可劃分為三類：a溶解度<0.5ppm的化合物，其生物富集性較高，對生態(tài)系統(tǒng)有一定的危險性；b溶解度在0.5-50.0ppm之間的農(nóng)藥，可能有一定的危險性，使用對應(yīng)注意安全；c溶解度>500ppm的農(nóng)藥，不易在生物體內(nèi)富集，但易引起急性危害。3.1.3分配系數(shù)測定農(nóng)藥的分配系數(shù)ow通常是指一定溫度下,農(nóng)藥在等體積正辛醇與水兩個不互溶解的液相系統(tǒng)中分子濃度的分配比，常以ogKow值表示.。測定分配系數(shù)的方法是：將農(nóng)藥加入正辛醇與水的兩相溶液體系中，充分搖勻，對一般農(nóng)藥只需震蕩1小時，溶解度<0.01ppm的農(nóng)藥需振蕩24小時達(dá)到平衡后，分別測定兩相中農(nóng)藥的含量，每種農(nóng)藥要做兩種不同濃度，通常是用C1<0.01M,C2=0.1C1,試驗濃度一般不得超過0.01M。根據(jù)從兩相中測得的農(nóng)藥含量代入公式求出LogKow值，此方法對少數(shù)在水中具有離子化、質(zhì)子化可逆性的農(nóng)藥不適用，對于分配系數(shù)LogKow>6的農(nóng)藥，也難以用此方法作出準(zhǔn)確測定。另一種簡便的方法在水中溶解度，應(yīng)用同類農(nóng)藥已知的分配系數(shù)與水溶性之間的相關(guān)公式估測農(nóng)藥的分配系數(shù)。3.1.4揮發(fā)作用試驗凡進(jìn)入到土壤或水域中的農(nóng)藥都要進(jìn)行揮發(fā)作用的評價。凡屬易揮發(fā)的農(nóng)藥，需進(jìn)一步到位做好農(nóng)藥及其代謝物的試驗室揮發(fā)作用測定或田間測定。測定揮發(fā)作用的方法是在氣流式密閉模擬裝置中進(jìn)行。在田間測定揮發(fā)作用時，可用農(nóng)藥的制劑與按推薦的農(nóng)藥用量，并要記錄試驗地區(qū)的土壤及氣候條件。3.1.5土壤吸附作用試驗供試農(nóng)藥須用純品或標(biāo)記農(nóng)藥，試驗濃度最好不超過農(nóng)藥最大溶解度；對難溶于水的農(nóng)藥，可用少量有機(jī)溶劑助溶（乙腈），用量不得超過0.2%（V/V）。測定土壤對農(nóng)藥的吸附等溫線時，至少要用三種性質(zhì)差異較大的代表性的土壤和四種不同的農(nóng)藥濃度，并要求提供土壤pH值、有機(jī)質(zhì)含量、代換量、土壤質(zhì)地等資料。3.1.6土壤淋溶作用試驗在農(nóng)業(yè)上使用的農(nóng)藥，都要提供淋溶特性資料。淋溶作用與吸附作用密切相關(guān)，可利用吸附常數(shù)估計農(nóng)藥在土壤中的移動性。淋溶試驗可用土壤柱淋溶法或土壤薄層層析法測定。用土壤柱淋溶法測定時，對易降解的農(nóng)藥，最好同時測定降解作用。試驗時可模擬農(nóng)藥使用地區(qū)的氣溫與降雨條件，并提供土壤PH、有機(jī)質(zhì)、代換量、土壤地等資料。目前常用的是土壤薄層層析法，試驗時最好用標(biāo)記農(nóng)藥或農(nóng)藥純品，至少要用四種不同性質(zhì)的土壤，常用的砂土、砂壤、粉砂壤、粘壤，土壤有機(jī)質(zhì)含量在1-5%，pH4-8之間，最好是取主要地區(qū)的土壤做試驗。測定方法與一般的薄層層層落實析法相似，主要不同之點是用土壤作載體，用水作流動相。根據(jù)土壤層層析法得到的Rf值的大小，將農(nóng)藥劃分為五個等級：極易移動0.90-1.00，可移動0.65-0.89，中等移動0.35-0.64，不易移動0.10-0.34，不移動0.00-0.09。測定農(nóng)藥淋溶的方法還有滲漏計法和田間滲漏測定法等。3.1.7土壤降解作用試驗土壤降解試驗先在室內(nèi)進(jìn)行（不包括光降解），如測定結(jié)果是殘留性較長的農(nóng)藥，須進(jìn)一步做田間降解試驗與光降解試驗；供試農(nóng)藥可用純品或工業(yè)用品。難溶于水的農(nóng)藥，可用少量乙醇、丙酮等對農(nóng)藥降解過程無干擾的有機(jī)溶劑助溶。農(nóng)藥的用量最好用田間的實際用量來換算，或?qū)⑼寥乐修r(nóng)藥的起始濃度調(diào)至10ppm。測定農(nóng)藥降解速率至少要用兩種有代表性的新采集的耕層土壤。測定降解產(chǎn)物只需一種土壤，并要提供土壤pH值、有機(jī)質(zhì)含量、代換量、土壤質(zhì)地資料。試驗一般在好氣條件下進(jìn)行，在三角瓶中將土壤水份調(diào)節(jié)到田間持水量的60%，塞上棉塞，在251恒溫條件下培養(yǎng)，定期采樣測定，直至土壤中農(nóng)藥的降解量達(dá)到兩個半衰期以上，即降解量>75%時可終止試驗；用于水田的農(nóng)藥，則同時要做在漬水條件下的降解試驗，在試驗期一般取樣5-7次測定農(nóng)藥殘留量的變化，試驗結(jié)果用指數(shù)回歸議程求解半衰期。建議將有機(jī)化學(xué)農(nóng)藥的殘留性，按照T1/2值的大小劃分為三個等級：<3個月的為易降解農(nóng)藥，3-12個月的為中等殘留性農(nóng)藥，>12個月的為長殘留農(nóng)藥。3.1.8水環(huán)境中的降解作用試驗對直接施用于水域或可能導(dǎo)致對水域產(chǎn)生影響的農(nóng)藥都要進(jìn)行水環(huán)境中降解速率與降解產(chǎn)物的測定。先在實驗室進(jìn)行，如試驗結(jié)果預(yù)計農(nóng)藥有較長的殘留性，須進(jìn)一步做野外試驗；農(nóng)藥在水體中的降解包括生物降解、水解與光降解，分別討論如下：（1）生物降解在水與底泥混合體系中測定水中農(nóng)藥降解試驗的結(jié)果，實際上包括生物降解、水解與底泥吸附三部分綜合作用的結(jié)果。試驗樣品應(yīng)采自施藥區(qū)或受農(nóng)藥污染的地區(qū)，采回的水與底泥在室內(nèi)混合，底泥應(yīng)保存在嫌氣條件下，試驗前預(yù)培養(yǎng)幾天，并要測定底泥的pH值、有機(jī)質(zhì)、代換量、土壤質(zhì)地、Eh以及水體中的pH等。供試農(nóng)藥可用純品或工業(yè)品，須測定代謝產(chǎn)物的最好用標(biāo)記農(nóng)藥。農(nóng)藥的加入量不得超過農(nóng)藥的溶解度，一般可用10ppm，試驗在251條件下進(jìn)行，定期取水樣測定至農(nóng)藥降解量到兩個半衰期以上時止。試驗結(jié)果用計算土壤降解時的指數(shù)順歸議程式求出農(nóng)藥在水中降解半衰期。如需測定揮發(fā)性的代謝產(chǎn)物，試驗須在氣流式的密閉體系內(nèi)進(jìn)行，這樣可回收到揮發(fā)出來的降解產(chǎn)物。（2）水解供試農(nóng)藥要用純品或標(biāo)記農(nóng)藥，試驗在滅菌避光的緩沖液中進(jìn)行。農(nóng)藥的濃度最好在農(nóng)藥的水溶性范圍內(nèi)一一般可用10ppm，對溶解度極低的農(nóng)藥，可加入少量乙醇、甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑助溶。溶液的pH通常用5、7、9三級；試驗容器要滅菌、封口，在70的條件下培養(yǎng)48小時后測定。如試驗結(jié)果水降解量少于生物降解量的10%，則可認(rèn)為該農(nóng)藥具有化學(xué)穩(wěn)定性，無須進(jìn)一步試驗；若水降解量大于生物降解量的10%，則須進(jìn)一步做在25與50溫度條件下的定期取樣測定試驗，到降解量大于兩個半衰期為止。農(nóng)藥水解半衰期的計算方法與生物降解同。3.1.9光降解作用試驗試驗農(nóng)藥要用純品或用標(biāo)記農(nóng)藥，農(nóng)藥濃度最好在農(nóng)藥溶解度范圍內(nèi)，用蒸鎦水配制；難溶于水的農(nóng)藥，可加入少量乙腈助溶，但不能用有光敏性的有機(jī)溶劑；試驗用水的pH為5-8之間，最好接近中性；對于有離子化或質(zhì)子化的化合物，最好用兩級pH溶液作試驗；試驗容器、溶液均須滅菌，并封口，以防止生物降解與揮發(fā)。光源用人工光源，模擬太陽光，特別是紫外光部分，一般取280-400nm波段的波長；將處理好的溶液置于人工光源下照射，試驗容器的受光面一定要用透紫外光的石英玻璃制成。試驗過程中定期取水樣測定農(nóng)藥濃度的變化，待降解量大于75%時止。試驗須設(shè)黑暗條件下的空白對照，光降解半衰期的計算與水解試驗同。3.1.10生物富集作用試驗（BCF）測定生物富集系數(shù)的方法有靜態(tài)法與動態(tài)法兩種。對一般農(nóng)藥，通常先采用靜態(tài)法試驗。該法適用于BCF<103的化合物。對高富集性的農(nóng)藥，此法只能反應(yīng)具有高富集性的狀況，但不易得到準(zhǔn)確的數(shù)值；靜態(tài)法對易降解與強揮發(fā)的農(nóng)藥不適用，對于這一類化合物須用動態(tài)法測定。用靜態(tài)法測定BCF時，國外常用的魚種有迥魚、鯉魚、虹鱒、鰱魚等，在我國建議用鯉魚作試驗。試驗魚要健康，大小均勻，體重<0.5g/尾，試驗前先要經(jīng)馴化飼養(yǎng)，經(jīng)檢驗體內(nèi)無待測物的殘留，并要事先求出供試魚種的TLm96值。試驗時農(nóng)藥的濃度要小于TLm96值的1/100（或用不影響魚類正常生長的最大允許值）。試驗用兩種濃度，各重復(fù)一次，并設(shè)不養(yǎng)魚與養(yǎng)魚不加農(nóng)藥的兩種空白對照。前者通過測定來校正試驗魚缸中因揮發(fā)與降解所造成的農(nóng)藥濃度的變化，后者用作在試驗結(jié)束時檢查試驗組魚體重量有無異常變化與測定魚體內(nèi)的脂肪含量。試驗農(nóng)藥用純品，難溶于水的可用少量低毒、不易降解的有機(jī)溶劑（如叔丁醇或二甲亞砜）助溶，加量<0.1ml/L。試驗用脫氧后的自來水，每一處理不得小于100升。試驗期間水中溶解氧不得低于5mg/L，必要時可用通氣裝置適當(dāng)補給氧氣。每組投放20尾魚，在222的恒溫條件下飼養(yǎng)，試驗過程中定期測定水中溶解氧的含量，于0、6、24、48、96、144、192小時時分別從各處理中取水樣測定農(nóng)藥含量的變化，并喂給適量飼料（20mg/g魚），至第8天時取出全部魚樣，稱體重后每組分成兩份測魚體內(nèi)農(nóng)藥含量。試驗結(jié)果計算：用對照組水體中農(nóng)藥的含量，來校正養(yǎng)魚組水體中的農(nóng)藥含量，求出被魚體攝入農(nóng)藥的真實值。在試驗結(jié)束時水體中農(nóng)藥含量變化已達(dá)到平衡，則此時魚體對農(nóng)藥的富集系數(shù)為：BCF=Cfs/CwsCfs：已達(dá)到平衡時魚體內(nèi)農(nóng)藥含量（ppm)Cws：已達(dá)到平衡時水體中農(nóng)藥含量(ppm)如果在試驗結(jié)束時，水體中農(nóng)藥濃度尚未達(dá)到平衡，則用上述公式求出的富集系數(shù)值應(yīng)注明是8天的結(jié)果，即用BCF8天表示。農(nóng)藥的生物富集系數(shù)與其分配系數(shù)（Kow）關(guān)系十分密切，因此也可用下列公式作初步估算：logBCF=0.85logK0w-0.70(n-59,r=0.947)。3.2農(nóng)藥對非靶生物毒性試驗準(zhǔn)則3.2.1鳥類毒性試驗國際上常用的試驗鳥類有鴿、鵪鶉、雉、野鴨、孟加拉雀等（母雞不適用）。鵪鶉飼養(yǎng)方便，是理想的試驗生物；根據(jù)哺乳動物的試驗結(jié)果，如供試農(nóng)藥的LD50>50mg/kg時，可免做對鳥類的口服急性毒性試驗；如果供試農(nóng)藥在田間施用時，與鳥類有一定的接觸時間，而且已有材料證明該農(nóng)藥在哺乳動物體內(nèi)有一定富集作用者，除了要做口服急性毒性LD50外，還要做5天的藥飼試驗求LC50，少數(shù)殘留期長，對鳥類有長期性暴露影響的農(nóng)藥，還須進(jìn)一步做繁殖影響試驗，觀察鳥類對取食性能、繁殖行為、蛋殼、孵化率以及成活率等影響；對一些用實驗室研究還難以明確其危害性的農(nóng)藥，須進(jìn)一步做籠養(yǎng)試驗，甚至是野外試驗。供試鵪鶉用同一批大小均勻的鶉蛋孵化，飼養(yǎng)約30天，體重基本一致健康、活潑、雌雄各半的鵪鶉作試驗用。供試農(nóng)藥用制劑或純品，溶于水或植物油中，供口服急性毒性試驗。一次服藥后，連續(xù)七天觀察死亡率；在正式試驗前先做預(yù)試；然后在最高安全濃度與最低全致死濃度范圍內(nèi)按一定的濃度極差，設(shè)5-7個處理，進(jìn)行正式試驗，并設(shè)空白對照。試驗在202與正常飼養(yǎng)條件下進(jìn)行，試驗結(jié)果用概率統(tǒng)計法求出LD50或LC50及95%的可信限。根據(jù)毒性測定結(jié)果，建議將農(nóng)藥對鳥類的急性毒性劃分為三個等級：LD50>150mg/kg為低毒級，15-150mg/kg為中毒級，<15mg/kg為高毒級。3.2.2蜜蜂毒性試驗在國外有的同時用蜜蜂和野蜂作試驗材料，在我國目前條件下建議采用養(yǎng)殖最普遍的意大利成年工蜂作試驗蜂種。根據(jù)蜜蜂在田間與農(nóng)藥接觸的方式，試驗須做攝入毒性與接觸毒性兩種，供試的農(nóng)藥用制劑或純品。攝入法：將一定量的農(nóng)藥溶于糖水或蜂蜜中喂養(yǎng)。對難溶于水的農(nóng)藥，可加少量助溶劑（如丙酮等）。接觸法：供試農(nóng)藥用丙酮溶解，將蜜蜂夾于兩層塑料網(wǎng)紗之間，并固定于框架上；或用麻醉法先將蜜蜂麻醉（麻醉時的死亡率不得大于10%），爾后于蜜蜂的前胸麻醉（麻醉時的死亡率不得大于10%），爾后于蜜蜂的前胸背板處，用微量注射器點滴1.7ul藥液。供試農(nóng)藥濃度按一定級差配制成5-7個處理，并設(shè)溶劑與空白對照。試驗宜在252微光條件下進(jìn)行，記錄24小時死亡率，用概率法求出LC50或LD50。根據(jù)毒性測定結(jié)果，參照Atkins毒性等級劃分標(biāo)準(zhǔn)，按照LD50值的大小，將農(nóng)藥對蜜蜂毒性分為三個等級：高毒級0.001-1.99ug/峰，中毒級2.0-10.99ug/峰，低毒級>11.0ug/峰。凡試驗結(jié)果LD50<10ug/峰的農(nóng)藥，須進(jìn)一步考慮做田間毒性試驗。3.2.3家蠶毒性試驗家蠶品種較多，尚難規(guī)定統(tǒng)一的試驗品種，目前只能因地制宜，選擇農(nóng)藥使用地區(qū)常用的家蠶品種作試驗材料。農(nóng)藥對家蠶影響的主要途徑，多半為農(nóng)田施藥引起桑葉污染或大氣污染兩種。在測定農(nóng)藥對家蠶毒性時，首選食下毒葉法，對于揮發(fā)性強的農(nóng)藥，尚須結(jié)合熏蒸毒性試驗。家蠶在不同生長發(fā)育階段，對農(nóng)藥的反應(yīng)亦不盡相同，除蟻蠶外，二齡蠶對農(nóng)藥瓜最敏感，宜選用二齡起蠶為毒性試驗材料。供試農(nóng)藥用制劑，也可用原藥或純品。難溶于水者可用助溶劑（如丙酮、乙酸乙酯等）助溶。食下毒葉法：將藥液先浸漬桑葉，待溶劑揮發(fā)完再喂蠶。試驗用農(nóng)藥按一定濃度級差配制成5-7個處理，并設(shè)溶劑空白對照。熏蒸法：在一較密閉的容器內(nèi)，將不同濃度的藥液浸漬脫脂棉置于小玻皿中，放在容器內(nèi)一邊，使蠶體不會接觸到藥液，喂以無毒桑葉。試驗在252下進(jìn)行。記錄24小時的死亡率，用概率法求出LC50或LD50。3.2.4天敵赤眼蜂毒性試驗天敵種類很多，赤眼蜂在我國分布很廣，且已有人工養(yǎng)殖，供試蜂種為稻螟赤眼蜂與歐洲玉米螟赤眼蜂。赤眼蜂的發(fā)育期分為卵、幼蟲、預(yù)蛹和蛹及成蜂五個階段。田間施用農(nóng)藥時，各個發(fā)育期均有可能遭受危害。試驗均以米蛾卵為寄主，對稻螟赤眼蜂接種后24小時內(nèi)為卵期，至96小時內(nèi)為預(yù)蛹期，至168小時內(nèi)為蛹期；將接種好的卵置于培養(yǎng)皿內(nèi)，按上述時間范圍內(nèi)，分別于各發(fā)育期定量噴灑農(nóng)藥，晾干后裝于指形管中培養(yǎng)，觀察記錄其羽化率。成蜂的毒性試驗，先將農(nóng)藥放入藥膜管中爬行1小時后轉(zhuǎn)入無藥指形管，封緊管口，24小時檢查統(tǒng)計管中死亡和存活蜂數(shù)。上述試驗均在252、70-80%相對濕度下進(jìn)行，農(nóng)藥按一定濃度級差配制成5-7個處理組，并設(shè)溶劑與空白對照，每組用100-200粒寄生卵作試驗，試驗結(jié)果用概率統(tǒng)計法求出LC50值和95%的可信限值。3.2.5蛙類毒性試驗蛙類是害蟲的天敵，蛙類的生長分卵、蝌蚪、幼蛙、成蛙四個發(fā)育階段，其中以蝌蚪期對農(nóng)藥的反應(yīng)最敏感。農(nóng)藥對蛙類的毒性測定，選用澤蛙的蝌蚪為試驗材料。供試農(nóng)藥用制劑或原藥，對難于溶于水的農(nóng)藥，可用少量內(nèi)酮與吐溫-80助溶，用量不得>0.1ml/L。試驗材料取自田間自然繁殖的蝌蚪，采回后先預(yù)養(yǎng)一天，再選健壯、個體均一的蝌蚪供試驗用；試驗容器為直徑18cm、高9cm的玻璃缸，加入1000ml試液，每個處理投放10頭蝌蚪，重復(fù)三次。正式試驗前先用預(yù)試。然后在最高安全濃度與最低全致死濃度范圍之間按等比級差設(shè)5-7個處理，并設(shè)空白對照，試驗在自然氣溫條件下進(jìn)行。試驗開始后24小時、48小時觀察記錄蝌蚪的死亡率，用概率統(tǒng)計法求出LC50值與95%的可信限值。農(nóng)藥對蛙類的毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，可參照魚類的毒性分級標(biāo)準(zhǔn)。3.2.6蚯蚓毒性試驗國外做農(nóng)藥毒性試驗的蚯蚓品種，多數(shù)用日本的赤子愛勝蚯蚓（Eiseniafoelide），該品種在我國已普遍養(yǎng)殖，是目前理想的試驗品種。農(nóng)藥對蚯蚓的致害途徑，主要是土壤中的殘留農(nóng)藥與蝗蚓的接觸或被蚯蚓吞食所致。供試土壤種類的不同，導(dǎo)致至蚯蚓毒性的程度也有差別。為了使試驗結(jié)果具有可比性，采用人工配制的標(biāo)準(zhǔn)土壤作為試驗材料，將農(nóng)藥按一定的級差，配成5-7個等級，分別均勻地加入1公斤土壤中，調(diào)節(jié)到一定的濕度后，裝于2升的培養(yǎng)缸中。每個處理養(yǎng)入個體大小相近的健壯蚯蚓10條，在202和有適量光照條件下進(jìn)行試驗。供試農(nóng)藥用制劑或純品，對難溶于水的農(nóng)藥，可用丙酮助溶。拌入土壤后先將丙酮揮發(fā)掉后再做試驗。蚯蚓的毒性試驗需連續(xù)進(jìn)行14天，于第7與14天時測定蚯蚓的死亡率，用概率法求半致死濃度LC50與95%的可信限值。上述方法得到的試驗結(jié)果，建議按照LC50值的大小將農(nóng)藥對蚯蚓的毒性劃分為三個等級：<1ppm的為高毒農(nóng)藥，1-10ppm的為中毒農(nóng)藥，>10ppm的為低毒農(nóng)藥。3.2.7土壤微生物毒性試驗本試驗用測定土壤微生物呼吸強度的方法，評價施用農(nóng)藥后對土壤微生物總活性影響的指標(biāo)。供試土壤要用兩種有代表性的新鮮土壤，并要提供pH值、有機(jī)質(zhì)、代換量、土壤質(zhì)地等數(shù)據(jù)。供試農(nóng)藥最好用制劑，也可用原藥或純品。每種土壤設(shè)1ppm、10ppm、100ppm三組不同濃度處理，并設(shè)空白對照，每組重復(fù)三次。難溶于水的農(nóng)藥，可用丙酮助溶。將藥液先與少量土混勻，待丙酮發(fā)凈后，再均勻拌入到處理的土壤中。每個處理用土50克，將土壤含水量調(diào)節(jié)成田間持水量的60%，裝于100ml小燒杯中，與另一個裝有標(biāo)準(zhǔn)堿液的小燒杯一起置于2升容積的密閉瓶中，于251的恒溫箱中培養(yǎng)。試驗開始后的第5、10、15天時更換出密閉瓶中的堿液測定吸收的CO2含量。當(dāng)打開密閉瓶更換堿液時，同時更換了密閉瓶中的空氣，以保證密閉瓶中的氧壓維持在一定水平。用土壤中CO2釋放量的變化，反映土壤微生物受農(nóng)藥抑制的程度，并以此為依據(jù)，建議將農(nóng)藥對土壤微生物的毒性劃分成以下三個等級：用1ppm處理土壤，在15天內(nèi)抑制值>50%的為高毒農(nóng)藥；用10ppm處理的土壤，抑制值>50%的為中毒的農(nóng)藥；抑制值<50%的為低毒農(nóng)藥。3.2.8魚類毒性試驗國際上常用試驗魚種有斑馬魚、鯉魚、夏裨魚、黑頭軟口鰷、翻車魚、底鳉、虹鱒；鯉魚是我國主要魚種之一，各地都有養(yǎng)殖材料易得，是理想的試驗魚種。試驗魚應(yīng)用同時孵化，體長約2-3cm，健康無病的魚苗先在室內(nèi)馴化飼養(yǎng)7-14天，待魚苗死亡率穩(wěn)定在<10%時開始試驗。試驗期間對照組的死亡率也應(yīng)控制在<10%以下。魚的急性毒性測定方法，有靜態(tài)法、半靜態(tài)法和流動式法三種，在我國目前條件下，一般采用半靜態(tài)法為宜（易水解與易揮發(fā)的農(nóng)藥不宜使用）。試驗容器的大小，一般應(yīng)控制在1克/升魚水的范圍內(nèi)。試驗期間定期更換藥液，以保證水中藥液濃度不低于加入量的80%，水中溶解氧不得低于飽和點的60%，pH值控制在6-8.5之間。正式試驗前先做預(yù)試。然后在最高安全濃度與最低全致死濃度范圍之間，按級差設(shè)5-7個組，每組養(yǎng)10尾，并設(shè)空白對照。供試水用曝氣去氯后的自來水，標(biāo)明水質(zhì)指標(biāo)；供試農(nóng)藥用純品，必要時也可用工業(yè)品或制劑；難溶于水的農(nóng)藥，可用超聲波加以分散，或用低毒的丙酮與吐溫-80助溶，用量要<0.1ml/L，并要作對比試驗。試驗前24小時停止給試驗魚喂食，在整個試驗期間不喂食，試驗在222，適度光照（12-16小時/天）條件下連續(xù)96小時，記錄最初8小時，以及24、48、72、96小時時魚的死亡率與中毒癥狀，及時撈出死魚，最后對魚類的毒性一般按LC50的大小劃分為三個等級：>10ppm為低毒農(nóng)藥，1.0-10ppm為中毒農(nóng)藥，<1.0ppm為高毒農(nóng)藥。3.2.9水蚤毒性試驗試驗用的蚤種選用常用的大型蚤（Daphniamagna），蚤齡6-24小時，試驗水用脫氯后的自來水，標(biāo)明水質(zhì)指標(biāo)，以綠藻（小球藻、柵列藻）為飼料，用靜態(tài)方法培養(yǎng)。試驗開始時水中溶解氧不得低于飽和點的70%，試驗結(jié)束時溶解氧不得低于2mg/L。試驗用的農(nóng)藥用純品，也可用制劑。難溶于水的農(nóng)藥，可用少量低毒的丙酮與吐溫-80助溶，加入量不得>0.1ml/L，試驗液的濃度按級差設(shè)5-7個組。另設(shè)一對照組，每組用水蚤20只，分4槽，每槽5只。槽中藥液用量不得<2ml/只蚤。試驗期不投食，對照組中水蚤的死亡率應(yīng)控制在<10%，試驗在222的條件下觀察48小時。判斷水蚤死亡的標(biāo)準(zhǔn)，在顯微鏡下觀察，心臟停止跳動為依據(jù)，記錄24小時與48小時的死亡數(shù)，用概率統(tǒng)計法求出LC50與95%的可信限值。農(nóng)藥對水蚤的毒性等級劃分標(biāo)準(zhǔn)，可參照魚類的等級標(biāo)準(zhǔn)。3.2.10藻類毒性試驗國際上供農(nóng)藥毒性試驗用的藻種有月牙藻、柵列藻、小球藻等，這些藻種在我國都有廣泛分布。為了使試驗數(shù)據(jù)可比起見，建議統(tǒng)一用柵列藻作為試驗材料。試驗用的玻璃容器均需高溫滅菌，選擇合適的培養(yǎng)液作為試驗用水（如水生6號培養(yǎng)液）。供試的農(nóng)藥用純品，必要時也可用制劑。難溶于水的農(nóng)藥可用丙酮與吐濕-80助溶，用量不得>0.1ml/L。試驗用的農(nóng)藥溶液按級差設(shè)5-7個組，另設(shè)一個空白對照。開始時試驗液中的藻量控制在105個細(xì)胞/ml左右，pH7.50.2，水溫222，連續(xù)光照（光強4000勒克斯），采用振搖或間歇振搖下培養(yǎng)96小時，于24、48、72、96小時時取出少量培養(yǎng)液，測定藻數(shù)變化，用概率統(tǒng)計法求出相應(yīng)時間內(nèi)的半抑制濃度EC50與95%的可信限值。