2019年《生物技術(shù)制藥》作業(yè)題資料附答案
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2019年《生物技術(shù)制藥》作業(yè)題資料附答案 1. 什么是cDNA文庫? 以mRNA為模板,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化,在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA,與適當?shù)妮d體(常用噬菌體或質(zhì)粒載體)連接后轉(zhuǎn)化受體菌,則每個細菌含有一段cDNA,并能繁殖擴增,這樣包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織細胞的cDNA文庫。 2. 構(gòu)建cDNA文庫的基本步驟? 1、mRNA的純化:2、cDNA第一鏈的合成;3、cDNA第二鏈的合成;4、cDNA的克??;5、將重組體導(dǎo)入宿主細胞;6、cDNA文庫的鑒定:抗性基因失活法、噬菌斑顏色改變法 3. 基因工程藥物制藥的主要程序有哪些? 1、 目的基因的克隆2、構(gòu)建DAN重組體3、DAN重組體轉(zhuǎn)入宿主菌 4、 構(gòu)建工程菌5、工程菌發(fā)酵6、表達產(chǎn)物的分離純化7、產(chǎn)品的檢驗等 4. 什么是生物技術(shù)制藥? 采用現(xiàn)代生物技術(shù),借助某些微生物、植物、動物生產(chǎn)醫(yī)藥品,叫作生物技術(shù)制藥。 5. 舉例生物技術(shù)藥物,6例 干擾素、白細胞介素、粒細胞集落刺激因子、紅細胞生成素、胰島素、乙肝疫苗 6. 新型生物反應(yīng)器有哪些? 新型生物反應(yīng)器有: 1.氣升式生物反應(yīng)器 2.流化床式生物反應(yīng)器 3.固定床式生物反應(yīng)器 4.袋式或膜式生物反應(yīng)器 5.中空纖維生物反應(yīng)器 7. 生物技術(shù)藥物按照醫(yī)學(xué)用途有哪些分類? 按照醫(yī)學(xué)用途分類: 1.治療藥物 2.診斷藥物 3.預(yù)防藥物 8. 生物技術(shù)藥物的特性有哪些? 1.分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜 2.具有種屬特異性 3.治療針對性強,療效高 4.穩(wěn)定性差 5.基因穩(wěn)定性6.免疫原性 7.體內(nèi)t1/2短 8.受體效應(yīng) 9.多效性和網(wǎng)絡(luò)性效應(yīng) 10.檢驗的特殊性 9. 適合目的基因表達的宿主細胞應(yīng)滿足哪些要求? 1、 容易獲得較高濃度的細胞;2、能利用易得廉價原料;3、不致病、不產(chǎn)生內(nèi)毒素; 4、 發(fā)熱量低、需氧低、適當?shù)陌l(fā)酵溫度和細胞形態(tài);5、容易進行代謝調(diào)控; 5、 容易進行DNA重組技術(shù)操作;7、產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)率高,產(chǎn)物容易提取純化 10. 宿主細胞分為哪兩大類? 第一類為原核細胞:常用有大腸桿菌、枯草芽胞桿菌、鏈霉菌等; 第二類為真核細胞:常用有酵母、絲狀真菌、哺乳動物細胞等。 11. 大腸桿菌作為宿主細胞表達基因產(chǎn)物的優(yōu)缺點? 優(yōu)點: 1 大腸桿菌生長迅速,分子遺傳學(xué)研究深入,目前是基因工程研究中采用最多的原核表達體系。 2 表達基因產(chǎn)物形式多樣:細胞內(nèi)不溶性表達(包含體)、細胞內(nèi)可溶性表達、細胞周質(zhì)表達等。 3 大腸桿菌中的表達不存在信號肽,產(chǎn)品多為胞內(nèi)產(chǎn)物,提取困難。 缺點: 4 因分泌能力不足,真核蛋白質(zhì)常形成不溶性的包含體,表達產(chǎn)物需經(jīng)變性、復(fù)性才恢復(fù)活性。 5 蛋白質(zhì)不能糖基化。 6 產(chǎn)物蛋白質(zhì)N端多余一個蛋氨酸(甲硫氨酸)殘基。 7 其內(nèi)毒素很難除去。 12. 酵母菌作為宿主細胞表達基因產(chǎn)物的優(yōu)缺點? 優(yōu)點:分泌能力強,能正確進行翻譯后加工(肽剪切糖基化)有成熟的發(fā)酵和后處理工藝。 缺點: 13. 哺乳動物細胞作為宿主細胞表達基因產(chǎn)物的優(yōu)缺點? 優(yōu)點:表達產(chǎn)物可由重組轉(zhuǎn)化細胞分泌到培養(yǎng)液中,純化容易。產(chǎn)物是糖基化的接近天然物。 缺點:生長慢,生產(chǎn)率低,培養(yǎng)條件苛刻,費用高,培養(yǎng)液濃度稀。 14. 影響目的基因在大腸桿菌中表達的因素? 外源基因表達產(chǎn)量與細胞濃度和單個細胞表達產(chǎn)量呈正相關(guān)。單個細胞產(chǎn)量取決于: ⑴外源基因的拷貝數(shù) ⑵ 外源基因的表達效率 ①啟動子的強弱 ②核糖體接合位點的有效性 ③SD序列和起始密碼ATG的間距 ④密碼子組成 ⑶表達產(chǎn)物的穩(wěn)定性 ⑷細胞代謝負荷 ⑸工程菌的培養(yǎng)條件 15. 動物細胞來源的藥物的種類有哪些? ⒈ 動物細胞多肽與蛋白質(zhì)類藥物 ⑴多肽藥物 ① 多肽激素 ② 多肽類細胞因子 ⑵ 蛋白質(zhì)類藥物 ⒉動物酶與輔酶類藥物 ⑴促消化酶類 ⑵消炎酶類 ⑶治療心腦血管類疾病的相關(guān)酶 ⑷抗腫瘤的酶 ⑸與電子傳遞有關(guān)的治療酶 ⑹其它藥用酶 ⑺動物輔酶類藥物 ⒊動物核酸類藥物 ⒋動物糖類藥物:粘多糖類:甲殼素、硫酸軟骨素、肝素、透明質(zhì)酸 ⒌動物脂類藥物 16 動物細胞生產(chǎn)藥物的特點有哪些? 1 哺乳動物細胞外源基因表達產(chǎn)物可由重組轉(zhuǎn)化的細胞分泌到培養(yǎng)液中,使產(chǎn)物易純化。 2 基因產(chǎn)物糖基化接近天然產(chǎn)物。 17 基因載體導(dǎo)入動物細胞的常用方法有哪些? 18. 桿狀病毒載體的優(yōu)點? ①雙鏈DNA,易重組 ②插入7~8kb DNA不影響正常病毒粒子的形成。 ③多角體蛋白和病毒粒子的形成無直接關(guān)系,因此用外源基因更換多角體蛋白基因,仍能形成有感染力病毒粒子; ④多角體蛋白基因有非常強的啟動子,產(chǎn)生的蛋白質(zhì)可占全部蛋白質(zhì)的20%~30%; ⑤用光學(xué)顯微鏡可看到多角體,可以此作為標記物,選陽性克隆。 ⑥如用家蠶桿狀病毒,還可在蠶體表達外源基因 19 什么是抗體,抗體是怎樣產(chǎn)生的? (1) 抗體是指能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合具有免疫功能的球蛋白。 (2) 抗體的產(chǎn)生:機體免疫系統(tǒng)受抗原刺激后,B淋巴細胞被活化增殖和分化為漿細胞,由漿細胞合成和分泌的球蛋白。 20 什么是單克隆抗體(monoclonal antibody,McAb) 針對一個抗原決定簇,由單一的B淋巴細胞克隆產(chǎn)生,具有高度特異性、均一性、來源穩(wěn)定、可大量生產(chǎn)等特點的抗體。 21 怎樣制備單克隆抗體(McAb) 在細胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養(yǎng)成細胞群,可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。 22基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的兩種主要表現(xiàn)形式是什么?基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的主要機制是什么? 分裂不穩(wěn)定:指工程菌分裂時出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒子代菌的現(xiàn)象。 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定:指外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。 ⑴含質(zhì)粒菌產(chǎn)生不含質(zhì)粒子代菌的頻率(質(zhì)粒丟失率); ⑵這兩種菌(含質(zhì)粒菌和不含質(zhì)粒菌)比生長速率差異的大小。 23 動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法有哪些?各自的特點是什么? 1.懸浮培養(yǎng):讓細胞自由的懸浮于培養(yǎng)基內(nèi)生長繁殖。 2.貼壁培養(yǎng):讓細胞貼附在某種基質(zhì)上生長繁殖的培養(yǎng)方法。 3.貼壁-懸浮培養(yǎng)(假懸浮培養(yǎng)) 24. 改造后的鼠源性單克隆小分子抗體的類型及結(jié)構(gòu)特點? 基因工程小分子抗體僅表達鼠源單抗的V區(qū)片段,相對分子量為原抗體的1/80~1/3。即保留CDR區(qū),而Ig 分子中的C區(qū)不表達。 小分子抗體類型有: ①Fab片段抗體 ②Fv抗體(抗體可變區(qū)片段) ③單鏈抗體(scFv) ④單域抗體 ⑤分子識別單位(MRU) 25. 闡述對鼠源性單克隆抗體進行改造的目的是什么? 鼠源性單克隆抗體,應(yīng)用人體時會產(chǎn)生人抗鼠抗體及毒副作用。通過DNA水平對對鼠源性的Ig基因進行切割、拼接或修飾的改造,可以降低免疫源性;降低相對分子量。更符合人類的需求。- 1.請仔細閱讀文檔,確保文檔完整性,對于不預(yù)覽、不比對內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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