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體液中酶的生物化學(xué)檢驗(yàn),1,,1、掌握臨床診斷中常用酶與同工酶的檢測(cè)方法、參考區(qū)間及臨床意義,2、熟悉酶及同工酶的基本概念、分類與特征,本章教學(xué)要求：,2,第一節(jié) 概述,,3,一、基本概念,酶（E）：具有催化作用的生物大分子，在生命進(jìn)程中發(fā)揮著重要作用。除少數(shù)酶是核酸外，絕大多數(shù)酶是蛋白質(zhì) 酶的底物（S）：酶所催化的反應(yīng)物 酶的產(chǎn)物（P）：酶促反應(yīng)的生成物 酶的活性：酶的催化能力的大小,4,二、酶的分類,單純酶 結(jié)合酶 酶蛋白（蛋白質(zhì)部分） 輔助因子,,輔酶（非共價(jià)鍵結(jié)合） 輔基（共價(jià)鍵結(jié)合）,,1、酶分子的組成,5,2、催化的反應(yīng)性質(zhì),1.氧化還原酶 2.轉(zhuǎn)移酶 3.水解酶 4.裂合酶或裂解酶 5.異構(gòu)酶 6.合成酶或連接酶,酶的命名采用系統(tǒng)命名法,,6,7,三、同工酶,同工酶：催化的化學(xué)反應(yīng)相同，但酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶。 根據(jù)同工酶的來(lái)源和結(jié)構(gòu)不同，從基因角度可將其分為單基因決定的同工酶、復(fù)等位基因同工酶、多基因決定的同工酶和修飾同工酶四類。,8,9,四、血清酶,血漿特異酶（血漿固有酶）：凝血酶、纖溶酶、膽堿酯酶、銅氧化酶（銅藍(lán)蛋白）、脂蛋白酯酶等 非血漿特異酶：外分泌酶和細(xì)胞酶,（一）分類,10,（二）影響血清酶的因素,1、生理變化,性別 年齡 飲食 運(yùn)動(dòng) 妊娠,11,2、病理變化,（1）酶合成異常：大多數(shù)酶在肝臟合成 （2）酶釋放增加：酶從病變（或損傷）細(xì)胞中釋放增加是疾病時(shí)大多數(shù)酶增高的原因 （3）酶清除異常：同酶的半壽期以及其他一些因素有關(guān),血清酶的半壽期（T1/2）：指酶失活至原來(lái)活性一半時(shí)所需要的時(shí)間。半壽期長(zhǎng)的酶，在血清中持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。,12,13,第二節(jié) 臨床診斷中常用的酶與同工酶,一、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）,也稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）一種參與人體蛋白質(zhì)新陳代謝的酶，起加快體內(nèi)蛋白質(zhì)氨基酸在體內(nèi)轉(zhuǎn)化的作用，它廣泛存在于人體各種組織、器官、肌肉、骨骼中，以肝細(xì)胞的細(xì)胞漿中最多。,14,（一）檢測(cè)方法,連續(xù)監(jiān)測(cè)法,可在340nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)NADH的消耗量，從而計(jì)算出ALT活性濃度。,L-丙氨酸+α-酮戊二酸 α-丙酮酸+L-谷氨酸,ALT,α-丙酮酸+NADH+H+ 乳酸+NAD+,LD,15,（二）參考區(qū)間,男性：9--50U/L 女性：7--40U/L,（三）臨床意義,1、活性增高 （1）肝膽疾病：傳染性肝炎、肝癌、中毒性肝炎、脂肪肝、膽管炎等 （2）心血管疾病：心梗、心肌炎、腦出血等 （3）藥物和毒物 2、活性降低：磷酸吡哆醛缺乏癥,16,二、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）,也稱谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT），AST和ALT是人體內(nèi)糖和蛋白質(zhì)相互轉(zhuǎn)變所需的酶。AST廣泛分布于全身各組織，尤其以心臟、骨骼肌、肝臟、腎臟中最為豐富，在細(xì)胞內(nèi)定位于線粒體（ASTm）和胞質(zhì)（ASTs）中，70%為ASTm,17,（一）檢測(cè)方法,連續(xù)監(jiān)測(cè)法,可在340nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)NADH的消耗量，從而計(jì)算出AST活性濃度。,L-天冬氨酸+α-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸,AST,草酰乙酸+NADH+H+ L-蘋(píng)果酸+NAD+,MD,18,（二）參考區(qū)間,8--40U/L,（三）臨床意義,活性增高 （1）AST在心肌細(xì)胞中含量最高，心肌梗死時(shí)活性增高 （2）各種肝病 （3）肌炎、胸膜炎、腎炎、肺炎,19,三、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）,是一種含巰基的線粒體酶，參與體內(nèi)谷胱甘肽的代謝。腎臟、肝臟和胰腺中含量豐富，但血清中GGT主要來(lái)自肝膽系統(tǒng)。GGT在肝臟中廣泛分布于肝細(xì)胞的毛細(xì)膽管一側(cè)和整個(gè)膽管系統(tǒng)，因此肝內(nèi)合成亢進(jìn)或膽汁排出受阻時(shí)，血清中GGT升高。,20,（一）檢測(cè)方法,堿性條件下GCNA與甘氨酰甘氨酸反應(yīng)的方法,（二）參考區(qū)間,男性：11--50U/L 女性：7--32U/L,21,（三）臨床意義,1、腎臟疾?。貉逯蠫GT活性升高不明顯 2、肝臟疾?。?（1）診斷惡性腫瘤肝轉(zhuǎn)移和肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)情況，陽(yáng)性率可達(dá)90% （2）GGT同工酶II與AFP聯(lián)合檢測(cè)可原發(fā)性肝癌的檢測(cè)陽(yáng)性率明顯升高 3、嗜酒或長(zhǎng)期服用某種藥物,22,四、肌酸激酶（CK）,CK能催化高能磷酸鍵在肌酸和ATP之間轉(zhuǎn)換。為二聚體結(jié)構(gòu)，由M和B兩個(gè)亞基構(gòu)成，可組成三種同工酶，CK-MM（主要存在于骨骼肌中）、CK-BB（腦、平滑肌）、CK-MB（心?。?。,23,（一）檢測(cè)方法,酶偶聯(lián)法,（二）參考區(qū)間,男性：38--174U/L 女性：26--140U/L,24,（三）臨床意義,1、心肌梗死：AMI發(fā)生后4-8h，CK開(kāi)始升高，12-48h達(dá)高峰，可達(dá)正常上限的10-12倍，2-4天后降至正常。CK-MB是目前公認(rèn)的診斷AMI較有價(jià)值的生化指標(biāo)。 2、病毒性心肌炎 3、皮肌炎、肌營(yíng)養(yǎng)不良、骨骼肌損傷等 4、腦膜炎、腦血管意外、甲狀腺功能低下 5、非疾病因素：劇烈運(yùn)動(dòng)，各種插管及手術(shù)等,升高,甲亢、長(zhǎng)期臥床者，CK-MM下降,25,五、乳酸脫氫酶（LD）,LD是參與糖無(wú)氧酵解和糖異生的重要酶。LD是由M和H兩個(gè)亞基組成的四聚體，形成五種結(jié)構(gòu)不同的同工酶 LD1（H4）和LD2（H3M）：主要存在于腎、心肌和紅細(xì)胞 LD3（H2M2）：脾臟、肺臟 LD4（HM3）和LD5（M4）：橫紋肌和肝臟,26,（一）檢測(cè)方法,連續(xù)監(jiān)測(cè)法,在340nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)NADH吸光度上升或下降速率，與LD活性呈正比關(guān)系。,正向反應(yīng)：L-乳酸+NAD 丙酮酸+ NADH+H+,LD,LD,逆向反應(yīng)：丙酮酸+ NADH+H+ L-乳酸+NAD,PH8.8-9.8,PH7.4-7.8,27,（二）參考區(qū)間,LD-L法：109--245U/L LD-P法：200--280U/L,28,（三）臨床意義,29,六、堿性磷酸酶（ALP）,堿性磷酸酶（ALP或AKP）是廣泛分布于人體肝臟、骨骼、腸、腎和胎盤(pán)等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶。這種酶能催化核酸分子脫掉5’磷酸基團(tuán)，從而使DNA或RNA片段的5’-P末端轉(zhuǎn)換成5’-OH末端。但它不是單一的酶，而是一組同功酶。分為生殖細(xì)胞型、胎盤(pán)型、腸型和非特異組織型。,30,（一）檢測(cè)方法,連續(xù)監(jiān)測(cè)法,（二）參考區(qū)間,女性：1-12歲 15歲 40--150U/L 男性：1-12歲 25歲 40--150U/L,31,（三）臨床意義,1、骨骼疾病：變形性骨炎、佝僂病、軟骨病、骨惡性腫瘤、惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移等 2、肝膽疾病：阻塞性黃疸、肝硬化、肝壞死、原發(fā)性和繼發(fā)性肝癌時(shí)明顯升高；肝細(xì)胞性黃疸升高不明顯。 3、腫瘤：乳腺癌、肺癌等 4、其他疾病：甲狀腺及甲狀旁腺功能亢進(jìn)、遺傳性ALP過(guò)多癥 5、藥物：巴比妥類、抗生素等,升高,32,七、酸性磷酸酶（ACP）,酸性磷酸酶是一種在酸性條件下催化磷酸單酯水解生成無(wú)機(jī)磷酸的水解酶。人血清酸性磷酸酶的最適pH為4.5-7。ACP前列腺含量最多，主要存在于巨噬細(xì)胞，定位于溶酶體內(nèi)。ACP同工酶分為前列腺ACP和非前列腺ACP兩大類。,33,（一）檢測(cè)方法,連續(xù)監(jiān)測(cè)法,（二）參考區(qū)間,成人總酶活性：0--9U/L 前列腺ACP：0--3U/L,（三）臨床意義,血清中ACP測(cè)定主要作為前列腺癌的輔助診斷、療效觀察及預(yù)后判斷。,34,八、淀粉酶（AMY）,AMY屬于糖苷鏈水解酶。主要存在于胰腺和唾液腺中。有兩種同工酶，唾液型（S-AMY）和胰腺型（P-AMY）。正常人血清中AMY主要由肝臟產(chǎn)生，AMY分子量小，可通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)出現(xiàn)在尿液中。AMY是唯一能正常時(shí)出現(xiàn)于尿液中的血清酶。,35,（一）檢測(cè)方法,對(duì)硝基酚麥芽七糖苷法,（二）參考區(qū)間,血清AMY：220U/L 尿AMY :≤1200U/L,36,（三）臨床意義,1、急性胰腺炎和流行性腮腺炎。 急性胰腺炎發(fā)病后2h血AMY開(kāi)始升高，12-24h達(dá)高峰，2-5天降至正常。尿AMY于發(fā)病后12-24h開(kāi)始升高，下降也比血清慢。因此急性胰腺炎后期測(cè)定尿AMY意義更大。 2、急性闌尾炎、腸梗阻、胰腺癌、膽石癥、潰瘍病穿孔及嗎啡注射后 3、血清與尿中同時(shí)減低主要見(jiàn)于肝炎、肝硬化、肝癌及急慢性膽囊炎。,37,九、脂肪酶（LPS）,LPS又稱甘油三酯酶或甘油三酯酯酰水解酶，是分解脂肪的酶，催化脂肪水解為甘油和脂肪酸。血清LPS主要來(lái)源于胰腺，少數(shù)來(lái)自胃腸粘膜，可由腎小球?yàn)V過(guò)，并由腎小管全部重吸收，所以尿液中測(cè)不到脂肪酶活性。,38,（一）檢測(cè)方法,酶偶聯(lián)比色法,（二）參考區(qū)間,酶偶聯(lián)法：1--54U/L 比濁法 :0-7.9U/L,39,（三）臨床意義,1、主要用于急性胰腺炎的診斷，靈敏度高達(dá)80%-100%，特異性為84%-96%。診斷價(jià)值優(yōu)于AMY。 2、酗酒、乙醇性胰腺炎、胰腺癌、慢性胰腺炎以及肝膽疾病時(shí)有不同程度的升高。,40,十、膽堿酯酶（ChE）,ChE是一類催化?；憠A的水解酶。一般可分為真性膽堿酯酶（AChE）和假性膽堿脂酶（PChE）。真性膽堿酯酶也稱乙酰膽堿酯酶主要存在于膽堿能神經(jīng)末梢突觸間隙，PChE又稱血清膽堿酯酶。臨床上測(cè)定的ChE主要由肝細(xì)胞合成。另外，含有有機(jī)磷的殺蟲(chóng)劑能抑制紅細(xì)胞內(nèi)的AChE和血清中的PChE。,41,（一）檢測(cè)方法,丁酰硫代膽堿法,（二）參考區(qū)間,5000--12000U/L,42,（三）臨床意義,1、有機(jī)磷和甲丙氨酯類殺蟲(chóng)劑中毒時(shí)，血清ChE活性明顯降低，并與臨床癥狀相一致。 2、評(píng)價(jià)肝細(xì)胞合成功能的靈敏指標(biāo)：各種慢性肝病，如肝炎、肝膿腫、肝硬化患者中，約有50%患者ChE活性降低。 3、羊水中AChE的測(cè)定可以用于神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前診斷。,43,,THE END,THANK YOU??！,44,