乙肝病毒DNA的實驗室檢測
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LOREMIPSUMDOLOR 乙肝病毒DNA的實驗室檢測袁立云 1 熒光定量PCR技術(shù)2 乙肝病毒的感染3 HBV DNA與臨床 熒光定量PCR技術(shù) 熒光定量PCR技術(shù) Polymerasechainreaction PCR 聚合酶鏈式反應(yīng) 是一種DNA的快速擴增技術(shù) PCR技術(shù)通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱酶 TaqDNA聚合酶 的作用 經(jīng)過高溫變性 低溫退火 適溫延伸三個步驟在3個小時內(nèi)反復(fù)循環(huán)25 30次 把特定的DNA片段擴增1000萬倍 每個PCR體系含4種主要成分 含有待擴增序列的DNA模板 引物 TaqDNA聚合酶 脫氧核糖核酸三磷酸 dNTP 實時熒光定量PCR技術(shù) 是指在反應(yīng)體系中加入熒光標記 利用熒光信號積累實時檢測整個PCR過程 通過標準曲線對PCR終產(chǎn)物的分析 最終實現(xiàn)對未知的起始模版進行定量分析的一種技術(shù) 是迄今對已知基因序列的核酸測定中最靈敏的方法 熒光定量PCR技術(shù) PCR反應(yīng)過程 d NTPs Taq酶 Primers 反應(yīng)組分 變性 延伸 重復(fù) 退火 循環(huán)24個拷貝 循環(huán)38個拷貝 熒光定量PCR原理 插入染料法SYBRGreenI雜交探針法 最常用 TaqMan TaqMan探針 d NTPs Taq酶 Primers 反應(yīng)體系 變性 l 退火 1 鏈取代 2 水解 3 聚合 4 檢測熒光 l 乙肝病毒的感染 乙肝病毒的感染 一 乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)及特點 HBsAg 是HBV感染的主要標志HBsAb 保護性抗體HBcAg 僅存于感染的肝細胞核內(nèi) 一般不存在于血循環(huán)中HBcAb 非保護性抗體 HBcAb IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)HBeAg HBV復(fù)制及強感染性的指標HBeAb 有一定的保護作用 預(yù)后良好 乙肝病毒的感染 二 HBV DNA與 兩對半 1 兩對半 機體的免疫反應(yīng)狀態(tài) 2 攜帶者 大三陽 小三陽 等免疫學(xué)指標不能反應(yīng)體內(nèi)病毒復(fù)制水平與感染程度 FQ PCR 檢測的是HBV本身的遺傳物質(zhì) DNA 是病毒存在和復(fù)制的最可靠 最直接的指標 3 血清學(xué)指標 不能排除HBV感染 乙肝病毒的感染 5 HBeAg陽性標本HBVDNA檢出率90 左右HBeAg與HBVDNA有著良好的相關(guān)性 4 也可能出現(xiàn)HBsAg HBV DNA 乙肝病毒的感染 乙肝病毒的感染 慢性HBV感染分期及相關(guān)實驗室檢測指標 魯鳳民 莊輝 乙型肝炎實驗室診斷研究進展2009 HBV DNA與臨床 HBVDNA檢測的臨床意義 HBVDNA是HBV存在最直接的依據(jù)HBVDNA是HBV復(fù)制的標志HBVDNA是患者具有傳染性的標志HBVDNA對乙肝兩對半起補充作用HBVDNA是目前判斷乙肝抗病毒藥物療效最敏感的指標HBVDNA可檢測出隱匿性慢性乙型肝炎 有利于獻血員窗口期病毒核酸的篩查和早期診斷 提供直接證據(jù)縮短 窗口期 HBVDNA檢測的臨床意義 調(diào)查表明并不是所有 大三陽 的病人都處于HBV復(fù)制期 具有傳染性 也不是所有 小三陽 的病人HBV都無復(fù)制 因此 要準確知道HBV是否處于復(fù)制狀態(tài) 最準確的方法還是通過檢測HBVDNA來決定 HBVDNA檢測的臨床意義 HBVDNA檢測的臨床意義 HBsAg和HBeAg均陽性而HBVDNA陰性 干擾素或拉米夫定等治療后病毒復(fù)制受抑制 PCR所用引物相應(yīng)的DNA序列發(fā)生突變 此引物與突變DNA不能配對結(jié)合 病毒DNA整合于宿主肝細胞染色體而血中游離HBVDNA很少或缺乏 目前尚無一種能迅速 直接殺死清除乙肝病毒的藥物 最好的抗病毒藥物療效也僅能達到50 左右 目前國際醫(yī)學(xué)界公認的治療慢性乙肝有確切療效的抗病毒藥物主要有兩大類 干擾素 重組人 1b干擾素 2a 2b干擾素等 核苷類似物 拉米夫定 阿德福韋 乙肝的治療 主要包括抗病毒 免疫調(diào)節(jié) 抗炎保肝 抗纖維化等對于HBVDNA 105的患者應(yīng)進行抗病毒治療 乙肝的治療 謝謝- 1.請仔細閱讀文檔,確保文檔完整性,對于不預(yù)覽、不比對內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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