1、 1 附件 3人表皮生長因子受體 2 基因擴(kuò)增檢測試劑盒（熒光原位雜交法）注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)人表皮生長因子受體 2基因擴(kuò)增檢測試劑盒（熒光原位雜交法）注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。本指導(dǎo)原則是對(duì)人表皮生長因子受體 2 基因擴(kuò)增檢測試劑盒（熒光原位雜交法）的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查。

2、原位雜交實(shí)驗(yàn)原理與方法一、目的本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)會(huì)原位雜交的使用方法。了解各種原位雜交的基本原理和優(yōu)缺點(diǎn)。二、原理原位雜交組化（簡稱原位雜交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）屬于分子雜交的一種，是一種應(yīng)用標(biāo)記探針與組織細(xì)胞中的待測核酸雜交，再應(yīng)用標(biāo)記物相關(guān)的檢測系統(tǒng)，在核酸原有的位置將其顯示出來的一種檢測技術(shù)。原位雜交的本質(zhì)就是在一定的溫度和離子濃度下，使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補(bǔ)規(guī)則與組織細(xì)胞內(nèi)待測的核酸復(fù)性結(jié)合而使得組織細(xì)胞中的特異性核酸得到定位，并通過探針上所標(biāo)記的檢測系。

3、原位雜交技術(shù) in situ hybridization,核酸分子雜交技術(shù),在研究DNA分子復(fù)制原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種技術(shù)。兩條核苷酸單鏈片段，通過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA雙鏈分子 按其作用方式可大致分為兩種。

4、熒光原位雜交 FISH 檢測 康圣環(huán)球醫(yī)學(xué)特檢集團(tuán) 概述FISH 目前新興的分子遺傳學(xué)技術(shù) 原理是采用熒光標(biāo)記的DNA探針 利用探針與檢測樣本中DNA堿基對(duì)的互補(bǔ)性 在探針與標(biāo)本的DNA雜交后 通過熒光顯微鏡檢測熒光信號(hào)而得出。

5、FISH實(shí)驗(yàn)步驟 一 實(shí)驗(yàn)儀器 熒光顯微鏡 高速離心機(jī) 可達(dá)12000r min 高壓滅菌鍋 160 以上殺菌 恒溫箱 為雜交提供恒定溫度 恒溫水浴鍋 照相機(jī) 與熒光顯微鏡配套 熒光捕捉圖片 二 試劑的配制 1 0 2mol L pH7 4 磷酸緩沖。

6、染色體熒光原位雜交技術(shù),摘 要 FISH（Fluoresence In Situ Hybridization）技術(shù)是80年代開始發(fā)展起來的一種新的定位技術(shù)。在人類基因組研究中得到了廣泛的應(yīng)用通過中期染色體的FISH可以進(jìn)行SCP，Cosmid和YAC的染色體定位，嵌合克隆的鑒別，通過間期核的FISH可以在50kb的分辨率下進(jìn)行基因作圖，最新的研究進(jìn)展已可以進(jìn)行伸展的染色質(zhì)絲(chromatin f。

7、附件1 基于細(xì)胞熒光原位雜交法的人類染色體異常 檢測試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)基于細(xì)胞熒光原位雜交法（Fluorescence In Situ Hybridization，F(xiàn)ISH）的人類染色體異常檢測試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。 本指導(dǎo)原則是對(duì)基于細(xì)胞熒光原位雜交法的人類染色體異常檢測試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的。

8、原位雜交技術(shù) in situ hybridization,核酸分子雜交技術(shù),在研究DNA分子復(fù)制原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種技術(shù)。兩條核苷酸單鏈片段，通過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA雙鏈分子 按其作用方式可大致分為兩種：固相雜交和液相雜交 液相雜交是指參加反應(yīng)的兩條核酸鏈都游離在溶液中。液相分子雜交技術(shù)包括吸附雜交、發(fā)光液相雜交、液相夾心雜交和復(fù)性速率液相分子雜交等。

9、第三節(jié) 原位雜交組織化學(xué)標(biāo)本的制備 一、取材 用于原位雜交反應(yīng)的組織應(yīng)盡可能新鮮，這就要求取材迅速。由于很多RNA極易降解，因此取得的組織應(yīng)盡可能迅速固定或冷凍。為了避免外援性RNA酶引起靶組織中RNA的丟失，取材時(shí)應(yīng)戴手套，所用的器械、容器都要經(jīng)高壓消毒，或清潔后用經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）處理過的滅菌蒸餾水清洗。此外，要避免用含RNA酶很豐富的手直接接觸組織、器械、容器和溶液等。,二、 。

10、原 位 雜 交 技 術(shù),2012-12-06,原 位 雜 交 技 術(shù),一、原位雜交技術(shù)的歷史發(fā)展,原位雜交技術(shù)(In situ hybridization，ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù)，始于20世紀(jì)60年代。1969年美國耶魯大學(xué)的Gall等首先用爪蟾核糖體基因探針與其卵母細(xì)胞雜交，將該基因進(jìn)行定位，與此同時(shí) BuongiornoNardelli和Amaldi等。

11、第五章 原位雜交組織化學(xué),第一節(jié) 原位雜交組織化學(xué)基本原理(in situ hybridization),原位雜交組織化學(xué)，簡稱原位雜交 (ISH)，是將分子雜交與組織化學(xué)相結(jié)合而在核酸原有的位置進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)核酸定性、定位的一種技術(shù)。 當(dāng)溶液中的DNA分子經(jīng)高溫或高PH處理后，DNA雙鏈分子會(huì)變性產(chǎn)生兩條單鏈，如果將溫度逐漸下降或pH恢復(fù)到中性（復(fù)性），單鏈會(huì)按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，重新形成氫鍵恢復(fù)。

12、原位分子雜交技術(shù),原位雜交 (in situ hybridization,ISH) 是應(yīng)用已知堿基順序并帶有標(biāo)記的核酸探針與組織、細(xì)胞中的待測的核酸按堿基配對(duì)的原則進(jìn)行特異的結(jié)合而形成雜交體。,再應(yīng)用與標(biāo)記物相應(yīng)的檢測系統(tǒng)，通過組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)方法在被檢測的核酸原位形成帶有顏色的雜交信號(hào)，在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位。,DNA-DNA; RNA-DNA; RNA-RNA 人工合成寡核。

13、原位雜交操作流程 冰凍切片的（ DIG-labeled RNA probe）原位雜交操作程序 一 、 切片制備 用新鮮組織制作 6m厚冰凍切片 ， 37 干燥 1 4小時(shí) ， 進(jìn)行下一步操作 。 二 、 預(yù)雜交前處理 預(yù)固定 ： 4%PFA（ in DEPC-PBS Ph7.4） RT 30 60min 4%PFA： 多聚甲醛 20g 1 PBS 450ml 。

14、 碩 士 學(xué) 位 論 文 熒光原位雜交技術(shù)及其在環(huán)境領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用 Fluorescence in situ hybridization technology and its application in the field of environment 作 者 姓 名： * 學(xué)科、 專業(yè)： 環(huán)境科學(xué)與工程 學(xué) 號(hào)： *。