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免疫組化技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀 以及臨床應(yīng)用,1,主要內(nèi)容,病理概述 病理科主要研究方法 免疫組化臨床應(yīng)用 免疫組化技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀,2,病理概述,診斷病理學(xué)(diagnostic pathology)：即外科病理學(xué)、人體病理學(xué)，是病理學(xué)一分支，指臨床上由于診斷和治療的需要，對取自病人活體內(nèi)的病變組織、細胞，進行病理診斷的一門醫(yī)療實踐科學(xué)。 研究對象：患者病變組織、細胞 研究目的：確診和治療疾病、提供判定療效和預(yù)后信息 研究方法：組織切片、細胞涂片 應(yīng)用技術(shù)：HE、IHC、ISH、CISH、FISH…… 發(fā)展歷史：150年歷史，國內(nèi)不到100年歷史。,3,與傳統(tǒng)IVD的區(qū)別,研究對象不同 血液，尿液等 VS 細胞和組織 取材過程不同 病理通常通過手術(shù)方式獲取樣本 結(jié)果判斷方法不同 病理不能通過機器直接得到標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果,4,主要內(nèi)容,病理概述 病理科主要研究方法 免疫組化臨床應(yīng)用 免疫組化技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀,5,H.E.染色： 蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。 蘇木精染液為堿性 ，使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色。 伊紅為酸性染料 ，使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。 HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。,6,免疫組化 免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)，IHC；基本原理—抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量的研究。 主要為組織標(biāo)本和細胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。 在常規(guī)腫瘤病理診斷中，有時單靠H.E.染色難以作出明確的形態(tài)學(xué)診斷，需要IHC進行確診。 免疫組化具有特異性強、敏感性高、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合等特點。,7,原位雜交 （in situ hybridization, ISH） 是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。 原位雜交可以在細胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進行。 按標(biāo)記類型可分為DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA,熒光原位雜交技術(shù)（fluorescence in situ hybridization, FISH） 將核酸探針的某一種核苷酸標(biāo)記上報告分子如生物素、地高辛，可利用該報告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)，經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。,8,9,特殊染色 為了顯示與確定組織或細胞中的正常結(jié)構(gòu)或病理過程中出現(xiàn)的異常物質(zhì)、病變及病原體等，需要分別選用相應(yīng)的顯示這些成分的染色方法進行染色。 包括：膠原纖維染色（Masson等）、網(wǎng)狀纖維染色、彈力纖維染色、肌肉組織染色（磷鎢酸蘇木素）、脂肪染色（蘇丹III）、糖原染色（PAS）、粘液染色（PAS）等。,10,主要內(nèi)容,病理概述 病理科主要研究方法 免疫組化臨床應(yīng)用 免疫組化技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀,11,免疫組化的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面： ⑴惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷； ⑵確定轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的原發(fā)部位； ⑶對某類腫瘤進行進一步的病理分型； ⑷軟組織腫瘤的治療一般需根據(jù)正確的組織學(xué)分類，因其種類多、組織形態(tài)相像，,12,有時難以區(qū)分其組織來源，應(yīng)用多種標(biāo)志物進行免疫組化研究對軟組織腫瘤的診斷是不可缺少的； ⑸發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶，有助于臨床治療方案的確定，包括手術(shù)范圍的確定。 ⑹為臨床提供治療方案的選擇。,13,小B細胞淋巴瘤免疫組化特點,14,乳腺浸潤性導(dǎo)管癌免疫組化分子分型 與治療預(yù)后關(guān)系,15,16,,cerBb-2,CD20,ER,CK,17,主要內(nèi)容,病理概述 病理科主要研究方法 免疫組化臨床應(yīng)用 免疫組化技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀,18,,,,,1天,4小時,1天,1塊組織從取材到最終出報告至少需3天時間,19,目前病理診斷的瓶頸,市場需求的病理診斷,手工操作,自動化操作,時間和試劑不能精確控制，影響結(jié)果。,產(chǎn)出率低、醫(yī)院和病理醫(yī)生收益低,操作復(fù)雜，技術(shù)含量高，對醫(yī)生要求高。,完全手工操作耗時耗力。,結(jié)果準(zhǔn)確,操作簡便,快速診斷,節(jié)約成本,,20,免疫組化主要玩家,國際：羅氏、萊卡、DAKO 占據(jù)國內(nèi)絕大部分免疫組化自動化市場 主要問題：價格高，基層醫(yī)院無法承受,21,免疫組化主要玩家,國內(nèi)：試劑有一定積累，儀器剛剛起步，質(zhì)量和穩(wěn)定性不行 邁新：試劑研發(fā)歷史最長，有試劑優(yōu)勢；儀器近年推出。 基因：有試劑，有一款半自動免疫組化 中杉：有試劑無機器 深達：剛推出機器，效果未知,22,達盟全自動免疫組化,核心專利技術(shù)，使清洗更加徹底，染色效果更有保障； 核心專利技術(shù)，提高試劑使用效率，最小試劑使用量80ul 更多人性化設(shè)計和本地快捷服務(wù)，醫(yī)生使用更加順心,23,試劑情況,輔助試劑，包括抗原修復(fù)液，脫蠟液，清洗液，酒精等； 二抗系統(tǒng)：包括有DAB以及蘇木素等，核心是二抗本身。 一抗種類繁多，國內(nèi)已經(jīng)備案的有200種之多。,24,試劑情況,25,謝謝大家！,26,