《廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《常見(jiàn)淡水養(yǎng)殖魚類疾病診治技術(shù)規(guī)范 第3部分：疾病防治用藥藥效檢驗(yàn)》（征求意見(jiàn)稿）》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《廣西地方標(biāo)準(zhǔn)《常見(jiàn)淡水養(yǎng)殖魚類疾病診治技術(shù)規(guī)范 第3部分：疾病防治用藥藥效檢驗(yàn)》（征求意見(jiàn)稿）（12頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

52 西 壯 族 自 治 區(qū) 地 方 標(biāo) 準(zhǔn) 5/T 2016 常見(jiàn)淡水養(yǎng)殖魚類疾病診治技術(shù)規(guī)范 第 3 部分：疾病防治用藥藥效檢驗(yàn) of 征求意見(jiàn)稿） 2016 - 布 2016 - 施 廣西壯族自治區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布 2016 I 目 次 前言 ................................................................................. 范圍 ............................................................................... 1 2 規(guī)范性引用文件 ..................................................................... 1 3 試劑和材料 ......................................................................... 1 劑 ........................................................................... 1 菌生理鹽水 ............................................................... 1 溶劑 ..................................................................... 1 釋劑 ..................................................................... 1 料 ........................................................................... 2 養(yǎng)基 ..................................................................... 2 株 ....................................................................... 2 魚樣品 ................................................................... 2 幼樣品 ................................................................... 2 殖池水 ................................................................... 2 物 ....................................................................... 2 4 儀器設(shè)備與器具 ..................................................................... 2 器設(shè)備 ....................................................................... 2 具 ........................................................................... 2 5 抗生素藥效檢驗(yàn) ..................................................................... 2 養(yǎng)基制備 ..................................................................... 2 湯培養(yǎng)基 ................................................................. 2 養(yǎng)瓊脂 平板 ............................................................... 2 倍母液制備 ................................................................... 3 劑除菌 ................................................................... 3 存液制備 ................................................................. 3 存液定容 ................................................................. 3 倍母液稀釋 ............................................................... 3 圍篩選 ................................................................... 3 度藥液配備 ............................................................... 3 懸液制備 ................................................................. 3 液接種 ................................................................... 3 育 ....................................................................... 3 果觀察 ................................................................... 4 定 ....................................................................... 4 菌圈測(cè)定 ..................................................................... 4 2016 菌板制備 ................................................................... 4 液配置 ................................................................... 4 敏試驗(yàn) ................................................................... 4 菌圈測(cè)量 ................................................................. 4 定 ........................................................................... 4 6 消毒劑藥效檢驗(yàn) ..................................................................... 4 物稱量 ....................................................................... 4 液制備 ....................................................................... 4 驗(yàn) ........................................................................... 5 殖用水消毒 ............................................................... 5 菌培養(yǎng) ................................................................... 5 果觀察 ....................................................................... 5 定 ........................................................................... 5 7 殺蟲驅(qū)蟲藥藥效檢驗(yàn) ................................................................. 5 用殺蟲藥 ..................................................................... 5 物稱量 ................................................................... 5 液制備 ................................................................... 5 液稀釋 ................................................................... 5 驗(yàn) ....................................................................... 5 定 ....................................................................... 5 服驅(qū)蟲藥 ..................................................................... 5 魚樣品暫養(yǎng) ............................................................... 5 物稱量 ................................................................... 6 液制備 ................................................................... 6 餌制作 ................................................................... 6 餌投喂 ................................................................... 6 定 ....................................................................... 6 8 水質(zhì)改良劑藥效檢驗(yàn) ................................................................. 6 物稱量 ....................................................................... 6 液制備 ....................................................................... 6 液稀釋 ....................................................................... 6 定 ........................................................................... 6 9 免疫增強(qiáng)劑藥效檢驗(yàn) ................................................................. 6 龜樣品暫養(yǎng) ................................................................... 6 物稱量 ....................................................................... 7 液制備 ....................................................................... 7 餌制作 ....................................................................... 7 餌投喂 ....................................................................... 7 果觀察 ....................................................................... 7 定 ........................................................................... 7 2016 0 記錄 .............................................................................. 7 2016 言 1087《 常見(jiàn)淡水養(yǎng)殖魚類疾病診治技術(shù)規(guī)范 》 分為三個(gè)部分 ︰ —— 第 1 部分 ︰ 資料記錄、病因與病損度診斷及應(yīng)對(duì)措施； —— 第 2 部分 ︰ 疾病診斷與防治； —— 第 3 部分 ︰ 疾病防治用藥藥效檢驗(yàn)。 本部分為 1087 的第 3 部分。 本標(biāo)準(zhǔn)按照 2009 給出的 規(guī)則起草。 本標(biāo)準(zhǔn)由廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局提出。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位 ︰ 廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)技術(shù)推廣總站、廣西大學(xué)。 本標(biāo)準(zhǔn)起草人 ︰ 胡大勝、龍光華、黃鈞、韓書煜 、黃艷華、梁靜真。 2016 1 常見(jiàn)淡水養(yǎng)殖魚類疾病診治技術(shù)規(guī)范 第 3 部分：疾病防治用藥藥效檢驗(yàn) 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了常見(jiàn)淡水養(yǎng)殖魚類疾病 防治用藥藥效檢驗(yàn)的試劑與材料、儀器 設(shè)備與器具 、抗生素藥效檢驗(yàn)、消毒劑藥效檢驗(yàn)、殺蟲驅(qū)蟲藥藥效檢驗(yàn)、水質(zhì)改良劑藥效檢驗(yàn)、免疫增強(qiáng)劑藥效檢驗(yàn)與記錄 。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于廣西境內(nèi)常見(jiàn)淡水養(yǎng)殖魚類疾病的診斷與防治。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 漁用抗菌藥物藥效試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范 第 1部分：常量肉湯稀釋法藥物敏感性試驗(yàn) 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 試劑和材料 劑 菌生理鹽水 精確稱取 入 1 21℃高壓滅菌 15 溶劑 二甲基甲酰胺 溶液 ， 氫氧化鈉 溶液 ， 乙醇 。 各種藥物的預(yù)溶劑見(jiàn)表 1。 表 1 各種抗生素的預(yù)溶劑 藥物名稱 預(yù)溶劑 藥物名稱 預(yù)溶劑 磺胺甲噁唑 氫氧化鈉 硫酸新霉素 蒸餾水 氟苯尼考 二甲 基甲酰胺 鹽酸多西環(huán)素 蒸餾水 甲砜霉素 二甲基甲酰胺 乳酸諾氟沙星 蒸餾水 磺胺二甲嘧啶 熱乙醇 煙酸諾氟沙星 蒸餾水 磺胺嘧啶鈉 蒸餾水 釋劑 蒸餾水 ，質(zhì)量符合 6682要求 。 2016 2 料 養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)瓊脂 培養(yǎng)基，肉湯培養(yǎng)基。 株 嗜水氣單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株或確定耐藥性消除的革蘭氏陰性病原菌。 魚樣品 確診感染 寄生蟲 或水霉 的魚種，數(shù)量≥ 30尾，用于殺蟲驅(qū)蟲藥藥效檢驗(yàn)。 幼 樣品 精神萎靡不振 、 兩眼暗淡無(wú)神 、活動(dòng)遲緩的幼龜 ， 數(shù)量≥ 30只，用于免疫增強(qiáng)劑藥效檢驗(yàn)。 殖 池 水 氨氮含 量＞ 1 的養(yǎng)殖 池 水 200 L，用于水質(zhì)改良劑藥效檢驗(yàn)。 物 質(zhì)控藥物：鹽酸多西環(huán)素，含量 待檢 藥物： 抗生素、消毒劑、殺蟲驅(qū)蟲藥、水質(zhì)改良劑和免疫增強(qiáng)劑 。 4 儀器 設(shè)備 與器具 器 設(shè)備 生化培養(yǎng)箱，無(wú)菌操作臺(tái)，生物顯微鏡， 高壓滅菌鍋， 精確度為 0.1 麥?zhǔn)媳壬?。 具 20 μ L～ 200 μ L、 100 μ L～ 1 000 μ 000 μ L～ 5 000 μ 30 L、 50 50 頭 ， 刻度吸管，洗耳球，藥勺， 1 500 玻璃棒 ，涂棒，培養(yǎng)皿，接種環(huán) ， 酒精燈 ， 牛津杯 ，氣泵 。 5 抗生素藥效檢驗(yàn) 養(yǎng)基制備 湯培養(yǎng)基 用干粉培養(yǎng)基制備成普通肉湯培養(yǎng)基 ， 壓滅菌 20 4℃保存?zhèn)溆谩? 養(yǎng)瓊脂 平板 用干粉培養(yǎng)基制備成普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板 ， 壓滅菌 20 4℃保存?zhèn)溆谩? 2016 3 倍 母液制備 劑除菌 預(yù)溶劑用 釋劑高壓滅菌除菌。 存液 制備 物稱量 用 精確度 0.1 確稱量 含有效成分 1 000 物，置于 1 。 示例 1： 某 廠家生產(chǎn)的某品牌含量 10%氟苯尼考 ，稱量時(shí)，準(zhǔn)確 稱取 10 g， 置于 1 L 燒杯 中。 物預(yù)溶 按稱量藥物重量的 3倍加預(yù)溶劑到 燒杯 中，充分?jǐn)嚢枞芙狻? 存液 定容 向 加入容量瓶 加 入 蒸餾水 稀釋，最后定容 1 000 過(guò)濾冷藏可儲(chǔ)存 7 d。 倍 母液稀釋 另取一個(gè) 500 加入 100 移液器精確吸出 10 用移液器精確吸取定容儲(chǔ)存液 10 杯 充分混勻。 圍篩選 度藥液配備 參照 取 10支試管， 第 1管 加入 10 第 2～ 10管 分別 加入 4 第 1管 吸出 2 入 2 吸出 2 吸 4 管 混勻，再吸 4 管 混勻，以此類推到第 8管 ； 第 8管混勻后吸出 4 配置成 20 μ g/10 μg/5 μ g/ g/ g/ g/ g/ g/第 9管和第 10管不加藥物，第 9管作細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)照，第 10管作無(wú)菌控制對(duì)照。 注： 配置磺胺類藥物的梯度濃度時(shí)， 第 1管吸出 入 液 混勻， 吸出 2 吸 4 管 混勻，再吸 4 管 混勻，以此類推到第 8管 ； 第 8管混勻后吸出 4 配置成 512 μ g/56 μ g/128 μ g/64 μ g/32 μ g/16 μ g/8 μ g/ μ g/ 懸 液制備 取 經(jīng)配套營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板新鮮培養(yǎng)的 待檢菌株 ， 用 菌生理鹽水洗到 已滅菌 的試管中，加 菌生理鹽水至菌液濃度為 108 液濃度用麥?zhǔn)媳壬苄Ｕ? 液接種 菌液制備好后，應(yīng) 在 ≤ 15 ～ 9管試管中，第 10管不加。菌液接種后的最終濃度為 5× 105 菌液濃度用麥?zhǔn)媳壬苄Ｕ? 育 菌液接種后，于 28℃生化培養(yǎng)箱孵育 24 h。 2016 4 果觀察 取出 試管觀察 ： 試管中液體澄清為無(wú)菌生長(zhǎng)、半渾濁為少量菌生長(zhǎng)、 渾濁 為大量菌生長(zhǎng)， 細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)照 管 渾濁 、 無(wú)菌控制對(duì)照 管 澄清 。 記錄 試管中液體澄清的最小藥液濃度和半渾濁的藥液濃度。 定 根據(jù)最小藥液濃度和半渾濁的藥液濃度配置梯度藥液，按照 取并記錄最小抑菌濃度（ 質(zhì)控藥物的 g/ μ g/驗(yàn)有效。 菌圈測(cè)定 板制備 取上述菌懸液 100 μ L，注入營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板中，用三角涂棒 將菌懸液均勻涂抹于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上。 液配置 按照 、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20倍濃度分別配置藥液。 敏試驗(yàn) 無(wú)菌條件下 ，將 經(jīng)酒精燈火焰 燒熱一端 的 牛津杯 放置在 涂抹了菌懸液的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上 ， 間距 3 個(gè) 培養(yǎng)基 平板 放置 5 個(gè) 。 將 配置好的各種濃度藥液 加 入 牛津杯 杯體 中 ， 藥液 加至滿而不溢為止。將 營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板 置 37℃生化培養(yǎng)箱 中培養(yǎng) 24 h。 菌圈測(cè)量 取出 營(yíng)養(yǎng)瓊脂平 板 ，測(cè)量 記錄 抑菌圈直徑 ，并按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ 新版的藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)判斷各種濃度藥液是否敏感。 定 抑菌圈測(cè)定 敏感 的最小 藥物濃度 ＜ 說(shuō)明書 的 用藥濃度， 判定該抗生素 有效。 6 消毒劑藥效檢驗(yàn) 物稱量 按藥物使用說(shuō)明書用量的 1 000倍 ，用精確度為 0.1 于 1 。 示例 2： 某 廠家生產(chǎn)的某 品牌含量 8%二氧化氯，說(shuō)明書治療用量為每 667 體用 100 g～ 150 g。取最大用量 150 g，用藥濃度為 。稱量時(shí)，準(zhǔn)確 稱取 224.9 氧化 氯， 置于 1 000 量瓶 中。 液制備 向 容量瓶 加入蒸餾水 溶解、 稀釋 ，充分 攪勻 ， 最后定容 1 000 2016 5 驗(yàn) 殖用水消毒 取 30 0 然后從容器中準(zhǔn)確取出 20 0 混勻 靜置 消毒 2 h。 菌培養(yǎng) 分別取養(yǎng)殖用水和消毒 2 00 μ L，在 無(wú)菌條件下 ，分別 涂布于無(wú)菌平板上 ， 28℃培養(yǎng) 24 h。 果觀察 培養(yǎng) 24 出 平板觀察菌落生長(zhǎng)情況 。 定 涂布 養(yǎng)殖用水 平板長(zhǎng)菌 ， 涂布 消毒 2 板 不 長(zhǎng)菌 ，判定 該 消毒劑有效。 7 殺蟲 驅(qū)蟲 藥藥 效檢驗(yàn) 用殺蟲藥 物稱量 按藥物使用說(shuō)明書用量的 1 000倍，用精確度為 0.1 于 1 。 示例 3： 如 1 包 200 g 的殺蟲藥可用于 8 畝 1 m 水深池塘，即每 667 體用 25 g，用藥濃度為 。稱量時(shí)，準(zhǔn)確 稱取 37.5 蟲藥， 置于 1 000 量瓶 中。 液制備 向 加入容量瓶 加入蒸餾水 溶解、 稀釋 ，充分?jǐn)噭?， 最后定容 1 000 液稀釋 取 50個(gè)，分別 加入 40 后 分別 從容器中準(zhǔn)確 移 出 40 0 ， 充分?jǐn)噭?。 再取 50個(gè)， 加入 40 作為對(duì)照。 驗(yàn) 向 4個(gè)容器分別 放 6尾 ～ 8尾 確診感染 寄生蟲的魚 種入稀釋 母液 的容器 ， 30 生物顯微鏡 逐一檢查魚體 表或鰓 上寄生蟲 的 脫落或死亡 情況 。 定 2 檢驗(yàn)組 魚體表或鰓上寄生蟲 大部分 脫落或死亡 ， 對(duì)照組魚體表或鰓上寄生蟲沒(méi)有 脫落 ， 判定 該殺蟲藥 有效。 服驅(qū)蟲藥 魚樣品 暫養(yǎng) 取 250 個(gè)， 3個(gè)為檢驗(yàn)組， 1個(gè)為對(duì)照組； 分別 加入養(yǎng)殖用水 150 L， 各 放養(yǎng) 確診感染 體內(nèi)寄生蟲 的魚種 7尾 ～ 8尾， 不間斷充氣增氧，投喂飼料 1次 /d，吸污 1次 /d。 魚種放養(yǎng)前稱量總 重。 2016 6 物稱量 根據(jù)暫養(yǎng)魚種總 重 和 藥物使用說(shuō)明書 ，計(jì)算出魚種用藥 總 量， 按 魚種用藥 總 量 的 1 000倍精確度稱量藥物，置于 1 。 液制備 向 容量瓶 加入蒸餾水 溶解、 稀釋 ，充分?jǐn)噭颍?最后定容 1 000 餌制作 根據(jù)魚種總重，按 投 率 算出飼料日投喂量。 準(zhǔn)確 吸取 1 ， 用蒸餾水稀釋 5倍～ 10倍，均勻拌入飼料中，靜置 15 餌投喂 按說(shuō)明書 給檢驗(yàn)組的魚 投喂 藥餌 1個(gè) 療程， 1次 /d；對(duì)照組投喂飼料 1次 /d。 定 投喂 藥餌 1個(gè) 療程 后 次日 ， 逐一解剖魚， 檢查體內(nèi) 寄 生蟲 ， 檢驗(yàn)組魚無(wú) 寄生蟲 的 ， 對(duì)照組魚有 寄生蟲 的 ， 判定該驅(qū)蟲藥有效 。 8 水質(zhì)改良劑藥效檢驗(yàn) 物稱量 根據(jù) 藥物使用說(shuō)明書 計(jì)算出 10 按 10 1 000倍，精確稱量藥物，置于 30 。 液制備 向塑料容器加入蒸餾水，充分?jǐn)噭?，最后定?10 L。 液稀釋 取 250 00 水， 用快速水質(zhì)監(jiān)測(cè)儀檢測(cè)水體的氨氮 ，確定 氨氮含量＞ 1 ；然后從容器中準(zhǔn)確取出 2 ， 充分?jǐn)噭?， 靜置 1 定 用藥前水質(zhì) 的氨氮 含量＞ 1 ，用藥 1 0.3 ， 判定該 水質(zhì)改良劑 有效。 9 免疫增強(qiáng)劑藥效檢驗(yàn) 龜樣品 暫養(yǎng) 取 50 個(gè)， 3個(gè)為檢驗(yàn)組， 1個(gè)為對(duì)照組；分別加入養(yǎng)殖池 水 20 L，放養(yǎng) 精神萎靡不振 、 兩眼暗淡無(wú)神 、活動(dòng)遲緩的幼龜 7只 ～ 8只，投喂飼料 1次 /d，換水 1次 /d。幼龜放養(yǎng)前稱量總 重。 2016 7 物稱量 根據(jù)暫養(yǎng)幼龜總重和 藥物使用說(shuō)明書 計(jì)算出幼龜用藥 總 量， 按 幼龜用藥 總 量 的 1 000倍 精確稱量藥物，置于 1 000 。 液制備 向 容量瓶 加入蒸餾水 溶解、 稀釋 ，充分?jǐn)噭?，最后定?1 000 餌制作 根據(jù)幼龜總重，按 投 率 算出飼料 日 投喂 量 。 準(zhǔn)確 吸取 1 ， 用蒸餾水稀釋 5～ 10倍，均勻拌入飼料中，靜置 15 餌投喂 給檢驗(yàn)組的幼龜 投喂 藥餌 1次 /d，連續(xù) 3d。 對(duì)照組投喂飼料 1次 /d。 果觀察 連續(xù) 投喂 藥餌 3 觀察幼龜?shù)木駹顟B(tài)和活動(dòng)。 定 檢驗(yàn)組的幼龜， 精神 狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)， 兩眼 轉(zhuǎn)為有 神 發(fā)亮， 活動(dòng)遲緩 明顯改善 ；對(duì)照組的幼龜仍維持原來(lái)的精神狀態(tài)， 判定該 免疫增強(qiáng)劑 有效。 10 記錄 記錄藥效檢驗(yàn)的試劑與材料、儀器 設(shè)備與器具 、抗生素藥效檢驗(yàn)、消毒劑藥效檢驗(yàn)、殺蟲驅(qū)蟲藥藥效檢驗(yàn) 、水質(zhì)改良劑藥效檢驗(yàn)、免疫增強(qiáng)劑藥效檢驗(yàn)的整個(gè)過(guò)程，保存為紙質(zhì)版和電子版。 _________________________________