DNA勺粗提取與鑒定教學(xué)設(shè)計(jì)教學(xué)目標(biāo)（一）知識(shí)與技能1、通過(guò)嘗試對(duì)植物或動(dòng)物組織中的 DNA!行粗提取，了解DNA勺物理化學(xué)性質(zhì)。2、理解DNAfi提取與鑒定的原理（二）過(guò)程與方法掌握DN做口提取計(jì)數(shù)，能利用DNA勺性質(zhì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作（三）情感、態(tài)度與價(jià)值觀通過(guò)對(duì)DNA勺粗提取的實(shí)驗(yàn)過(guò)程的設(shè)計(jì)及操作，鍛煉科學(xué)的思維方法，培養(yǎng)實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度。教學(xué)重難點(diǎn)【課題重點(diǎn)】DNA勺粗提取和鑒定方法【課題難點(diǎn)】DNA勺粗提取和鑒定方法教學(xué)工具多媒體教學(xué)過(guò)程（一）引入新課無(wú)論是果膠酶還是加酶洗衣粉中的酶制劑， 都是從細(xì)胞中提取出來(lái)的。 從今天開(kāi)始，我們學(xué)習(xí)生物化學(xué)成分的提取與改造技術(shù)。（二）進(jìn)行新課1基礎(chǔ)知識(shí)1. 1DNA1提取的原理提取DNA勺原理包括DNA勺溶解性和耐受性?xún)蓚€(gè)方面。問(wèn)：提取 DNA勺溶解性原理 包括哪些方面？DNAft不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNAR容于酒精。1.1.1 分析圖51。DNAft不同濃度NaCl溶液中溶解度有何特點(diǎn)？要使 DNA容 解，需要使用什么濃度？要使 DN晰出，又需要使用什么濃度？在0.14mol/L時(shí)溶解度最??；較高濃度可使 DNA容解；0.14mol/L可使DNAf出。1.1.2 在溶解細(xì)胞中的DNA寸，人們通常選用2mol/LNaCl溶液；將DNA分子析 出的方法是向溶有DNA勺NaCl溶液中緩慢注入蒸儲(chǔ)水，以稀釋 NaCl溶液。酒精是 一種常用有機(jī)溶劑，但 DNA®不能溶于酒精（特別是95%冷卻酒精），但細(xì)胞中蛋 白質(zhì)可溶于酒精。問(wèn)：采用 DNM溶于酒精的原理，可以達(dá)到什么目的？ 將DNAffi蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。1. 1. 3提取DNA®可以利用DNA寸酶、高溫和洗滌劑的耐受性原理。利用該原理時(shí)，應(yīng)選用怎樣的酶和怎樣的溫度值？蛋白酶，因?yàn)槊妇哂袑?zhuān)一性，蛋白酶只水解蛋白質(zhì)而不會(huì)對(duì)DNAT生影響。溫度值為6080C,因?yàn)樵摐囟戎档鞍踪|(zhì)變性沉淀，而DNA會(huì)變性。補(bǔ)充：DNA勺變性是指DNA子在高溫下解螺旋，其溫度在 80 c以上，如在PCFRi 術(shù)中DN尬性溫度在95Co思考：觀察圖5-2,洗滌劑在提取DNA有何作用？洗滌劑將細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，從而瓦解細(xì)胞膜。2. 2DNA勺鑒定原理當(dāng)鑒定提取出的物質(zhì)是否是 DNA寸，需要使用什么指示劑進(jìn)行鑒定？在沸水浴條件下，DNA®二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色。原理總結(jié)。 通過(guò)利用不同濃度NaCl 溶液溶解或析出DNA， 可以從細(xì)胞中提取和提純DNA再利用酒精進(jìn)一步將 DNA與蛋白質(zhì)分離開(kāi)來(lái)，達(dá)到提純的目的；最后利用二苯胺試劑鑒定提取的物質(zhì)是否是DNA。2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)3. 1 實(shí)驗(yàn)材料3.1.1 不同生物的組織中DNAt量不同。在選取材料時(shí)，應(yīng)本著 DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。你認(rèn)為教材提供的材料中哪些不適合提取DNA？哺乳動(dòng)物的血液和液體培養(yǎng)基中的大腸桿菌。3.1.2 從核DN徽目來(lái)看，豬38條，雞78條，哺乳動(dòng)物血0條，彳彌猴桃58條，洋蔥 16 條，豌豆 14 條，菠菜 12 條，大腸桿菌1 條。請(qǐng)選擇動(dòng)植物材料各一種。雞血、獼猴桃。2. 2破碎細(xì)胞，獲取含DNA勺濾液若選用雞血和洋蔥作實(shí)驗(yàn)材料，則怎樣獲取含DNA勺濾液？在雞血細(xì)胞液中加入一定量蒸餾水并用玻棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液；切碎洋蔥，加入一定量洗滌劑和食鹽，攪拌研磨，過(guò)濾后收集濾液。在以上實(shí)驗(yàn)中， 加入蒸餾水、 洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？過(guò)濾時(shí)應(yīng)當(dāng)選用 （濾紙、尼龍布） 。血細(xì)胞在蒸儲(chǔ)水中大量吸水而張裂；洗滌劑瓦解細(xì)胞膜；食鹽溶解DNAW質(zhì)；選用 尼龍布進(jìn)行過(guò)濾。在處理植物組織時(shí)需要進(jìn)行研磨，其目的是什么？研磨不充分產(chǎn)生什么結(jié)果？破碎細(xì)胞壁，使核物質(zhì)容易溶解在 NaCl溶液中；研磨不充分會(huì)使 DNA勺提取量減 少。具體做法。10mL5|血+ 20mL蒸儲(chǔ)水-同方向攪拌f3層尼龍布過(guò)濾f濾液2 3 去除濾液中的雜質(zhì)最初獲得的DNA濾液含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)，需要進(jìn)一步提純 DNA閱讀教材提 供的三種方法，分析其中的原理。方案一的原理是DNAS不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶 分解蛋白質(zhì)，不分解DNA方案三的原理是蛋白質(zhì)和 DNA勺變性溫度不同。具體做法。方案一：30mL濾液+35gNaClH同方向攪拌，DNA容解-加入蒸儲(chǔ)水-DNAff出-過(guò) 濾得到過(guò)濾物放到2mol/LNaCl溶液中溶解-DNA-NaC溶解液方案二：30mL濾液+嫩肉粉（木瓜蛋白酶）-靜置 1015分鐘-DNASe方案三：30濾液-6067c處理-過(guò)濾獲得 DNAS液2. 4DNAff出與鑒定在濾液中仍然含有一些雜質(zhì)，怎樣除去這些雜質(zhì)呢？得到的DNAg何顏色？濾液與等體積的冷卻酒精混合均勻，靜置 23分鐘，析出的白色絲狀物就是 DNA DNAg白色。怎樣鑒定析出的白色絲狀物就是 DNAI ?閱讀教材。閱讀。簡(jiǎn)述DNA勺鑒定過(guò)程。具體做法。試管2支，編號(hào)甲乙-各加等量5mLNaC熔液-甲中放入少量白色絲狀物，使之溶解-各加4m苯胺，混合土§勻-沸水浴5min-觀察顏色變化3實(shí)驗(yàn)操作制備雞血細(xì)胞液加檸檬酸鈉，靜置或離心破碎細(xì)胞，釋放DNA加蒸儲(chǔ)水，同一方向快速通方向攪拌過(guò)濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。溶解核內(nèi)DNA- 加入NaCl至2mol/L ,同一方向緩慢攪拌DN晰出加蒸儲(chǔ)水至0.14mol/L ,過(guò)濾，在溶解到2mol/L溶液中J 除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)DNA0步純化 與等體積95%冷卻酒精混合，析出白色絲狀物，一除去核蛋白、RNA多糖等。DNA1定 二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色 其它注意事項(xiàng)：在雞血中加入檸檬酸鈉防止凝固；雞血靜置或離心以提高細(xì)胞懸液 濃度；使用塑料燒杯；使用尼龍布過(guò)濾；玻棒沿同一方向攪拌；玻棒攪拌要緩慢（細(xì) 胞破裂快速攪拌）；玻棒不要碰到燒杯壁；二苯胺試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配等。為了提高 DNA 純度，在科學(xué)實(shí)驗(yàn)中通常使用的洗滌劑有十六烷基三甲基澳化?。?CTAB、十二烷 基硫酸鈉（SDS。課后小結(jié)DNA的粗提取與堇正土DNA在不同粒度bfaCl容中溶解度不同， DMA與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和顰白質(zhì)對(duì)65.高潟和洗滌劑耐受性不同 DNA與二木胺呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)口破碎細(xì)胞T DNA粗提取i 選擇適宜可科川DNA的溶解和析出,與二基胺混合，錦水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng).DN屋的純優(yōu)口課后習(xí)題1 .在研究DNA勺基因樣本前，采集來(lái)的血樣需要蛋白水解酶處理，然后用有機(jī)溶劑 除去蛋白質(zhì)。用蛋白水解酶處理血樣的目的是（）A.除去血漿中的蛋白質(zhì)B.除去染色體上的蛋白質(zhì)C.除去血細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)D.除去血細(xì)胞中的所有的蛋白質(zhì)，使 DN麻放，便于進(jìn)一步提純2 .與析出DNA占稠物有關(guān)的敘述，不正確的是（）A.操作時(shí)緩緩滴加蒸儲(chǔ)水，降低DNA勺溶解度B.在操作A時(shí)，用玻璃棒輕緩攪拌，以保證 DN的子完整C.加蒸儲(chǔ)水可同時(shí)降低DNAffi蛋白質(zhì)的溶解度，兩者均可析出D.當(dāng)絲狀粘稠物不再增加時(shí)，此時(shí) NaCl的濃度相當(dāng)于0.14mol/L3 .洗滌劑能夠瓦解（），但對(duì)DNAS有影響。A.細(xì)胞壁B.細(xì)胞膜 C.細(xì)胞核 D.細(xì)胞質(zhì)4 .在沸水浴的條件下，DNA® （）會(huì)被染成藍(lán)色。A.斐林試劑 B.蘇丹田染液 C.雙縮月尿試劑 D.二苯胺5 .在DNAI取過(guò)程中，最好使用塑料試管和燒杯，目的是（A.不易破碎 B.減少提取過(guò)程中DNA勺損失C.增加DNA勺含量D.容易洗刷參考答案： DCBDB板書(shū)課題 1 DNA 的粗提取與鑒定1基礎(chǔ)知識(shí)1. 1DNA1提取的原理2. 2DNA勺鑒定原理2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)3. 1 實(shí)驗(yàn)材料2. 2破碎細(xì)胞，獲取含DNA勺濾液2 3 去除濾液中的雜質(zhì)2. 4DNAW出與鑒定