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高考總復(fù)習(xí)生物,,選修1 生物技術(shù)實(shí)踐 學(xué)案39 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用,一、微生物的分離與培養(yǎng),基礎(chǔ)回顧,1．培養(yǎng)基。 (1)概念：人們按照微生物對(duì)________的不同需求，配制出供其________的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。 (2)營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：一般都含有__________________和無(wú)機(jī)鹽。此外，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)________、氧氣以及__________________的要求。 (3)種類(lèi)：按照物理性質(zhì)可分為_(kāi)_______培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),生長(zhǎng)繁殖,水、碳源、氮源,pH,特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),液體,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,基礎(chǔ)回顧,2．無(wú)菌技術(shù)。 (1)含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止________的方法。 (2)關(guān)鍵：防止________的入侵。 (3)不同對(duì)象的無(wú)菌操作方法。(連線),雜菌污染,外來(lái)雜菌,答案：①②⑥—b ③④⑤—a ⅠⅡ—b ⅢⅣ—a,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,基礎(chǔ)回顧,稱(chēng)量,滅菌,倒平板,接種,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,③常用的微生物接種方法有兩種： a．平板劃線法：是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面__________________，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。 b．稀釋涂布平板法：是將菌液進(jìn)行一系列的____________，然后將______________的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。 (3)菌種的保存方法。 ①對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用________的方法。 ②對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用________的方法。,基礎(chǔ)回顧,連續(xù)劃線的操作,梯度稀釋,不同稀釋度,臨時(shí)保藏,甘油管藏,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,二、微生物的篩選和計(jì)數(shù),基礎(chǔ)回顧,土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)。 (1)分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣蒧_______，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到________作用。 (2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用____________法。 (3)實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→______________→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的________。,脲酶,催化,稀釋涂布平板,樣品的稀釋,計(jì)數(shù),基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,三、分解纖維素的微生物的分離,基礎(chǔ)回顧,復(fù)合酶,C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶,纖維二糖,葡萄糖,紅色復(fù)合物,透明圈,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,(2)篩選方法：________染色法，即通過(guò)是否產(chǎn)生________來(lái)篩選纖維素分解菌。 (3)培養(yǎng)基：以________為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。 (4)實(shí)驗(yàn)流程。 土壤取樣：富含________的環(huán)境 ↓ 選擇培養(yǎng)：用____________培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的濃度 ↓ ________：制備系列稀釋液 ↓ 涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 ↓ 挑選產(chǎn)生________的菌落,基礎(chǔ)回顧,剛果紅,透明圈,纖維素,纖維素,選擇培養(yǎng)基,梯度稀釋,透明圈,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,考點(diǎn)1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),要點(diǎn)探究,1．培養(yǎng)基的成分：,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,2.培養(yǎng)基的種類(lèi)：,要點(diǎn)探究,,特別提醒 (1)并不是所有培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分都相同。 ①自養(yǎng)微生物能夠利用空氣中的CO2合成有機(jī)物，培養(yǎng)基中不需加入有機(jī)碳源(可加入無(wú)機(jī)碳源)。 ②固氮微生物能夠固定空氣中的N2，合成氨態(tài)氮，培養(yǎng)基中不需添加氮源。,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,(2)培養(yǎng)基中的不同營(yíng)養(yǎng)成分不一定是不同物質(zhì)提供。 培養(yǎng)基中不同的營(yíng)養(yǎng)成分可以由同一物質(zhì)提供，有些物質(zhì)，如NH4HCO3，既是氮源也是某些自養(yǎng)生物的碳源。 3．消毒和滅菌的不同點(diǎn)。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,特別提醒 不能正確區(qū)分消毒和滅菌 1．高溫加熱滅菌，其原理就是使細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)變性，而達(dá)到殺滅細(xì)菌的作用。 2．化學(xué)藥劑的滅菌消毒方法，其作用原理是使細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)變性，但是化學(xué)物質(zhì)很難透過(guò)孢子或芽孢的堅(jiān)硬外層進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此化學(xué)方法難以消滅孢子和芽孢。 3．體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇?xì)⒕Ч顝?qiáng)。濃度過(guò)低，殺菌力弱；濃度過(guò)高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固形成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其內(nèi)，殺菌效果受影響。對(duì)剛洗刷后未干的器皿，則可選擇75%的酒精進(jìn)行消毒。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,高考命題角度 （1）從各種相近的選項(xiàng)中直接篩選消毒或滅菌的方法。 （2）給定操作對(duì)象，據(jù)此選擇合適的消毒、滅菌方法。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,3．微生物接種的常用方法。 (1)兩種純化細(xì)菌方法優(yōu)缺點(diǎn)的比較。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,(2)稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中菌落的數(shù)目往往比實(shí)際數(shù)目低，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。 (3)平板劃線法純化大腸桿菌時(shí)不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同： ①第一次操作：殺死接種環(huán)上原有的微生物。 ②每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端。 ③劃線結(jié)束后：殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,特別提醒 配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的注意事項(xiàng)。 (1)倒平板的適宜溫度是50 ℃左右，溫度過(guò)高會(huì)燙手，過(guò)低培養(yǎng)基又會(huì)凝固。 (2)平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,【例?】(2014·江蘇卷)為了獲得β－胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開(kāi)展了產(chǎn)β－胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是________________________________；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應(yīng)該____________________。 (2)為了篩選出酵母菌，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是__________________。 (3)圖示是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是________。(填序號(hào)),要點(diǎn)探究,,干熱滅菌和濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌),用牛皮紙(報(bào)紙)包扎器皿,抑制細(xì)菌(放線菌)生長(zhǎng),①,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,①安全閥、放氣閥、壓力表 ②放氣閥、安全閥、壓力表 ③安全閥、放氣閥、溫度表 ④放氣閥、安全閥、溫度表 (4)為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見(jiàn)菌生長(zhǎng)，最可能的原因是____________________________________。,要點(diǎn)探究,接種環(huán)溫度過(guò)高，菌被殺死,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,(5)為增加β－胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細(xì)胞時(shí)，添加石英砂的目的是__________________；研磨時(shí)________(填“需要”或“不需要”)添加CaCO3，理由是______________________________。,要點(diǎn)探究,有助于研磨充分,不需要,β－胡蘿卜素較耐酸,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,解析：(1)滅菌常用方法有高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌等，培養(yǎng)皿常用高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌。將培養(yǎng)皿放入滅菌鍋之前通常用牛皮紙或報(bào)紙包扎避免滅菌后的再次污染。(2)青霉素能破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁并在細(xì)菌的繁殖期起殺菌作用，因此添加青霉素可抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。(3)乙連接軟管為排(放)氣閥，甲為安全閥，丙是壓力表。(4)三塊平板有兩塊平板長(zhǎng)有菌落，說(shuō)明含有菌株并可在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；而其中一塊未見(jiàn)菌落，說(shuō)明菌株死亡。因此，應(yīng)是接種過(guò)程中接種環(huán)灼燒后未冷卻或未足夠冷卻，使菌株因溫度過(guò)高被殺死。(5)石英砂有助于研磨充分。CaCO3用于中和酸性物質(zhì)，β－胡蘿卜素較耐酸，因此不需添加。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,名師點(diǎn)睛 根據(jù)培養(yǎng)基變化篩選微生物 (1)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。 (2)改變培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分。例如，缺乏氮源時(shí)可以分離出固氮微生物；石油作為唯一碳源時(shí)，可以分離出能分解石油的微生物。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,考點(diǎn)2 微生物的分離與計(jì)數(shù),要點(diǎn)探究,1．篩選菌株的原則是：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)。 2．探究菌株篩選原理的不同點(diǎn)。,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,3.在微生物的篩選與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的目的是：排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 4．證明培養(yǎng)基未被污染的對(duì)照——用空白培養(yǎng)基作對(duì)照。 5．證明選擇培養(yǎng)基選擇作用的對(duì)照——用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基接種等量同種菌液作對(duì)照。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,6．微生物的計(jì)數(shù)。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,特別提醒 (1)設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。 (2)為了使結(jié)果接近真實(shí)值，應(yīng)設(shè)置三個(gè)或三個(gè)以上的平板，計(jì)算出菌落平均數(shù)。 (3)計(jì)算時(shí)明顯偏離實(shí)際值(本組實(shí)驗(yàn)其他平板計(jì)數(shù)值)的要舍棄掉后求平均值。 (4)對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)首先要明確設(shè)計(jì)的目的，分析出實(shí)驗(yàn)的自變量之后才能準(zhǔn)確設(shè)計(jì)。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,【例?】無(wú)菌操作是微生物接種技術(shù)的關(guān)鍵；傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)和微生物分離、純化、應(yīng)用過(guò)程及植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，均要無(wú)菌操作?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問(wèn)題： (1)消毒和滅菌是兩個(gè)不同的概念，滅菌是指徹底殺滅微生物使其永遠(yuǎn)喪失生長(zhǎng)繁殖的能力。消毒僅指殺死一部分對(duì)人體有害的病原菌而對(duì)被消毒的物體基本無(wú)害。下列哪些事物適用于消毒處理__________________________。,要點(diǎn)探究,,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,①皮膚 ②飲用水 ③牛奶 ④注射器 ⑤培養(yǎng)皿 ⑥接種環(huán) ⑦培養(yǎng)基 ⑧果汁 ⑨醬油 ⑩手術(shù)刀 A．①②③⑧⑨ B．④⑤⑥⑦⑩ C．①②③④⑤⑥⑧ D．以上全部,要點(diǎn)探究,,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,要點(diǎn)探究,(2)配制培養(yǎng)基時(shí)各種成分在溶化后分裝前必須進(jìn)行___________________，接種前要進(jìn)行______________，在整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在無(wú)菌條件下進(jìn)行。 (3)在微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是_____________________________。下圖是利用________________________法進(jìn)行大腸桿菌接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。為達(dá)到這一目的，操作上應(yīng)注意：,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,要點(diǎn)探究,①每次劃線前要___________________________； ②冷卻后從上一區(qū)劃線末端開(kāi)始劃； ③首尾區(qū)__________________。,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,要點(diǎn)探究,（4）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。 對(duì)固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是 ______________________ ，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。 （5）利用培養(yǎng)基不僅可以分離培養(yǎng)大腸桿菌，也可以進(jìn)行植物組織培養(yǎng)。與大腸桿菌培養(yǎng)明顯不同的是，用于組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中還需要加入 。 （6）有位同學(xué)在家制作泡菜時(shí)，為避免雜菌污染而向泡菜壇中加入了青霉素，結(jié)果發(fā)酵失敗，原因可能是_____________ 。,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,答案：(1)A (2)調(diào)整pH 高壓蒸汽滅菌 (3)防止外來(lái)雜菌的入侵 平板劃線 灼燒接種環(huán) 不連接(不重疊) (4)將未接種(接種等量無(wú)菌水)的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當(dāng)時(shí)間 (5)植物激素(或生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素) (6)青霉素殺死了乳酸菌,要點(diǎn)探究,,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,名師點(diǎn)睛 (1)不是所有的接種方法都適用于微生物的計(jì)數(shù)。 ①平板劃線法和稀釋涂布平板法都可以用于微生物的接種，稀釋涂布平板法還可用于微生物的計(jì)數(shù)。 ②由于平板劃線法只在最后幾次劃線上的菌落才可能是單個(gè)存在，前幾次所劃線上的菌落是堆疊在一起的，無(wú)法進(jìn)行計(jì)數(shù)操作。 (2)運(yùn)用計(jì)數(shù)手段所獲得的數(shù)據(jù)并不是精確數(shù)據(jù)。 ①直接計(jì)數(shù)法觀察到的細(xì)菌中包含了部分死的細(xì)菌，導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)的數(shù)值比真實(shí)數(shù)值偏大。,要點(diǎn)探究,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,②由于可能存在多個(gè)活菌堆疊在一起長(zhǎng)成一個(gè)菌落，導(dǎo)致活菌計(jì)數(shù)法推算所得數(shù)值要比真實(shí)數(shù)值偏低。 (3)按照公式計(jì)算活菌數(shù)時(shí)，要看清題干有無(wú)對(duì)涂布菌液體積的描述，①若有則必須按描述信息解答；②若無(wú)相關(guān)信息，則按涂布體積為0.1 mL計(jì)算得出答案。,要點(diǎn)探究,,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,提能演練,1．(2014·大綱卷)某同學(xué)在①、②、③三種條件下培養(yǎng)大腸桿菌，這三種條件是： ①以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，不斷補(bǔ)充培養(yǎng)基，及時(shí)去除代謝產(chǎn)物 ②以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，不補(bǔ)充培養(yǎng)基，不去除代謝產(chǎn)物 ③以葡萄糖和乳糖為碳源的培養(yǎng)基，不補(bǔ)充培養(yǎng)基，不去除代謝產(chǎn)物 根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果繪制的一段時(shí)間內(nèi)菌體數(shù)的對(duì)數(shù)隨時(shí)間變化的趨勢(shì)圖如下，假設(shè)三種培養(yǎng)基中初始總糖量相等，則①、②、③三種條件依次對(duì)應(yīng)的趨勢(shì)圖是( ),C,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,高分秘笈,A．甲、乙、丙 B．乙、丙、甲 C．丙、甲、乙 D．丙、乙、甲,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,高分秘笈,解析：以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，不補(bǔ)充培養(yǎng)基，不除去代謝產(chǎn)物，隨著營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗和次級(jí)代謝產(chǎn)物的積累，大腸桿菌的生長(zhǎng)環(huán)境不斷惡化，生存阻力增大，因此種群數(shù)量達(dá)到穩(wěn)定期后會(huì)出現(xiàn)衰亡期，故甲圖對(duì)應(yīng)②，反之丙圖則對(duì)應(yīng)①；若培養(yǎng)基里加入葡萄糖和乳糖，大腸桿菌先利用葡萄糖，葡萄糖消耗完以后，大腸桿菌會(huì)經(jīng)過(guò)短期的調(diào)整，誘導(dǎo)合成乳糖苷酶，接著繼續(xù)分解利用乳糖，最后衰亡，因此乙圖對(duì)應(yīng)③，選C。,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,提能演練,2．(2014·新課標(biāo)Ⅰ卷)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將________分解成________。 (2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時(shí)，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。 (3)為了從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見(jiàn)下表)：,,纖維二糖,葡萄糖,紅,透明圈,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,高分秘笈,注：“＋”表示有，“－”表示無(wú)。 據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是__________________________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是________________________________________________________________________________________________________。,不能,液體培養(yǎng)基不能分離單菌落,不能,乙培養(yǎng)基中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成CR－纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,高分秘笈,基礎(chǔ)回顧 要點(diǎn)探究 提能演練,欄目鏈接,