食品中鉤吻堿和鉤吻堿子的測定
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DBS45廣西壯族自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)DBS 45/xxxxxxx食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)食品中鉤吻堿和鉤吻堿子的測定(征求意見稿)XXXX - XX - XX發(fā)布XXXX - XX - XX實(shí)施廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會(huì) 發(fā)布附件1DBS 45/XXXXXXX前 言本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T 1.12009的格式編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會(huì)提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:梧州市食品藥品檢驗(yàn)所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:羅達(dá)龍、陳學(xué)松、劉慧妍、黃蘅、葉小強(qiáng)、賴秀梅、王華、陳翠玲、姚泳成、鐘家I食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)食品中鉤吻堿和鉤吻堿子的測定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中鉤吻堿和鉤吻堿子的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和氣相色譜-質(zhì)譜測定方法。標(biāo)準(zhǔn)中方法一 高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法,適用于蜂蜜、酒類及疑似鉤吻中毒的食品(如保健湯等)中鉤吻堿和鉤吻堿子的定性和定量測定,其它基質(zhì)食品可參照執(zhí)行。 標(biāo)準(zhǔn)中方法二 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,適用于蜂蜜、酒類及疑似鉤吻中毒的食品(如保健湯等)中鉤吻堿和鉤吻堿子的定性和定量測定,其它基質(zhì)食品可參照執(zhí)行。標(biāo)準(zhǔn)中方法三 高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜法,適用于蜂蜜、酒類及疑似鉤吻中毒的食品(如保健湯等)中鉤吻堿和鉤吻堿子的篩查和定性確證,其它基質(zhì)食品可參照執(zhí)行。 2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法方法一 高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法3 原理試樣經(jīng)1 %鹽酸超聲提取,經(jīng)MCX柱凈化后,高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定,外標(biāo)法定量。4 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。4.1 試劑4.1.1 甲醇(CH3OH):色譜純。4.1.2 甲酸(HCOOH):色譜純。4.1.3 乙腈(CH3CN):色譜純。4.1.4 鹽酸(HCl)。4.1.5 氨水(NH3H2O)。4.1.6 甲酸銨(HCOONH4)。4.2 試劑配制4.2.1 5 %氨化甲醇:取氨水5.0mL,用甲醇稀釋至100mL。4.2.2 5 mmol/L甲酸銨溶液(含0.1 %甲酸):稱取甲酸銨0.315 g,加適量水溶解,加入甲酸1.0 mL,用水稀釋至1000 mL,搖勻,用濾膜(5.3)過濾后備用。4.2.3 1 %鹽酸水溶液:取鹽酸1.0 mL用水稀釋至100 mL。4.2.4 50 %甲醇溶液(含0.1%甲酸):取甲醇與水各50 mL,混合均勻,每100 mL混合液中加入甲酸0.10 mL。4.3 標(biāo)準(zhǔn)品鉤吻堿、鉤吻堿子標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、精確分子量見附錄E表E.1,純度98%。4.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制4.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 mg/mL):精密稱取鉤吻堿、鉤吻堿子標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg分別置10 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度。-20 以下避光密封保存,有效期6個(gè)月。4.4.2 混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液(1 g/mL):分別準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 mg/mL)各0.10 mL,用甲醇(4.1.1)稀釋至100 mL。4.4.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液(1 g/mL)(4.4.2)適量,用甲醇溶液(4.2.4)稀釋,搖勻,作為系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,各化合物濃度依次為2 g/L、4 g/L、8 g/L、10 g/L、20 g/L,(可根據(jù)需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整),現(xiàn)配現(xiàn)用。5 儀器和設(shè)備5.1 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀,配電噴霧(ESI)離子源。5.2 天平:感量分別為0.01 mg、0.1 mg和0.01 g。5.3 微孔濾膜:0.22 m,有機(jī)相型。5.4 離心機(jī):轉(zhuǎn)速3 000 r/min。5.5 超聲波發(fā)生器:工作頻率40 kHz ,功率100 W。5.6 MCX固相萃取小柱:60 mg/3mL,或性能相當(dāng)者。使用前依次用甲醇3 mL、水3 mL進(jìn)行活化。5.7 渦旋振蕩器。5.8 帶刻度100 mL一次性離心管。6 分析步驟6.1 試樣制備6.1.1 蜂蜜樣品制備對(duì)無結(jié)晶的蜂蜜樣品,將其攪拌均勻。對(duì)有結(jié)晶的樣品,在密閉情況下,置于不超過 60的水浴中溫?zé)?,振蕩,待樣品全部融化后攪勻,迅速冷卻至室溫,分出0.5kg作為試樣置于樣品瓶中,密封,并標(biāo)明標(biāo)記,室溫保存,待用。 6.1.2 保健湯樣品制備應(yīng)將湯與湯渣混合均勻后作為試樣。制備均勻的試樣應(yīng)置于樣品瓶中,密封,并標(biāo)明標(biāo)記,置于28保存,待用。 6.1.3 試樣處理稱取1g(精確至0.01g)制備均勻的樣品于帶刻度100 mL一次性離心管中,加1 %鹽酸溶液至50 mL,渦旋振蕩2 min后超聲處理30分鐘,3000 r/mim離心5分鐘,準(zhǔn)確吸取上清液5.00 mL,置MCX固相萃取小柱,依次用水5 mL、甲醇5 mL淋洗,抽干,用5 mL氨化甲醇溶液(4.2.4)洗脫,收集洗脫液, 40 氮吹濃縮至干,準(zhǔn)確加入1.00 mL甲醇溶液(4.2.4)溶解殘?jiān)?,過0.22m濾膜,備用。必要時(shí)可根據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋。6.2 儀器參考條件6.2.1 色譜條件a)色譜柱:C18 2.5 m,2.1 mm x75 mm,或性能相當(dāng)者。b)流動(dòng)相:A為5 mmol/L甲酸銨溶液(含0.1 %甲酸)(4.2.2),B為乙腈(4.1.3),梯度洗脫程序見表1。c)流速:0.35 mL/min。d)柱溫:35 。e)進(jìn)樣量:0.5 L。表1 梯度洗脫程序表梯度時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%0.009551.0090101.5065352.5010903.005953.019555.509556.2.2 質(zhì)譜條件a) 離子源: ESI源。b) 檢測方式:多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM)。c) 碰撞氣為高純氮?dú)?,干燥氣、霧化氣、鞘氣等均為氮?dú)饣蚱渌线m氣體,使用前應(yīng)調(diào)節(jié)相應(yīng)參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求,毛細(xì)管電壓、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量、碰撞能量、碎裂電壓等參數(shù)應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度,監(jiān)測離子對(duì)和定量離子對(duì)等信息詳見附錄A表A.1。6.3 定性測定按照高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜條件測定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,記錄試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液中各化合物的色譜保留時(shí)間,當(dāng)試樣中檢出與標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰保留時(shí)間一致的色譜峰(變化范圍在2.5 %之內(nèi)),并且試樣色譜圖中所選擇的監(jiān)測離子對(duì)的相對(duì)豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子相對(duì)豐度比(k)的偏差不超過表2規(guī)定的范圍,可以確定試樣中檢出相應(yīng)化合物。表2 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度(%)k50 %50 %k20 %20 %k10 %k10 %允許的最大偏差(%) 20 25 30 506.4 定量測定6.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(4.4.3)分別按儀器參考條件(6.2)進(jìn)行測定,得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo),以定量離子的色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.4.2 試樣溶液的測定將試樣溶液(6.1.3)按儀器參考條件(6.2)進(jìn)行測定,得到樣品溶液中對(duì)應(yīng)組分的色譜峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中組分的濃度,平行測定次數(shù)不少于兩次。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見附錄B。6.4.3 空白試驗(yàn)除不加試樣外,均按上述步驟進(jìn)行。7 結(jié)果計(jì)算將液相色譜-質(zhì)譜測得濃度代入下式計(jì)算含量:(1)式中:X 試樣中各待測物的含量,單位為微克每千克(g/kg);c 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出的供試品溶液中各待測物的濃度,單位為微克每升(g/L);V 樣液最終定容體積,單位為毫升(mL);m 試樣溶液所代表的質(zhì)量,單位為克(g);f 稀釋倍數(shù)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20 %。9 檢出限和回收率9.1 檢出限本方法中鉤吻堿檢出限為14 g/kg,鉤吻堿子檢出限為10 g/kg;鉤吻堿定量限為28 g/kg。鉤吻堿子定量限為20 g/kg。9.2 回收率回收率詳見附錄H表H.1。21方法二 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法10 原理試樣經(jīng)1 %鹽酸超聲提取,經(jīng)MCX柱凈化后,氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定,外標(biāo)法定量。11 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。11.1 試劑11.1.1 甲醇(CH3OH):色譜純。11.1.2 甲酸(HCOOH):色譜純。11.1.3 乙腈(CH3CN):色譜純。11.1.4 鹽酸(HCl)。11.1.5 氨水(NH3H2O)。11.1.6 甲酸銨(HCOONH4)。11.2 試劑配制11.2.1 5 %氨化甲醇:取氨水5.0mL,用甲醇稀釋至100mL。11.2.2 1 %鹽酸水溶液:取鹽酸1.0 mL,用水稀釋至100 mL。11.3 標(biāo)準(zhǔn)品鉤吻堿、鉤吻堿子標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、精確分子量見附錄E表E.1,純度98%。11.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制11.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 mg/mL):精密稱取鉤吻堿、鉤吻堿子標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg分別置10 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度。-20 以下避光密封保存,有效期6個(gè)月。11.4.2 混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液(1 g/mL):分別準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 mg/mL)各0.10 mL,用甲醇稀釋至100 mL。11.4.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液(1 g/mL)(11.4.2)適量,用甲醇稀釋,搖勻,作為系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,各化合物濃度依次為20 g/L、40g/L、80 g/L、100 g/L、200 g/L,(可根據(jù)需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整),現(xiàn)配現(xiàn)用。12 儀器和設(shè)備氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀,其他儀器設(shè)備同方法一 5.25.8。13 分析步驟13.1 試樣制備13.1.1 蜂蜜樣品制備與6.1.1項(xiàng)下一致13.1.2 保健湯樣品制備與6.1.2項(xiàng)下一致13.1.3 試樣處理稱取1g(精確至0.01g)制備均勻的樣品于帶刻度100 mL一次性離心管中,加1 %鹽酸溶液至50 mL,渦旋振蕩2 min后超聲處理30分鐘,3000 r/mim離心5分鐘,準(zhǔn)確吸取上清液5.00 mL,置MCX固相萃取小柱,依次用水5 mL、甲醇5 mL淋洗,抽干,用5 mL氨化甲醇溶液(11.2.1)洗脫,收集洗脫液, 40 氮吹濃縮至干,準(zhǔn)確加入1.00mL甲醇溶解殘?jiān)^0.22m濾膜,備用。必要時(shí)可根據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋。13.2 儀器參考條件13.2.1 色譜條件a)色譜柱:以5 %苯基-95 %二甲基聚硅氧烷為固定相 0.25 mm30 m0.25 m石英毛細(xì)管柱,或性能相當(dāng)者。b)載氣:高純氦氣(純度:99.999%)。c)流速:1.2 mL/min。d)進(jìn)樣量:1.0 L;不分流進(jìn)樣。e)程序升溫:初始溫度為150 ,保持2 min,然后15 min-1升至280 ,保持4 min13.2.2 質(zhì)譜條件a)離子源:電子轟擊源(EI) 70 eV。b)離子源溫度230 。c)溫度280 。d)四極桿溫度150 。e)儀器使用前以全氟三丁胺調(diào)諧液對(duì)質(zhì)譜質(zhì)量軸進(jìn)行校正。f)全掃描(SCAN)質(zhì)量范圍40-350 amu。g) 監(jiān)測方式:選擇離子掃描(SIM):選擇離子詳見附錄C。13.3 定性測定 在相同實(shí)驗(yàn)條件下,樣液中待測物質(zhì)的質(zhì)量色譜保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液相同并且在扣除背景后的樣品質(zhì)量色譜中所選離子均出現(xiàn),經(jīng)過對(duì)比所選擇離子的豐度與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)離子的豐度比其值在允許范圍內(nèi)(允許范圍見表3)則可判定樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測物。在上述色譜條件下,鉤吻堿和鉤吻堿子的保留時(shí)間參見附錄C。鉤吻堿和鉤吻堿子標(biāo)準(zhǔn)品的氣相色譜-質(zhì)譜選擇離子色譜圖參見附錄D。表3 單極質(zhì)譜電子轟擊電離源分析定性時(shí)相對(duì)離子豐度比的最大允許相對(duì)誤差相對(duì)離子豐度比(基峰%)502050102010最大允許相對(duì)誤差 10 % 15 % 20 % 50 %13.4 定量測定13.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(11.4.3)分別按儀器參考條件(13.2)進(jìn)行測定,得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo),以定量離子的色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。13.4.2 試樣溶液的測定將試樣溶液(13.1.3)按儀器參考條件(13.2)進(jìn)行測定,得到樣品溶液中對(duì)應(yīng)組分的色譜峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中組分的濃度,平行測定次數(shù)不少于兩次。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見附錄D。13.4.3 空白試驗(yàn)除不加試樣外,均按上述步驟進(jìn)行。14 結(jié)果計(jì)算將氣相色譜-質(zhì)譜測得濃度代入下式計(jì)算含量:(1)式中:X 試樣中各待測物的含量,單位為微克每千克(g/kg);c 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出的供試品溶液中各待測物的濃度,單位為微克每升(g/L);V 樣液最終定容體積,單位為毫升(mL);m 試樣溶液所代表的質(zhì)量,單位為克(g);f 稀釋倍數(shù)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。15 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20 %。16 檢出限和回收率16.1 檢出限監(jiān)測方式為選擇離子掃描(SIM)時(shí),本方法中鉤吻堿檢出限為140 g/kg,鉤吻堿子檢出限為100 g/kg;鉤吻堿定量限為280 g/kg。鉤吻堿子定量限為200 g/kg。16.2 回收率回收率詳見附錄I表I.1。 方法三 高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜法17 原理試樣經(jīng)1 %鹽酸超聲提取,經(jīng)MCX柱凈化后,高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜測定,比較供試品與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、一級(jí)質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖進(jìn)行篩查和定性確證。18 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。18.1 試劑18.1.1 乙腈(CH3CN):色譜純。18.1.2 甲酸(HCOOH):色譜純。18.1.3 甲醇(CH3OH):色譜純。18.1.4 鹽酸(HCl)。18.1.5 氨水(NH3H2O)。18.1.6 甲酸銨(HCOONH4)。18.2 試劑配制18.2.1 1 %鹽酸水溶液:取鹽酸1.0 mL用水稀釋至100 mL。18.2.2 5 mmol/L甲酸銨溶液(含0.1 %甲酸):稱取甲酸銨0.315 g,加適量水溶解,加入甲酸1.0 mL,用水稀釋至1000 mL,搖勻,用0.22 m濾膜過濾后備用。18.2.3 5 %氨化甲醇:取氨水5.0mL,用甲醇稀釋至100mL。18.2.4 50 %甲醇溶液(含0.1 %甲酸):取甲醇與水各50 mL,混合均勻,每100 mL混合液中加入甲酸0.10mL。18.3 標(biāo)準(zhǔn)品鉤吻堿、鉤吻堿子標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、精確分子量見附錄E表E.1,純度98 %。18.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制18.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 mg/mL):精密稱取鉤吻堿、鉤吻堿子標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg分別置10 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度。-20 以下避光密封保存,有效期6個(gè)月。18.4.2 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(1 g/mL):分別準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 mg/mL)各0.10 mL,用甲醇溶液(18.2.4)稀釋至100 mL。(可根據(jù)需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整),現(xiàn)配現(xiàn)用。19 儀器和設(shè)備高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜儀,配有電噴霧(ESI)離子源,其他儀器設(shè)備同方法一 5.25.8。20 分析步驟20.1 試樣制備20.1.1 蜂蜜樣品制備與6.1.1項(xiàng)下一致20.1.2 保健湯樣品制備與6.1.2項(xiàng)下一致20.1.3 試樣處理稱取1g(精確至0.01g)制備均勻的樣品于帶刻度100 mL一次性離心管中,加1 %鹽酸溶液至50 mL,渦旋振蕩2 min后超聲處理30分鐘,3000 r/mim離心5分鐘,準(zhǔn)確吸取上清液5.00 mL,置MCX固相萃取小柱,依次用水5 mL、甲醇5 mL淋洗,抽干,用5 mL氨化甲醇溶液(18.2.3)洗脫,收集洗脫液, 40 氮吹濃縮至干,準(zhǔn)確加入1.00 mL甲醇溶液(18.2.4)溶解殘?jiān)^0.22m濾膜,備用。必要時(shí)可根據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋。20.1.4 空白試驗(yàn)除不加試樣外,均按上述步驟進(jìn)行。20.2 儀器參考條件20.2.1 色譜條件a)色譜柱: C18 2.6 m,2.1 mm 100 mm ,或性能相當(dāng)者。b)流動(dòng)相:A為5 mmol/L甲酸銨溶液(含0.1 %甲酸)(18.2.2),B為乙腈(18.1.1),梯度洗脫程序見表4。c)流速:0.30 mL/min。d)柱溫:35 。e)進(jìn)樣量:2 L。表4 梯度洗脫程序表梯度時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%0.009553.0080203.015954.005954.019556.0095520.2.2 質(zhì)譜條件a)離子源:電噴霧離子源(ESI源)。b)干燥氣、霧化氣、鞘氣、碰撞氣等均為高純氮?dú)饣蚱渌线m氣體,使用前應(yīng)調(diào)節(jié)相應(yīng)參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求,毛細(xì)管電壓、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量、碰撞能量、碎裂電壓等參數(shù)應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度,母離子及碎片離子等參考信息詳見附錄F表F.1。21 定性判定按照高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜條件測定試樣(20.1.3)和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(18.4.2),記錄試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中各化合物的色譜峰保留時(shí)間及多級(jí)質(zhì)譜圖,當(dāng)試樣中檢出與標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰(或由標(biāo)準(zhǔn)品建立的譜庫)保留時(shí)間一致的色譜峰,并且與標(biāo)準(zhǔn)品母離子精確分子量誤差不超過百萬分之五,主要碎片離子精確分子量誤差不超過百萬分之十,即可以確定試樣中檢出相應(yīng)化合物。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見附錄G。22 檢測方法的靈敏度和專屬性22.1 靈敏度本方法中鉤吻堿檢出限為140 g/kg,鉤吻堿子檢出限為100 g/kg。22.2 專屬性取空白溶液(20.1.4)進(jìn)樣測定,應(yīng)無干擾。取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(18.4.2)進(jìn)樣測定,各化合物之間應(yīng)無互相干擾。附錄A高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法a. 離子源:電噴霧離子源(ESI)b. 掃描方式:MRMc. 毛細(xì)管電壓:正離子模式:3000 V d. 離子源溫度:150 e. 干燥氣流量:15 L/minf. 霧化氣壓力:25 Psig. 鞘氣溫度:350 ;鞘氣(N2)流量:12 L/min表A.1化合物名稱、分子式、母離子、子離子、碎裂電壓、碰撞電壓及主要碎片離子序號(hào)化合物名稱分子式母離子(m/z)子離子(m/z)碎裂電壓/V碰撞能量/V1鉤吻堿C20H22N2O2323.170.0a/236.138035/252鉤吻堿子C20H22N2O307.2220.1a/180.038035/40注:1.a為定量離子2.本方法提供質(zhì)譜條件為推薦質(zhì)譜方法條件??筛鶕?jù)實(shí)際情況,選擇響應(yīng)信號(hào)強(qiáng)且無干擾的離子對(duì)進(jìn)行檢測,質(zhì)譜參數(shù)亦可根據(jù)實(shí)際可達(dá)到最優(yōu)靈敏度的條件進(jìn)行設(shè)定。附錄B高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)準(zhǔn)色譜圖鉤吻堿提取離子色譜圖鉤吻堿子提取離子色譜圖鉤吻堿、鉤吻堿子提取離子色譜疊加圖 附錄C氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法表C.1化合物名稱、分子式、定量離子、定性離子、保留時(shí)間序號(hào)化合物名稱分子式定量離子 (m/z)定性離子 (m/z)保留時(shí)間(min)1鉤吻堿C20H22N2O2322.0279.0,251.0,108.012.9632鉤吻堿子C20H22N2O306.0263.0,223.0,70.011.670附錄D氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法標(biāo)準(zhǔn)色譜圖鉤吻堿子提取離子色譜圖鉤吻堿提取離子色譜圖鉤吻堿、鉤吻堿子提取離子色譜疊加圖附錄E 鉤吻堿、鉤吻堿子化合物相關(guān)信息表E.1 鉤吻堿、鉤吻堿子英文名稱、中文名稱、分子式、CAS號(hào)、相對(duì)分子質(zhì)量、精確分子量序號(hào)英文名中文名稱分子式CAS號(hào)相對(duì)分子質(zhì)量精確分子量1Gelsemine鉤吻堿C20H22N2O2509-15-9322.4322.16812Koumine鉤吻堿子C20H22N2O1358-76-5306.4306.1732附錄F高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜參考條件a 離子源:電噴霧離子源(ESI)b 掃描方式:正離子MS/MS模式c 毛細(xì)管電壓:正離子模式:3500 V d 離子源溫度:200 e 干燥氣流量:14 L/minf 霧化氣壓力:35 Psig 鞘氣溫度:350 ;鞘氣(N2)流量:11 L/min表F.1化合物名稱、分子式、準(zhǔn)分子離子、保留時(shí)間、碰撞電壓、碰撞電壓及主要碎片離子序號(hào)化合物名稱分子式準(zhǔn)分子離子 (m/z)保留時(shí)間(min)碎裂電壓(V)碰撞電壓(V)主要碎片離子(m/z)1鉤吻堿C20H22N2O2323.17832.973804070.065691.0542195.0683236.10732鉤吻堿子C20H22N2O307.10893.883804070.0654130.0657167.0735180.0811220.1123注:可根據(jù)實(shí)際情況,選擇響應(yīng)信號(hào)強(qiáng)且碎片離子穩(wěn)定且豐富的準(zhǔn)分子離子進(jìn)行檢測。附錄G高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜標(biāo)準(zhǔn)色譜圖鉤吻堿提取離子色譜圖 鉤吻堿子提取離子色譜圖 鉤吻堿、鉤吻堿子提取離子色譜疊加圖 附錄H 高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法表H.1 鉤吻堿、鉤吻堿子在不同基質(zhì)中的回收率基質(zhì)類型蜂蜜酒 保健湯*物質(zhì)種類添加濃度/(g/kg) 回收率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD) 回收率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD) 回收率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)鉤吻堿2889.3%95.9%2.0%3.9%90.3%95.0%1.3%2.9%89.6%93.0%2.5%3.6%5691.0%96.1%2.0%3.4%94.1%98.1%1.1%2.4%90.2%96.0%2.3%3.4%28092.3%98.1%2.0%2.9%96.2%98.1%1.0%2.0%91.6%98.1%2.1%2.8%鉤吻堿子2086.2%91.2%2.2%4.0%89.9%95.1%1.1%3.0%85.9%92.1%1.7%3.8%4088.2%93.2%2.2%3.5%90.2%96.2%1.2%2.8%88.2%94.1%1.6%2.9%20089.6%95.1%2.1%2.8%91.0%97.3%1.1%2.2%90.0%95.4%1.7%2.1%*保健湯為誤用鉤吻作為原材料加水煮熟后的汁液。附錄I 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法表I.1 鉤吻堿、鉤吻堿子在不同基質(zhì)中的回收率基質(zhì)類型蜂蜜酒 保健湯*物質(zhì)種類添加濃度/(g/kg) 回收率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD) 回收率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD) 回收率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)鉤吻堿28084.3 %90.9 %2.0 %4.2 %85.3 %91.2 %2.0 %3.5 %83.9 %91.2 %2.7 %3.8 %56086.2 %90.7 %2.0 %3.4 %88.2 %92.1 %1.8 %3.0 %85.2 %91.6 %2.5 %3.4 %280090.2 %93.6 %2.0 %3.0 %89.8 %93.9 %1.9 %2.6 %88.5 %93.1 %2.1 %2.9 %鉤吻堿子20084.2 %89.6 %2.1 %4.2 %86.9 %90.2 %1.6 %3.2 %85.9 %91.1 %1.9 %3.9 %40086.3 %91.2 %2.3 %3.7 %87. 2%91.3 %1.5 %2.9 %87.3 %92.2 %1.8 %3.5 %200088.5 %92.1 %2.1%2.9 %89.0 %92.3 %1.1 %2.8 %89.7 %92.3 %1.7 %2.9 %*保健湯為誤用鉤吻作為原材料加水煮熟后的汁液。_- 1.請仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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